- 可恶!知识不受控制的进入了我的大脑!
- Dr.赛流式小课堂 | 轻松上手流式染色细胞因子实验
- 小道快讯 | 交付中心技能PK大赛奖项花落谁家
- MP工具箱 | 云学堂:一键开启免费学习平台
- 媒体报道丨国产仪器如何跑赢存量市场?
- 东隆科技诚邀您共赴CIOE 2024深圳光博会,见证光电技术革新!
- 滨松:行“专业公司”应行之事
- 参会指南 | 第一届微纳塑料检测及其标准化学术研讨会
- 8月节日 | 为猫咪、狗狗和流浪动物送上专属礼物
- 实验室磷酸根分析仪有效检测磷酸根含量高低
- Aiculture|探索微生物世界:平板计数琼脂的实用指南
- 火力发电|教科书里的奥立龙在线钠表
- 啤酒色度仪如何检测啤酒色度值?
![上海长方光学仪器有限公司](http://yiqi-oss.oss-cn-hangzhou.aliyuncs.com/aliyun/Manage/2018-07-06/20180706-2055212137.jpg)
- 来源:内容来源于网络 浏览量:610次
- 【导读】一、实验目的1.深入了解elisa法测定抗体效价的原理。2.掌握ELISA法测定单克隆抗体效价的方法。二、实验原理ELISA是以免疫学反应为基础,将抗原、抗体的特异性反应与酶对底物...
一、实验目的
1.深入了解elisa法测定抗体效价的原理。
2.掌握ELISA法测定单克隆抗体效价的方法。
二、实验原理
ELISA是以免疫学反应为基础,将抗原、抗体的特异性反应与酶对底物的GX催化作用相结合起来的一种敏感性很高的试验技术。免疫酶技术是将酶标记在抗体/抗原分子上,形成酶标抗体/酶标抗原,称为酶结合物。该酶结合物的酶在免疫反应后,作用于底物使之呈色,根据颜色的有无和深浅,定位或定量抗原/抗体。ELISA法是免疫酶技术的一种,其特点是利用聚苯乙烯微量反应板(或球)吸附抗原/抗体,使之固相化,免疫反应和酶促反应都在其中进行。在每次反应后都要反复洗涤,这既保证了反应的定量关系,也避免了末反应的游离抗体/抗原的分离步骤。在ELISA法中.酶促反应只进行一次,而抗原、抗体的免疫反应可进行一次或数次,即可用二抗(抗抗体)、三抗再次进行免疫反应。
目前常用的几种ELISA方法有:测定抗体的间接法,测定抗原的双抗体夹心法和测定抗原的竞争法等。本实验采用间接法测定单克隆抗体效价。其主要过程为:首先将已知定量抗原吸附在聚苯乙烯微量反应板的凹孔内,加待测抗体,保温后洗涤以除去未结合的杂蛋白质,加酶标抗抗体,保温后洗涤,加底物保温30分钟后,加酸或碱终止酶促反应,用目测或光电比色测定抗体含量。
三、仪器、原料和试剂
仪器
聚苯乙烯96孔酶标板、微量移液管、酶联免疫阅读仪、水浴锅。
原料
单克隆抗体
试剂
1.抗原及酶标记抗体
①抗原:兔抗人IgG(RabbitAanti-humanIgG,CodeNo.A0423);
②酶标抗抗体:兔抗鼠IgG-HRP(RabbitAnti-mouseIgG-HRP,CodeNo.P0260);均为
DAKO公司产品,使用时按照说明书要求稀释。
4.洗涤液(含0.05%Tween20的PBS):1LPBS中加入Tween-20500μL。
5.封闭液(含1%牛血清白蛋白,0.1%Tween20的PBS):10mLPBS中加入100mgBSA,10μLTween-20。
6.底物溶液
①磷酸钠盐缓冲液(0.1mol/LpH6.0):称Na2HPO412H2O2.2g,NaH2PO42H2O6.84g,用蒸馏水溶解,定容至500mL。
②TMB贮液:称60mgTMB溶于10mL二甲基亚砜中,4℃避光保存。
③底物应用液:现用现配,磷酸钠缓冲液10mL,TNB贮液10μL。30%H2O215μL,混匀。
7.终止液:2mol/LH2SO4
四、操作步骤
①抗原包被:兔抗人IgG作为抗原,用包被液l:8000稀释,100μL/孔加入聚苯乙烯96孔反应板
中。4℃放置过一夜。
②洗涤:次日倾去凹孔内的液体,洗涤液洗3次。
③封闭:加l00μL/孔封闭液,室温放置0.5h。
④洗涤:用洗涤液洗3次。
⑤加待测样品(一抗):将含单克降抗体的细胞培养上清在另块板上用PBS连续稀释(按照1:2或1:10),100μL/孔加到已包被的板上,每个样品平行做两份,PBS或空白培养基作为阴性对照,已知样品作为阳性对照。加盖37℃恒温箱温育1~2h。
⑥洗涤:用洗涤液洗3次。
⑦加酶标抗抗体:兔抗鼠IgG-HRP,用封闭液l:8000稀释,100μL/孔,加盖37℃恒温箱温育1h。
⑧洗涤:用洗涤液洗5次,蒸馏水洗2次。
⑨显色:加新鲜配制的底物溶液100μL/孔,室温暗处放置5~30min,显示蓝色。
⑩终止反应、比色:加50μL/孔终止液.颜色变黄;用酶标仪测定450nm处各孔的吸光值,阳性反应的Zda稀释度为待测样品的效价。
elisa试剂盒,进口elisa试剂盒,国产elisa试剂盒,elisa试剂盒,明胶酶谱法试剂盒,白介素Elisa试剂盒,睾酮检测试剂盒,雌二醇检测试剂盒,进口elisa试剂盒-上海信帆生物科技有限公司
仪器网-专业分析仪器服务平台,实验室仪器设备交易网,仪器行业专业网络宣传媒体。
相关热词:
等离子清洗机,反应釜,旋转蒸发仪,高精度温湿度计,露点仪,高效液相色谱仪价格,霉菌试验箱,跌落试验台,离子色谱仪价格,噪声计,高压灭菌器,集菌仪,接地电阻测试仪型号,柱温箱,旋涡混合仪,电热套,场强仪万能材料试验机价格,洗瓶机,匀浆机,耐候试验箱,熔融指数仪,透射电子显微镜。
- 2004-09-07 09:23:11
- 标签:
- 收藏(0) 赞(0) 踩(0)
-
随时了解更多仪器资讯,求购、招标、中标信息实时更新,厂商招商信息随时看。大量、齐全、专业的仪器信息尽在仪器网(yiqi.com)。扫一扫关注仪器网官方微信,随时随地查看仪器用户采购、招标需求!
-
聚乳酸制作的方法流程 聚乳酸 生产是以乳酸为原料,传统的乳酸发酵大多用淀粉质2004-07-23 16:27:07
聚乳酸制作的方法流程 聚乳酸生产是以乳酸为原料,传统的乳酸发酵大多用淀粉质原料,目前美、法、日等国
-
酶联免疫吸附测定法elisa方法原理2004-11-27 09:40:25
酶联免疫吸附测定法(elisa方法)采用抗原与抗体的特异反应将待测物与酶连接,然后通过酶与底物产生颜色反应,
-
ELISA技术测定单克隆抗体效价方法2004-07-16 10:28:52
一、实验目的1.深入了解elisa 法测定抗体效价的原理。2.掌握ELISA 法测定单克隆抗体效价
-
人源化单克隆抗体能杀灭白血病细胞2004-07-23 16:27:07
美国研究人员报告说,他们发现了以一种白血病细胞为靶点并将其直接杀灭的人源化单克隆抗体,这有望为治
-
Biogems CAR T细胞活化抗人CD3单克隆抗体2004-08-13 09:23:10
T细胞活化抗人CD3单克隆抗体(Functional,clone:OKT3)可以与TCR复合物结合,激活T细
-
OKT3 T细胞活化抗人CD3单克隆抗体2004-08-13 09:23:10
T细胞活化抗人CD3单克隆抗体(Functional,clone:OKT3)可以与TCR复合物结合,激活T细
-
Peprotech SAFIRE T细胞活化抗人CD3单克隆抗体2004-08-13 09:23:10
T细胞活化抗人CD3单克隆抗体(Functional,clone:OKT3)可以与TCR复合物结合,激活T细
-
岛津推出论文集《单克隆抗体药物定量分析新视野》2004-08-18 09:23:04
单克隆抗体药物是利用淋巴细胞杂交瘤或基因工程技术制备得到的药物,是生物制药领域的重要组成部分。在抗肿瘤方面,
-
Biogems T细胞活化抗人CD3单克隆抗体促销2004-08-19 09:23:06
T细胞活化抗人CD3单克隆抗体(Functional,clone:OKT3)可以与TCR复合物结合,激活T细
-
Biogems OKT3 T细胞活化抗人CD3单克隆抗体2004-08-19 09:23:06
T细胞活化抗人CD3单克隆抗体(Functional,clone:OKT3)可以与TCR复合物结合,激活T细
信帆生物分享:ELISA技术测定单克隆抗体效价方法
-
您可能感兴趣
![](https://static.yiqi.com/Pingce/img/imgddd.png)
①本文由仪器网入驻的作者或注册的会员撰写并发布,观点仅代表作者本人,不代表仪器网立场。若内容侵犯到您的合法权益,请及时告诉,我们立即通知作者,并马上删除。
②凡本网注明"来源:仪器网"的所有作品,版权均属于仪器网,转载时须经本网同意,并请注明仪器网(www.yiqi.com)。
③本网转载并注明来源的作品,目的在于传递更多信息,并不代表本网赞同其观点或证实其内容的真实性,不承担此类作品侵权行为的直接责任及连带责任。其他媒体、网站或个人从本网转载时,必须保留本网注明的作品来源,并自负版权等法律责任。
④若本站内容侵犯到您的合法权益,请及时告诉,我们马上修改或删除。邮箱:hezou_yiqi