培养方法

KGN 人卵巢颗粒细胞瘤

贴壁，成纤维细胞

编号： 337610

产品形式： 1mL 冻存管 × 2 支、或 T25 × 1 瓶 ；

安全等级： 一级，安全柜或超净台操作

收货须知：收货当天发现异常，请在 24 小时内及时联系客服，逾期视为收货良好；冻存管形式，收货后及时置于-80℃冰箱保存，若长时间不使用，应过夜转移至液氮保藏；T25 形式，收货后先培养瓶原装置于培养箱静养 4h，然后再对细胞进行常规操作。复苏时每管一次用完不得留存，复苏后传一代，即可正常使用。请严格按照本说明操作，否则造成细胞失活等情形，不予提供补发服务。

培养条件：37℃，5%CO₂，CM1-1 培养液。CM1-1 培养液：90%DMEM-H+10%FBS。DMEM-H：DMEM 高糖培养液，含谷氨酰胺，含丙酮酸钠。

复苏步骤：

①新制 100mm 平皿 1 个，含 12mL 上述培养液；

②冻存管从液氮或-80℃中取出，37℃水浴 1~2min,待完全溶解后尽快移入安全柜复苏；

③用无菌吸管吸取溶解液打入新制平皿中，顺时针摇匀；

④放入（37℃，5%CO₂）培养箱中，过夜换液，2-4 天长满。

传代/冻存：将旧培养液吸除，PBS 清洗两遍后，加入 6mL（/100mm 皿）胰酶，在显微镜下观察，期间禁止摇晃培养皿，细胞刚有脱落时，则吸除大部分胰酶，留约 0.5mL，移至培养箱消化，约 3min 取出。

①传代：用 12mL CM1-1 培养液终止消化，轻轻吹打均匀细胞，后可分 3~6 皿培养；

②冻存：用 6mL 冻存液（90%FBS+10%DMSO）终止消化，吹打均匀，分为 6 支冻存管，用程序降温盒于-80℃冻存。

复苏质量记录：根据复苏要求，对以上细胞株进行复苏，记录结果如下：

项目	质量标准	复苏记录
复活性	12h 贴壁，70h 长满 80%	过夜 18h 后观察贴壁，66h 密度达 70%
细胞形态	贴壁，成纤维细胞	CM1-1 培养液中，贴壁，成纤维细胞，梭形
附图
结论	复活性好，且细胞形态无异常，合格

质检员/日期： 杨晴 2017.12.25 审核员签字：曹勋