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一、样品提取 

准确称取均质后的鱼肉 5.0 g 于 50 mL 离心管中，加入三 氯甲烷 15 mL、甲醇 14 mL、6 mL 0.1 mol/L 硫酸，涡旋 2  min，4000 r/min 离心 3 min，取上清液加入 250 mL 的分液 漏斗中，继续加甲醇 14 mL，4000 r/min 离心 3 min，取上 清液合并加入 250 mL 的分液漏斗中；分液漏斗中加入 2 mL 2 mol/L 氢氧化钾，加入 30 mL 二氯甲烷，振摇分层，取下 层液，继续加入 30 mL 二氯甲烷，振摇分层，取下层液合并， 于 40℃旋蒸至近干，加 6 mL 5% 乙酸水溶液溶解，待净化。 

二、SPE 柱净化（Copure® MCX，60 mg/3 mL） 

活化：MCX 固相萃取柱使用前用 5 mL 甲醇、5 mL 5% 乙酸水溶 液活化。 

上样和洗脱：往固相萃取柱中加入待净化液，弃去流出液， 加 5 mL 5%乙酸水溶液、5 mL甲醇淋洗，弃去淋洗液，抽干小柱； 加 15 mL 5% 氨化甲醇洗脱，收集流出液（上样、洗脱过程保 持流速 1 mL/min）。 

重新溶解：洗脱液 40℃下氮吹至近干，用 1 mL 甲醇溶解， 经 0.22 µm 滤膜过滤，供 HPLC 测试。 

三、仪器条件 

设备：Waters Alliance 2695 色谱柱：XB-C18 (4.6 mm×250 mm, 5 µm) 检测器：Waters 2996 DAD 检测器  检测波长：280 nm 流动相：A：甲醇   B：0.5% 高氯酸水溶液 洗脱方式：等度洗脱，A: B=30: 70 流速：1.0 mL/min  进样体积：20 µL 

四、实验结果 

表 1 2.0 m/kg 鱼肉中甲氧苄啶的添加回收结果