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【概述】

针对二甲双胍中的基因毒性杂质N-亚硝基二甲胺，基于赛默飞液相色谱串联三重四极杆质谱TSQ Fortis建立了稳定灵敏的分析方法。该方法使用大气压化学电离源（APCI）进行有效检测分析，在适宜的浓度范围内线性关系良好（r2>0.99）。2ng/mL浓度水平重复性试验结果优异。该方法稳定快速，灵敏度能满足二甲双胍中微量基因毒性物质N-亚硝基二甲胺的日常分析要求。

【实验/设备条件】

1.3 色谱条件

本实验中采用Thermo Scientic Hypersil GOLD Phenyl HPLC分析柱，高载量，峰型好，对NDMA有较好的保留，和API可以做到有效分离。该分析柱基于高纯硅胶设计，用于解决诸多色谱难题，包含C4连接基团，具备中等疏水性，与芳香族化合物具有加强的 pi-pi 相互作用，具有出众的峰形和灵敏度，特别适合苯环和芳环化合物的分析，对芳环分析物具有出众的保留能力和独特的选择性。

1.4 质谱条件

本实验采用全新一代Thermo Scientic TSQ Fortis三重四极杆质谱仪，该质谱仪具备ZY的耐用性，通过主动离子管控技术（AIM+）和基质分离离子引导（MSIG）保持离子路径清洁，确保系统更长时间正常运行；配合多款液相色谱实现日常高通量定量分析。

【样品提取】

1.2 样品前处理

1.2.1 NDMA标准品储备液

N-亚硝基二甲胺标准品，纯度98.5%

用超纯水配置NDMA标准品溶液，并用水稀释至100 ng/mL作为标准品储备液

1.2.2 灵敏度溶液

精密量取对照品溶液适量，定量稀释制成每1mL中含1ng的溶液。

1.2.3供试品溶液制备

取本品药片（或胶囊）细粉适量，精密称定，至50 mL离心管中，精密加入甲醇10mL，涡旋混匀1 min，震荡20 min，

以4500转/分的速率离心10分钟，取上清液滤过，取续滤液即得。

【实验/操作方法】

线性范围及系统适应性测试

配制浓度为1、2、5、10、50、100 ng/mL的标准溶液，采用上述仪器条件进行检测，所得标准曲线线性关系良好，相关系数R2 大于0.99。按照FDA法规进样顺序要求，序列中初始6针标准品溶液（2 ng/mL）相对标准偏差为6.01%，整个序列中标准品溶液偏差小于5%。原料药样品中NDMA的保留时间与标准品偏差小于2%，经测定原料药样品中NDMA的浓度为1.8 ng/mL。

【实验结果/结论】

本文建立了基于三重四极杆质谱TSQ Fortis检测二甲双胍中基因毒性杂质N-亚硝基二甲胺（NDMA）的方法，该方法的灵敏度及重现性完全可以满足FDA要求；实际样品检测时NDMA可与主成分有效分离，保证结果准确性。同时，针对制药行业仪器控制及数据处理软件合规性要求，所有数据完全采用符合法规要求的Chromeleon软件进行处理，从而可为用户提供NDMA检测的完整解决方案。

【仪器/耗材清单】

1.1 仪器与试剂

1.1.1 Thermo Fisher Vanquish Binary Flex液相色谱仪1.1.2

Thermo Fisher TSQ Fortis三重四极杆质谱仪

1.1.3 Thermo Scientific Hypersil GOLD Phenyl色谱柱（P/

N：25903-104630）

1.1.4 甲醇，LCMS级（Fisher A456-4）

1.1.5 乙腈，LCMS级（Fisher A955-4）

1.1.6 水，LCMS级（Fisher W6-4）

1.1.7 甲酸，LCMS级（Fisher A117-50）

1.1.8 Titan3, 17mmPVDF过滤器，0.22um（P/N：42213-PV）