细胞培养的这些细节不能忽视!
细胞培养是生物研究的核心,是在其自然环境以外的受控条件下培养和维持细胞的过程,对研究基础细胞生物学和生物化学、研究疾病和开发新疗法等多个研究领域都至关重要。
全新推出《细胞培养指南》提供从细胞选择到细胞处理和转导,整个细胞培养过程的分步指南,旨在帮助您充分利用细胞培养实践。
今天,就带大家先来了解一些细胞培养中的基础内容,更多内容请扫描上方二维码下载指南。
细胞的类型与特点
为了实现成功的细胞培养,须分析各类可用细胞的优缺点,了解哪类细胞能提供最有益的产出。
贴壁、悬浮培养
贴壁细胞
贴壁细胞在培养皿上单层生长。在传代过程中,必须使用分离剂(如胰蛋白酶或细胞消化液)将这些细胞分离;而通常情况下,它们会在接种后2-4小时内重新粘附到孔板上。
悬浮细胞(即淋巴母细胞样细胞)
不会粘附在培养皿表面,而是悬浮在培养基中。它们通常成团生长,尤其是在密度较高处。
原代细胞、永生化细胞系和iPSC
原代细胞
从其原生组织中直接分离并体外培养。常用的原代细胞包括通过皮肤活检直接从患者体内分离出的成纤维细胞、从胚胎期或出生后的小鼠或大鼠的大脑特定区域离解出的神经元,以及从患者血液样本中分离出的红细胞。
永生化细胞系
与原代细胞一样来源于组织样本,但已经历过永生化,细胞系可以多次传代而不丧失活性,并绕开与原代细胞相关的伦理规范。细胞系通常易于培养,还可在液氮中冷冻以长期储存,并在日后复苏(解冻)以继续使用。
iPSC
诱导多能干细胞(简称iPSC或iPS细胞)衍生自血液或皮肤,已被重新编程为多能性干细胞(或胚胎样干细胞),这意味着它们可以分化成任何类型的人体细胞。在不同的发育阶段添加特异性生长因子可以使细胞分化成所需的类型。
细胞培养的成功因素
细胞培养中的许多挑战都源于不良的液体处理技术,而通过优化移液器选择,减少所需的处理步骤并规范移液操作,可以改善或避免这些挑战。
以下几个特点需特别注意:
01 无菌性
细胞培养中使用的液体处理设备和耗材可能会滋生许多微生物。遵循以下建议可降低液体处理设备与细胞之间交叉污染的概率:
? 细胞培养中使用的设备(包括单通道、多通道移液器和连续分配器)应专用于其对应区域
? 在细胞培养设施中使用任何移液器之前,先用70%的酒精对其移液端进行消毒,并尽可能使用无菌滤芯吸头
? 计划定期清洁仪器的内部组件
? 定期对仪器进行维修保养,以验证其内部组件的完整性(即确保无腐蚀、破损组 件等)
? 定期更换电动助吸器的滤芯
02 可重现性
培养参数、细胞处理、细胞接种和细胞活性也会影响细胞培养实验的可重现性。对于仪器,用户必须验证以下几点:
制造商技术规格:系统误差和随机误差
? 移液器的完整性:确保无部件缺失或破损、内部腐蚀等
定期校准服务:服务时间间隔越短,早发现破损情况的几率就越高,移液器的使用也就越符合规范
03 速度和效率
在细胞培养环境中,务必迅速操作以保持细胞活性并避免细胞过长时间暴露在次优条件下。这对于精细细胞系或已经受到压力的细胞尤其重要!(例如从脑组织中分离出的原代神经元)
细胞培养液体处理工具
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