什么是生物缓冲液?分子生物实验中怎样选择缓冲液?
生物缓冲液由弱酸(质子供体HA)及其共轭碱(质子受体A-)组成,在水中,HA 可分解为 A-和 H+,H+与水反应形成 H3O+,在缓冲水溶液中,H3O+、HA和H+相互平衡存在,缓冲机制由两个可逆反应组成,其中质子供体和质子受体的浓度相等。
在实验过程中通过酶活性将强酸或碱引入该系统时,来自引入的酸或碱的新离子(H+或OH-)被缓冲液吸收,pH值保持稳定防止蛋白质结构和功能的改变。在一些生化实验中,缓冲液起着至关重要的作用,这也可能是导致你实验失败的原因,生物缓冲液的种类众多,需根据实际应用选择合适的体系,分子生物实验中所用的缓冲液,对缓冲能力和对生物的抗干扰要求较高,下面我们来看一看分子生物实验中常用的TRIS缓冲液有什么特点。
Tris(三羟甲基氨基甲烷)可算是生化实验中常使用的缓冲液,尤其在分子生物实验中常使用。因为它有极好的缓冲能力、毒性低、对生物反应的干扰极低,而且纯度很高。 Tris-HCl缓冲液的优点是: ①因为Tris碱的碱性较强,所以可以只用这一种缓冲体系配制pH范围由酸性到碱性的大范围pH值的缓冲液;②对生物化学过程干扰很小,不与钙、镁离子及重金属离子发生沉淀。
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