原代培养
1. 用PBS液漂洗盖玻片的原代细胞3次,每次30s;
2. 在室温中用3%甲醛/PBS固定20min;
3. 用PBS液再漂洗3次,每次1min,Z后用滤纸吸干多余的PBS液;
4. 投入冷丙酮中(-10—-20℃)7min;
5. 用PBS漂洗3次,每次1min,Z后用滤纸吸干多余的PBS液;
6. 向直径6cm的干净碟皿ZY滴一滴浓度为0.1—0.2mg/ml的一级抗微管蛋白抗体,令小盖片细胞面向下扣在抗体液上,覆以皿盖,于37℃生化培养箱中放置45min—1h;
7. 向碟皿内匀速缓慢滴加PBS,令盖片浮起在液面,用镊子夹出,按步骤3处理;
8. 向干净碟皿ZY滴一滴浓度为0.1—0.2mg/ml的荧光标记的二抗,其后操作按步骤6进行;
9. 按步骤7和3操作;
10. 滴pH8.5的90%的甘油/PBS少许于载玻片上,把小盖片的原代细胞面覆在大盖片上;
11. 将盖片置于荧光显微镜下观察;
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