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- 笑傲阿萨德 2017-04-30 00:00:00
- 荧光原位杂交探针和荧光探针有什么区别 荧光原位杂交技术问世于70年代后期,其曾多用于染色体异常的研究,近年来随着FISH所应用的探针钟类的不断增多,特别是全Cosmid探针及染色体原位YZ杂交技术的出现,使FISH技术不仅在细胞遗传学方面,而且还广泛应用于肿瘤学研究,如基因诊断基因定位等 。原有的放射性同位素原位杂交技术存在着较多缺点,诸如每次检验均 需重新标记探针,已标记的探针表现出明显的不稳定性,需要较和时间的曝光时间和对环境的污染等。在观察结果时,需要较多的分裂进行统计学分析。此外,由于放射性银粒和染色体聚集的不同平面,可能引起计数上的误差等。与之比FISH则具有: ①操作操作简便,探针标记后稳定,一次标记后可使用二年; ②方法敏感,能迅速得到结果; ③在同一标本上,可同时检测几种不同探针; ④不仅可用于分裂期细胞染色体数量或结构变化的研究,而且还可用于间期细胞的染色体数量及基因改变的研究等特点。
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荧光原位杂交(以下简称FISH)是在放射性原位杂交技术基础上发展起来的一种非放射性分子生物学和细胞遗传学结合的新技术,是以荧光标记取代同位素标记而形成的一种新的原位杂交方法。
FISH技术系用荧光基团标记特异性探针,再将标记了荧光信号的探针与待测样本进行原位杂交,在荧光显微镜下对荧光信号进行辨别和计数。Z终通过荧光信号的颜色和数目的异常与否,达到对染色体疾病诊断、恶性肿瘤预测及预后判断的目的。
广州迈景基因医学科技有限公司Z近有需要做荧光原位杂交观察,需要一整套的设备。经过多方的咨询和网上查找,Z终找到了广州明美。明美的工程师在了解到其需求之后,向其推荐了明美研究级荧光显微镜MF43、我司自主研发的高灵敏度相机MC25以及明美自主开发的荧光原位杂交分析系统软件M-FISH。工程师现场给客户演示使用效果之后,客户表示对观察效果以及软件做出的分析报告很满意,效果和进口产品差不多,而且价格比进口产品更加便宜,立即表示了购买需求。
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FISH技术系用荧光基团标记特异性探针,再将标记了荧光信号的探针与待测样本进行原位杂交,在荧光显微镜下对荧光信号进行辨别和计数。Z终通过荧光信号的颜色和数目的异常与否,达到对染色体疾病诊断、恶性肿瘤预测及预后判断的目的。
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- 多色荧光原位杂交技术(M-FISH)的基本原理及应用
荧光原位杂交技术(fluorescence in situ hybridization,FISH)是根据核酸碱基互补配对原理,用半抗原标记DNA或者RNA探针与经过变性的单链核酸序列互补配对,通过带有荧光基团的抗体去识别半抗原进行检测,或者用荧光基团对探针进行直接标记并与目标序列结合,利用荧光显微镜直接观察目标序列在细胞核、染色体或切片组织中的分布情况。M-FISH则是在荧光原位杂交基础上发展起来的新技术,它不仅具有FISH的优点,而且克服了FISH的许多局限,其特点是可将多次繁琐的FISH实验和多种不同的基因定位在一次FISH实验中完成。M-FISH能同时检测多个基因,分辨复杂的染色体易位和微小缺失,区分间期细胞多倍体和超二倍体等。M-FISH用激发光谱和吸收光谱不同的荧光索按一定调色方法标记不同的探针,从而对不同靶DNA同时进行定位和分析,并能对不同探针在染色体上的位置进行排序。
探针荧光素颜色调配的方法有非调色法,混合调色法和比例调色法。这3种调色法中,比例调色法只需要几种荧光素就可标记多种探针,因而更有发展潜力。染色体描绘、比较基因组杂交、光谱染色体自动核型分析、交叉核素色带分析及多彩色原位启动标记等技术都是在M-FISH的基础上发展起来的。
与其他原位杂交技术相比,多色荧光原位杂交具有很多优点,主要体现在:
①宜于多靶杂交,可对同一个细胞学制片进行多个探针杂交;
②通过在同一个核中显示不同的颜色可一次性显示全部的染色体数量或结构的变化;
③能检测到传统显带方法不易发现的亚纤维染色体畸变不仅能够鉴定隐藏的易位和复杂的重拍,而且可以分析与肿瘤发生相关的重要标记染色体及其基因。
目前该项技术目前已广泛应用于动植物基因组结构研究,染色体精细结构变异分析,病毒感染分析,微生态分析,肿瘤遗传学和基因组进化研究等许多领域。
明美MFISH荧光原位杂交分析系统 就是一款专为荧光显微图像的捕捉和处理而开发的实用图像软件。它搭配不同波段光谱滤光片的荧光显微镜以及高灵敏度的相机可对多种探针信号进行检测成像,还有区域自动曝光,自动着色,信号点增强,一键合成多色荧光通道图像,自定义各种颜色的探针,多焦面信号景深叠加,多层图像位置偏移较正等功能。
深圳禾正医院的老师采用了明美的MFISH荧光原位杂交分析系统,检测中用her2/cep17的比值来测定是否有此原癌基因扩增,当HER2/CEP17比值≥2.0时,为HER2阳性;此外老师还定制了双通道荧光模块,可以同时在目镜下观察到红绿两种颜色的信号点,大大提高科室的工作效率。
(来源:http://www.mshot.com/article/903.html 广州市明美光电技术有限公司)
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