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- 怀疑的兔子丶 2016-07-12 00:00:00
- 1、将各方面的信息记录下来。 2、整理成合适的文件。 3、不断补充文件,不断不同各项措施。 通过时间的进行,体系会越来越完善。
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- 大气环境监测网格化体系建立存在难点
大气环境监测网格化体系建立是大气环境监测工作中的重要部分之一。近年来,对于大气环境监测数据的真实性、准确性、可比性、一致性等提出了更高要求,同时采用了责任到人的问责方式。这也使得大气环境监测网格化体系建立得到了足够的重视。部分地区已经建立了以大气监测站为基础,非国标微型空气质量监测站为辅助的大气网格化监测体系,并已经应用到了日常的大气环境监测、排放工作中。但在某些地区,大气环境监测网格化体系建立工作发展相对迟缓,可能面对以下几个难点亟待解决。
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由于预算有限,所以网格化体系建立需要经过合理的规划与配置。建多少大气监测站、建多少空气监测微站、配置多少移动监测设备等,成为难点之一。需要配置多少个点位,要花多少钱,想要达到的监测目的和结果是什么。仪器设备选择进口的还是国产的,一系列问题都与合理规划挂钩。
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围绕大气环境监测网格化体系缺乏大量的专业操作型人员。包括:各类仪器设备的使用、采样、样本保存、数据处理、数据分析、软件系统使用、日常维护、应急处理等均需要经过大量及专业的培训。在某些中小城市,每个大气监测站中只有个别的专业型人才,从而影响到了大气环境监测工作的GX性和准确性。
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需要提高专业人员的质量管理意识,安排合理的大气监测日常进程,强化了解监督、评审、审核等工作。以保障基础数据的全面、准确、客观、真实。并且需要加强调动人员积极性,提高工作效率,形成制度化的质量管理体系。
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专业的仪器供应商可以针对需求提出配套的解决方案。这类解决方案通常经过了实际项目的验证,并获得了良好的效果。同时专业的仪器供应商不会仅从出售设备的角度出发,而会从达到需求方的目的作为出发点,来进行项目的规划及仪器设备、功能的相关配置。简单的来说,就是让需求方买到想买的仪器设备。同时,专业的仪器供应商还有着专业的维护团队,能够应对仪器设备在实际应用中所遇到的各类问题。
大气环境监测网格化体系建立可以有助于整体区域内的环境空气质量监测及管理。通过简单、可视的端软件平台和手机等,管理方均可以轻松掌握大气环境状况。同时该类系统通常可以配置视频监测系统,当这些视频监测点位被设置于区域内的高点之后,就可以起到远程观察的效果。使得异常数据、超标数据验证、污染源定位等工作变得相当轻松。而这类配置方式已经在部门地区进行了实际的应用,并取得了良好的效果。
- 助力现代化疾病预防控制体系建设,莱伯泰科一直在行动
7月1日,由国家发展改革委、卫生健康委、中医药管理局和国家疾病预防控制局四部门共同编制的《“十四五”优质GXYL卫生服务体系建设实施方案》发布,方案提出,ZY预算内投资将ZD支持疾病预防控制体系、国家重大传染病FZ基地和国家紧急医学救援基地建设,推动地方加强本地疾病预防控制机构能力、YL机构公共卫生能力、基层公共卫生体系和卫生监督体系建设等工作。
方案中明确了现代化疾病预防控制体系的建设任务,将加强ZG疾病预防控制ZX建设,依托高水平省级疾控ZX建设食品安全风险评估ZD实验室、剧毒化学品和易制毒易制爆化学品库及其检测实验室等,补齐各级疾病预防控制机构基础设施和实验室设备配置缺口等。
随着国家疾病预防控制局的成立,我国疾病预防控制体系日趋完善,作为体系中重要的一员:疾病预防控制ZX,承担了大量的工作,除了传染性疾病、慢性非传染性疾病等的预防与控制,突发公共卫生事件应急处置和疫情报告和信息管理,居民的健康教育与健康促进工作外,还承担着食品卫生、环境卫生、放射卫生和职业卫生等健康危害因素的监测,重大政治、经济、社会活动的公共卫生保障、应急等任务。
北京莱伯泰科仪器股份有限公司作为国内分析仪器设备生产厂家,从成立之初便一直致力于为疾控系统提供全面的实验室检测解决方案,满足疾控系统对于食品和环境的检测需求,为保障人民公共卫生安全、捍卫食品安全、建设现代化疾病预防控制体系贡献力量。莱伯泰科积极参与疾控系统食品安全标准的制修订,同时参照相关检测标准,结合现有前处理设备和分析仪器,ZZ形成数套处理解决方案,用于食品中农药残留、兽药残留、添加剂、营养元素、重金属元素等,环境样品中VOC、SVOC等检测项目。
莱伯泰科有机前处理解决方案
1、全自动上样、分离和收集样品:GPC1000全自动凝胶净化系统
仪器特点:可全自动批量完成样品上样、分离净化、目标组分收集等操作,创新不锈钢净化柱设计、完全上样系统以及独立的三维机械进样和收集平台,净化效率更高,使用更方便,广泛应用于环境、食品、农产品等领域。
参考标准:HJ 805-2016 、HJ 835-2017 、HJ 834-2017、HJ 1023-2019、HJ 951-2018、HJ 891-2017……
2、最多可同时运行8通道:SPE1000全自动固相萃取系统
仪器特点:可自动完成固相萃取柱的活化、样品过柱、清洗、氮气干燥、洗脱等操作,处理样品量大,自动化程度高,整套系统密封环保。
参考标准:
3、快速溶剂萃取仪
Flex-HPSE全自动GX快速溶剂萃取仪
仪器特点:在填充好两个样品之后,即可萃取与填充同时进行,所有样品填充好后,无需实验人员值守,48个样品只需一夜,且收集瓶与同品牌平行浓缩仪通用,不用转移样品,只需将整架收集瓶转移至平行浓缩仪即可。
HPSE UltraGX快速溶剂萃取仪
仪器特点:仪器可以六通道同时运行同一个方法,也可双通道一组,运行不同的三个方法, 同一软件控制。例如,客户突然来了一批急样或者考核样,要做多种不同的项目,使用不同的提取溶剂,HPSE Ultra可支持不同项目同时做。
参考标准:HJ 783-2016、HJ 782-2016、HJ 956-2018、GB 23200.9-2016、GB/T 23376-2016、GB/T 22996-2008……
4、高通量大体积快速浓缩: M64全自动高通量平行浓缩仪、MultiVap-10定量平行浓缩仪、MVP真空平行浓缩仪
仪器特点:
M64全自动高通量平行浓缩仪,具备氮吹针随液面自动下降功能,多通道运转,可有效提高浓缩效率,以正己烷为例,用一个通道同时浓缩9个7mL的正己烷样品,所用氮气量仅约为4.5min×4L/min=18L,若一般市面所售40升氮气瓶可装6m³气,则一瓶氮气可供MV64多通道平行浓缩仪浓缩3000个样品,大大节省了耗气量。
MultiVap-10定量平行浓缩仪,十个样品通道可同时工作及任意组合,随时启停,随时追加或移除,灵活方便;可配用200mL及50mL浓缩杯,且两种浓缩杯可同时使用,并具有蒸干模式。
MVP 真空平行浓缩仪,具备批处理能力,ZD可支持48位50 mL带尾管浓缩杯的同时浓缩;浓缩杯可与同品牌快速溶剂萃取仪、凝胶净化系统、固相萃取仪通用;独立盖板设计,无需暂停仪器即可随时单独添加和取出某个样品,不影响其他样品的浓缩。
本方案中列举了四款疾控系统实验室中常用的有机前处理设备,如果您需要详细的方法,或者对我们的产品感兴趣,请即刻致电400-070-8778,我们将竭诚为您服务!
关于莱伯泰科
北京莱伯泰科仪器股份有限公司(股票代码:688056.SH)成立于2002年,公司自成立之初便专注于科学仪器设备的研发,立志为环境检测、食品安全、YL卫生、疾病控制、材料研究等众多基础科学及行业应用提供实用可靠的实验室设备和整体解决方案。公司发展至今已拥有各类ZL及软件著作权100余项,持续通过高新技术企业认证,连续多年被业内媒体评为ZG仪器仪表行业“ZJ影响力企业”。产品服务涵盖实验室分析仪器、样品前处理仪器、实验室设备、YL设备、实验室耗材和实验室工程建设等。目前,公司产品已销往90多个国家,共计服务客户近3万家。如需了解莱伯泰科的详细信息,请访问http://www.labtechgroup.com/。
- 军事战略体系
- 军事战略体系的具体含义以及分类,实战运用效果
- 我国关于VOCs污染治理政策法规体系有哪些?
VOCs污染治理政策法规体系
我国VOCs污染治理工作目前还处于起步阶段,近年来的ZD工作就是制定和完善相关法律法规和管理制度体系。
1.《中华人民共和国大气污染FZ法》
在新修订的《大气污染FZ法》中,对VOCs的污染治理基本确定为两个方面,一是源头控制,如生产、销售、使用含挥发性有机物的原材料和产品的,其挥发性有机物含量需符合规定的限值标准,鼓励生产、销售和使用低毒、低挥发性有机溶剂;二是排放控制,如产生含挥发性有机物废气的生产和服务活动,应当在密闭空间或者设备中进行,并按照规定安装、使用污染FZ设施,无法密闭的,应当采取措施减少废气排放。
2.《排污许可证管理暂行办法》
《排污许可证管理暂行办法》提到国家实行排污许可管理制度,其中,排放工业废气的单位应当取得排污许可证,向县级以上环境保护主管部门申请取得;禁止无排污许可证或者违反排污许可证排放大气污染物。下一步排污许可证制度会逐渐推行开,今年国内很多地区已经进行试点,这项工作可能没有这么快完成,因为涉及的面太广,但这是下一步必须要做的。
3.《环境保护主管部门实施按日连续处罚暂行办法》和《企业事业单位环境信息公开暂行办法》
2015年1月1日,环保部连续发布了这两个文件,特别是《环境保护主管部门实施按日连续处罚暂行办法》公布后,在社会上引起了极大的震动,被认为是目前环保部出台的有关环境管理法规中严格的一个。今年以来,被报道的处罚案例已有很多,该制度可能会对整个VOCs污染治理工作起到极大的推进作用。
4.《挥发性有机物排污收费试点办法》
该办法于2015年10月1日起实施,首先在石油行业和包装印刷行业进行试点,其中包装印刷行业主要是针对包装装潢印刷,其他形式的印刷不在此次征收范围内。
办法规定了VOCs污染当量值是0.95千克。各省市区可以根据自己的情况自行上调费率或扩大试点行业。对于包装印刷行业来说,让人关心的是如何进行VOCs计量,办法中规定了计量办法,即物料衡算法,根据油墨、胶黏剂、涂布液、润版液、洗车水、稀释剂中VOCs的量来进行物料衡算。对于已经安装VOCs处理装置的,VOCs的去除量以实际检测和溶剂的回收量进行核减。核算期内现有企业VOCs处理装置未按照治理工程的设计要求定期更换活性炭或者催化剂的,视为未安装任何处理装置,VOCs去除量为0。对于可能无法获得VOCs含量数据的物料,VOC含量按规定的系数值取值。例如,塑料里印油墨白色的系数值为65%、白色以外的色墨的系数值为70%,塑料表印油墨的系数值为60%,纸质凹版印刷油墨的系数值为60%,柔版印刷油墨的系数值为60%,丝网刷油墨的系数值为45%,金属印刷油墨的系数值为45%,商业轮转印刷油墨的系数值为30%,单张纸印刷油墨的系数值为5%;胶黏剂的系数值为30%;涂布液的系数值为40%;润版液的系数值为20%;洗车水的系数值为17%。
有惩就有奖,目前很多地区都在实施VOCs污染治理奖励措施,北京市、上海市、天津市已经制定相关制度。其中,上海市的补贴额度有,对于256家ZD企业,设备泄漏检测与修复(LDAR)项目按LDAR系统的实施规模统计,每个密封点补贴10元,单个密封点仅可补贴一次;末端治理项目按末端治理装置的有效处理规模统计,单位处理规模(以标态立方米/小时计)补贴20元;VOCs在线监测项目按在线监测装置数量统计,每套装置一次性补贴20万元。对于1744家一般企业,按照每家企业20万元的定额标准实施补贴。
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前言
聚合酶链式反应(PCR)是用于扩增特定DNA片段的分子生物学实验技术。实时荧光定量PCR(以下简称qPCR)作为第二代PCR技术,自1996年推出以来,已经广泛应用于基因表达分析、病原微生物检测、动植物育种等许多研究领域,为了获得最理想的检测结果,qPCR从样本采集、核酸提取、cDNA合成到上机检测的流程有许多可以优化的参数。
qPCR实验的工作流程首先需要确定研究的目的,根据实验设计规划好实验分组、重复次数等细节。接下来分为样本准备和引物探针验证两个重要的步骤。样本准备主要是核酸提取逆转录等步骤,引物探针需要去测试特异性和效率。接下来需要使用qPCR仪来对样品中的目的核酸进行扩增qPCR结束后根据实验目的对目的核酸进行相对或者绝对定量。接下来讲的qPCR体系优化会围绕着这个流程展开。
1.样本的采集与处理
首先,提前做好功课,了解样本的不同分型,或者了解详细的细胞分群。如果条件允许尽可能覆盖所有的组织类型或者细胞类型。其次,尽可能增加样本数量,也就是生物学重复,从而更客观地反映生物变异程度。另外,qPCR实验也需要有技术重复来降低误差。
采样是需要严格规划的过程,比如材料的时效性、珍贵程度等,都要纳入考量范围。样品要尽量新鲜,取样尽可能快速。戴手套操作,防止污染。如果不马上提取核酸,需要-80°C保存,并尽快处理。
2.核酸的提取和检测
模板的质量直接影响到检测性能。核酸提取需要有效地将RNA或DNA从其他混合物中分离。RNA样本中的污染物——基因组DNA、DNA结合蛋白、酚类化合物或在提取RNA过程中引入的外源杂质(如手套中的粉末)——都已被证明会抑制下游实验,如逆转录和PCR扩增。核酸提取需要使用无菌无酶的试剂耗材,避免RNase或DNase污染,并对内源RNAse或DNAse进行有效抑制;多糖多酚样品要考虑多糖多酚杂质的有效去除。低温保存防止RNA或DNA降解。
降解或不纯的RNA会限制逆转录反应的效率,降低产量。部分降解的RNA可能不能给出准确的基因表达结果。对于基因的定量,必须使用高质量的RNA,这意味着需要非常仔细地检查RNA的浓度和质量。可采用高分辨率琼脂糖凝胶检测核酸质量和分光光度法(A260/A280=1.8和A260/A230=2.0)检测核酸纯度和浓度。
3.cDNA合成
RNA 质量对 cDNA 合成结果会产生重要影响。并且RNA 很脆弱,容易降解。为了保证 RNA 的完整性,我们需要非常注意,比如在冰上操作,用 RNase-free 的枪头和离心管,减少操作时间等。在反应体系中加入 RNase 抑制剂也能有效防止 RNA 降解。
如何评价样品中的杂质对逆转录的影响呢?可以梯度稀释后绘制标准曲线,如果低浓度的样品点数值偏大比较明显,基本可以判定杂质影响显著。
不同厂家的反转录试剂会有差异,对RNA中的杂质耐受程度也不同。逆转录酶在整个反转录体系中具有关键性影响。除了活性以外,逆转录酶的热稳定性同样很重要,在较高温度下进行逆转录,能够减少 RNA 的二级结构,增加逆转录的效率。
除了掌握 RNA 的完整性之外,反转录之前还需要对 RNA 浓度进行测定。一般反转录试剂盒会对上样量有要求,建议 total RNA 上样量小于 5 μg。超过这个范围,会使反转录产物产生偏好性 (表达丰度高的基因优先被反转录) 而造成定量结果不准确。
逆转录出来的cDNA可以直接放在4°C保存,若长期不用,可分装,然后-20°C保存。
4.qPCR方法的建立
① 定量方法
绝对定量:检测起始模板数的精确拷贝数,需要标准品构建标准曲线。
标准品可以是纯化的基因组DNA、质粒DNA或者体外转录RNA(cDNA),其作用是生成标准曲线,建立Ct值与浓度之间的线性关系。
标准品与待测样品的PCR效率一致,且接近100%,与样品的性质尽可能接近,与样品相同的扩增条件(PCR体系、耗材、同一次扩增),大于或等于5个梯度稀释的标准品。
相对定量:在一个样本中,目的基因相对于内参基因的量的变化。
内参基因选择建议筛选不少于三个内参基因来归一化RT-qPCR数据。目的是消除外部样品偏差,例如总RNA含量,RNA稳定性,酶效率或样品装载量的变化。
对候选的内参基因进行qPCR 实验,得出Ct平均值以及 Ct值的标准偏差,选择SD最小的基因作为实验内参。可通过geNorm 、 BestKeeper 、 NormFinder、RefGenes 等工具来评估您的内参基因。
② 荧光标记方法
染料法:利用能与DNA双链结合的染料来实现,如SYBR Green I。该染料在游离状态下呈现微弱的荧光,一旦与双链DNA的双螺旋小沟结合,其绿色荧光增强约1000倍。因此其总的荧光强度与双链DNA含量成正比,利用这一关系可以反映生成的PCR产物的量。
TaqMan荧光探针:是一种寡核苷酸探针,荧光基团连接在探针的5'末端,而淬灭剂则在3'末端。PCR扩增时在加入一对引物的同时加入一个特异性的荧光探针,探针完整时,报告基团发射的荧光信号被淬灭基团吸收; PCR扩增时, Tag酶的5'-3'外切酶活性将探针酶切降解,使报告荧光基团和淬灭荧光基团分离,从而荧光监测系统可接收到荧光信号,每扩增一条DNA链,就有一个荧光分子形成,实现了荧光信号的累积与PCR产物形成完全同步。常用的荧光基团是FAM,TET,VIC,HEX。
引物探针设计可以参考Gene π网站.
③ 引物扩增效率验证
标准曲线是评估PCR扩增效率最可靠和稳定的一种方法,该方法涉及到制作一系列的样品来控制目标模板的相对数量。最常用的是10倍梯度稀释样品,采用标准qPCR程序进行扩增获得Cq值,最后根据各样品浓度及相应的Cq值绘制标准曲线,得到线性方程Cq= -klgX0+b,扩增效率E=10(-1/k)-1。利用qPCR进行定量分析时,要求扩增效率范围在90%-110%(3.6>k>3.1)。
④ 反应体系优化
▶ 根据仪器类型,选择合适的耗材和qPCR试剂。
▶ 每对引物先进行预实验,确定特异性以及最适浓度。
▶ 配置不同的PCR反应体系,选择每个组分合适的浓度。
▶ 设置温度梯度测试引物最合适的退火温度。
▶ 实验设置NTC、NRT、 NEG和POS等对照组,来监控实验体系或污染。
实时荧光定量PCR常见问题分析
1.可疑的扩增曲线
真正的扩增曲线,有特征的形状:首先背景信号,然后是三个增长阶段(指数增长期、线性增长期和平台期)。
如果不是同时具有特征性的三个增长阶段,没有典型的指数增长期,那就不存在扩增。
平台期很低也是常见的异常扩增曲线。可能是模板的浓度太低。通常如果模板的起始浓度太低, 反应体系中会形成大量的引物二聚体。大量引物二聚体的形成使得引物很快消耗完,从而造成扩增曲线的平台期很低。这种情况可通过调整引物和模板的比例。
2.异常的荧光信号
NTC出现荧光信号---引物二聚体形成或气溶胶污染,查看熔解曲线是否为单一峰。
3.扩增效率过高或过低
过低的扩增效率(<90%)可能存在的原因:
▶ 移液器校准不良或移液技术差。
▶ 不正确的稀释导致标准曲线出现错误。
▶ 引物设计不好或扩增子具有二级结构。
▶ 标准曲线动态范围太小。
▶ Taq酶无活性或活性降低。
▶ 样品抑制。
过高的扩增效率(> 110%)可能存在的原因:
▶ 移液器校准不良或移液技术差。
▶ 不正确的稀释导致标准曲线出现错误。
▶ 引物二聚体或非特异性扩增。
▶ 标准曲线动态范围太小。
▶ 基因组DNA污染。
4.重复性差
为精确定量,对每个样品都要做重复实验,复孔之间的Ct值不应超过0.5,标准偏差不大于0.2,这样,实验结果就有很好的精确度。
造成重复性差的原因:
▶ 加样误差(操作或者加样器导致)。
▶ 没有将试剂和样品充分混匀。
▶ 低拷贝的目的片段→泊松分布。
▶ 基线阈值设定不合理。
Cielo™实时荧光定量PCR系统
Harness of the power of qPCR
☑ 数据可靠性:连续1000次实验后,结果高度一致。
☑ 应用灵活性:提供多种qPCR应用分析。
☑ 流程智能化:中英文用户界面,触控操作,可多机联用。
☑ 在线便捷性:主机可独立运行qPCR程序,数据可USB、Wi-Fi等网络传输。
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