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ANA-HEp2免疫荧光诊断一般用什么显微镜?

广州市明美光电技术有限公司 2023-05-23 14:41:23 93  浏览
  • 抗核抗体(antinuclear antibodies,ANA)是自身免疫病(autoimmune diseases,AID)重要的血清自身抗体,ANA的检测结果对AID的诊疗及病情评估具有重要作用。ANA是以真核细胞各种成分为靶抗原的非器官特异性自身抗体。间接免疫荧光法是先把特异性抗体跟标本中的抗原反应,然后再用荧光素标记抗体跟之前的复合物中抗体结合,经过洗涤后在荧光显微镜下做观察,从而达到检测未知抗体或抗原的目的,通过该检测快速对自身抗体和病原体做检测和鉴定,比如可以用于筛查自身免疫性疾病、流感以及狂犬病等。

    近期有位客户需要一台荧光生物显微镜诊断ANA-HEp2染色病理片的阳性,明美销售工程师推荐荧光生物显微镜MF23-BGU观察的ANA-HEp2染色病理片。

    使用使用荧光生物显微镜MF23搭配显微镜相机观察ANA-HEp2免疫荧光

    荧光生物显微镜MF23采用无限远平场消色差物镜和大视野目镜,可用双目或三目观察,搭配LED荧光激发装置,实现明场和荧光显微观察,供临床试验室利用显微放大原理观察微小细胞、组织等样本用。

    如果您对ANA-HEp2免疫荧光显微镜感兴趣或有疑问,欢迎与我们联系,期待与您相约!

    来源:http://www.mshot.com.cn/kehuanli/2023130.html,转载请保留出处,谢谢!

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ANA-HEp2免疫荧光诊断一般用什么显微镜?

抗核抗体(antinuclear antibodies,ANA)是自身免疫病(autoimmune diseases,AID)重要的血清自身抗体,ANA的检测结果对AID的诊疗及病情评估具有重要作用。ANA是以真核细胞各种成分为靶抗原的非器官特异性自身抗体。间接免疫荧光法是先把特异性抗体跟标本中的抗原反应,然后再用荧光素标记抗体跟之前的复合物中抗体结合,经过洗涤后在荧光显微镜下做观察,从而达到检测未知抗体或抗原的目的,通过该检测快速对自身抗体和病原体做检测和鉴定,比如可以用于筛查自身免疫性疾病、流感以及狂犬病等。

近期有位客户需要一台荧光生物显微镜诊断ANA-HEp2染色病理片的阳性,明美销售工程师推荐荧光生物显微镜MF23-BGU观察的ANA-HEp2染色病理片。

使用使用荧光生物显微镜MF23搭配显微镜相机观察ANA-HEp2免疫荧光

荧光生物显微镜MF23采用无限远平场消色差物镜和大视野目镜,可用双目或三目观察,搭配LED荧光激发装置,实现明场和荧光显微观察,供临床试验室利用显微放大原理观察微小细胞、组织等样本用。

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来源:http://www.mshot.com.cn/kehuanli/2023130.html,转载请保留出处,谢谢!

2023-05-23 14:41:23 93 0
免疫荧光细胞用什么显微镜观察?

倒置荧光显微镜下的免疫荧光细胞:探索微观世界的奥秘

显微镜观察免疫荧光细胞是一种重要的实验方法,用于研究细胞内蛋白质、核酸等成分的表达、功能和相互作用,目前,免疫荧光显微镜已经成为生物学研究中不可或缺的工具之一。

倒置荧光显微镜观察细胞时,需要选择合适的显微镜参数,以确保观察的准确性和稳定性。例如,光源的种类、显微镜的分辨率、物镜放大倍数和荧光通过率等因素。此外,在进行免疫荧光显微镜观察细胞时,需要选择合适的荧光强度和荧光颜色,以避免对观察结果的干扰。

倒置荧光显微镜MF52-N采用无限远光学设计和数显LED荧光模块,光路经过深度优化,能提供简单易用的荧光激发和高质量的相衬、荧光和明场成像,可选双光路、一体供电、人走灯灭,广泛用于细胞培养、生物制药、医疗检测等领域。


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来源:https://www.mshot.com/article/1810.html

2023-08-01 15:38:08 233 0
文昌鱼一般用什么显微镜观察?

文昌鱼是文昌鱼属(Branchiostoma)动物的总称, 又称蛞蝓鱼。形似小鱼,无头,两端尖细,是无脊椎动物进化至脊椎动物的过渡类型,也是研究脊索动物演化和系统发育的优良科学实验材料,具重要科学价值,一般观察这种文昌鱼采用什么显微镜观察呢?

体视显微镜下观察的文昌鱼

常规文昌鱼观察用体视显微镜较多,但个别荧光观察,还会用到体视荧光显微镜。体视显微镜采用优质光学系统设计,展现优异的分辨率及真实色彩,人机工程学设计和耐用的机身部件,长时间使用稳定可靠。是常规生物医学检验,科研研究和工业检测等高精度观察领域的理想工具。

如果您对体视显微镜感兴趣或有疑问,欢迎与我们联系。

【本文的标题和网址】文昌鱼一般用什么显微镜观察?;http://www.mshot.com/article/868.html


2022-04-21 10:03:12 224 0
国际上微生物研究一般用什么显微镜
 
2012-10-26 10:30:13 433 4
免疫荧光用什么封闭比较好
免疫荧光中如果要封闭抗原 是用BSA吗 多少浓度 在孵育一抗前 还是之后
2010-03-25 17:14:04 858 2
微生物检测室显微镜一般用什么型号的
 
2016-07-14 05:09:11 380 1
如何为免疫荧光显微镜制备样本
样本
IF方案存在于多种不同的样本当中。最简单最常用的方法是对细胞培养物中的培养(真核)细胞进行染色。贴壁生长的细胞可以接种在盖玻片上,采用多微孔插入或者直接接种在玻璃底培养皿上并在所需的时间用于IF检查。IF还可在细胞涂抹于载玻片(例如细胞离心涂片)后用于悬浮细胞的检查。在这两种情况下,需ZD分析细胞内的过程或结构,这被称为免疫细胞化学(ICC)。

另一方面,在免疫组织化学(IHC)typo3/当中通过组织特定的环境联系来检查是否存在蛋白质或分子。此处器官制备的超薄切片(通常包埋在石蜡中)用于比较研究健康器官与疾病器官中蛋白质的表达。

除了制备组织切片外,还可以对整个生物体进行IF检查,这一过程被称为“整体IHC”。为此可使用不同生物模型的胚胎如小鼠、鸡或斑马鱼等,或植物模型如拟南芥。在整体IHC中会受到试样尺寸和相关IF试剂透化深度的限制。单独的孵育步骤比培养细胞的染色要长。此外还必须提供带有特殊光学设备的显微镜用于大样本分析。
图1 COS7有丝分裂细胞。染色质(青色,mCherry),有丝分裂纺锤体(黄色,EGFP),高尔基体(红色,Atto647N),线粒体(绿色,AF532),肌动蛋白丝(紫色,SiR700)。样片提供:苏黎世大学Jana Döhner和Urs Ziegler。

清洗步骤
在IF程序中应特别注意清洗步骤,因为适当的清洗可以提高IF质量。PBS是一种标准的清洗缓冲液,而PBS++或PBS-T等变体也很普遍。PBS++含有1 mM CaCl2和MgCl2,推测其具有防止细胞分离的膜稳定作用。对于PBS-T,添加ZZ浓度为0.05%的清洁剂Tween 20,目的是增加抗体的结合特异性。请务必注意小心地涂抹并吸取清洗缓冲液以免细胞从培养容器或盖玻片上脱落。如有足够的时间,请在吸取缓冲液时等待几分钟,以确保清洗缓冲液有效扩散到样本中。IF程序的各个清洗步骤在下面的标准方案中列出。

传统IF反应的各步骤描述如下。本文结尾附有最常用的间接IF与培养细胞的标准程序。

固定
固定是IF程序的DY步。其目的是保持细胞、细胞结构或组织处于其当前状态,并通过化学试剂长期保存。在固定过程中,重要的是细胞结构尽可能保持其原有的构象。不同的固定方法对IF有用,每种试剂对一抗表位有不同的影响。抗体结合位点可能被掩盖或被固定所破坏,这会损害IF染色质量。由于每种抗体以不同的方式与抗原结合依赖于不同的固定化合物,因此有必要尝试几种新抗体的固定方法。

通常,合适的固定剂规格可以在抗体的数据表上找到。理想的固定应能够保存细胞和亚细胞结构,并为良好的抗体结合暴露出抗原。实际上,您必须在两者之间取得平衡。

固定试剂可以大致划分成2组:化学交联剂和有机溶剂
化学交联剂如通过游离氨基形成的福 尔 马 林 交联蛋白;细胞形态在大多数情况下保存良好。但抗原也可能发生交联,进而可能减少抗体结合。戊二醛对细胞结构也有保存固定作用,但会导致显微镜下观察到样本有很强的自发荧光(见‘对照’章节)。

有机溶剂如甲醇或丙酮等具有脱氢作用并沉淀蛋白质,从而将其固定在细胞环境中。但切记,在该过程中可溶性分子和许多脂质成分都会丢失。通常将甲醇和丙酮组合使用,因为尽管甲醇最适合保存细胞结构,但它对许多表位有极其不利的影响,而丙酮却破坏性较小。除此还应该考虑到已经存在于细胞中的荧光蛋白(如GFP),会因被有机溶剂固定而在很大程度上被破坏。如果一抗的制造商未建议使用何种固定剂,则用4%福 尔 马 林 在室温下处理10分钟即可用于各种细胞系和抗原。
表1:固定试剂
透化
通过透化处理,抗体可以进入细胞内结构,否则抗体就无法通过细胞的脂膜
。根据固定类型,有时需要单独的透化处理。当用有机溶剂固定时,细胞膜已经具有渗透性,您可以直接进入封闭步骤。用化学交联剂固定的细胞需要用清洁剂进行额外处理以实现透化。使用Triton X-100或NP-40等传统清洁剂,但也可使用皂甙、Tween 20或洋地黄皂甙。同样,根据应用的物质、浓度和培养时间会得到不同的结果,因此实验人员应该在开始时尝试不同的参数。典型的步骤是在室温下用0.1% Triton X-100在PBS中透化15-20分钟。

如果希望通过IF来分析脂质相关蛋白或膜蛋白,则应谨慎开展透化步骤(=脂质去除)。比较理想的选择是皂甙,能选择性去除质膜上的胆固醇,使细胞内的膜基本上完好无损。如果在抗体染色前忽略了透化处理(只能通过化学交联剂固定),则可以专门标记细胞外质膜结合抗原,以便将其与胞内抗原分开来。核酸染料如DAPI或Hoechst(见‘细胞核染色和样本封固’章节)具有膜渗透性,因此不需要透化处理。

封闭
封闭是在细胞内ZD限度降低一抗非特异性结合的重要步骤。为了实现这一点,可以使用来自牛血清白蛋白(BSA)、奶粉或血清的蛋白质。关键在于,这些封闭蛋白质并不源于产生一抗的物种,否则二抗对于一抗的特异性就会损失。如果您使用的是二抗,如山羊产生的抗小鼠一抗,则理想的封闭试剂是正常的山羊血清。通常使用浓度为1%(奶粉,BSA)至5%(正常血清)的封闭溶液,并在清洗缓冲液中稀释。在室温下孵育30-60分钟

免疫反应
经固定、透化和封闭制备样本后,会开始进行免疫反应。样本现在与特定的一抗一起孵育,以标记所需的靶结构。几种一抗可同时应用于样本。如上所述,在间接多色IF中,几种一抗必须来源于不同的物种。首先根据制造商的要求,在选定的封闭溶液中进行抗体稀释。如果对染色不满意,或者如果制造商没有提供任何有关有效稀释的信息,您应该尝试使浓度保持在1:50到1:1000之间。根据抗体的亲和力,孵育时间可能会有所不同。默认培育时间为室温下1-2小时;也可以在4℃下过夜。

如果选择直接IF,则可在一抗孵育后直接进行封片,因为一抗已经带有荧光色素。在间接IF当中,二抗现在已经对一抗进行了荧光标记。这里的关键点在于使用一抗进行孵育后要进行充分清洗,以减少二抗的非特异性结合。二抗也可以在封闭溶液或清洗缓冲液中进行稀释。如果制造商没有不同的指示,可以从1:200的稀释开始,在室温下孵育1小时。有必要避光培养以防出现荧光色素漂白。

细胞核染色与样本封片
免疫反应之后通常是用DNA染料对细胞核染色。另一方面,在用显微镜观察时这种处理可以更好地在细胞或组织切片内进行定向,同时还可以指示出细胞状态(如有丝分裂)是否为研究所需的状态。即便在没有透化的情况下也能进入到细胞核并插入DNA中的染料,如Hoechst或DAPI等,可以用于此目的。有鉴于此,实验人员应当十分小心,避免这些染料直接与皮肤接触!室温下简单的细胞染色耗时大约10分钟,期间Hoechst或DAPI需在PBS中稀释。

完成IF步骤后,样本必须适当封片以便于开展显微镜检查。有鉴于此,需要使用封固介质(如Mowiol或Prolong Gold)来将样本固定在显微镜载玻片上并防止样本脱水。另外,封固介质增加了折射率,有利于使用油浸物镜进行显微镜检查。一些制造商提供了带有添加剂的封固介质,如DABCO,这是一种防止样本光漂白的防褪色剂。根据使用的荧光色素,一些抗褪色剂比其他的更有效。

此外,还可使用添加了DNA染料的封固介质以便在包埋期间对细胞核进行染色,就无需进行单独的细胞核染色。如果使用硬化封固介质(通常情况下),则允许样本过夜固化,因此可以在第二天进行显微镜检查。以这种方式生产的玻片几乎可以长时间储存在室温或4℃的黑暗环境中,但请记住,荧光色素的荧光强度会随着时间的推移而减弱。
图2 斑马鱼胚胎。用STELLARIS 8获得3D图像,细胞核:蓝色,Hoechst;内皮细胞:绿色,EGFP;细胞膜:紫色,NIR750。样本由法国斯特拉斯堡的IGBMC的Julien Vermot提供。

对照
免疫荧光必须进行适当对照,以正确显示显微镜图像。缺少或不适合的对照通常会导致假阳性结论和不正确的数据。首先应当分析只被固定、透化和封闭的样本以便了解细胞间室的自发荧光typo3/。有时即使没有进行IF染色,结构也可能出现强荧光信号。

为了进一步的对照和调整间接IF的显微镜参数,使用已采用上述方法进行处理过的样本,但样本还要额外使用二抗进行孵育。首先将揭示二抗与样本的强非特异性结合。其次,设置显微镜参数以便在该对照的图像采集期间不记录任何信号。此设置用作后续采集的阈值来排除二抗的假阳性信号。在直接IF当中,自体荧光对照用于调节阈值。接下来分析与特异性一抗一起孵育的样本,如果是间接IF,也分析与二抗一起孵育的样本。此时应可检测到荧光信号,其高于自发荧光和二抗的阴性对照。

为了确保一抗特异性标记所需结构,一些制造商为一抗提供遮蔽特定抗原的肽封闭,从而防止抗体与其表位结合。如此处理成本高昂,但也是确定抗体特异性的ZJ方法,因此得到可靠的结果。

在多色IF实验中还必须注意所选荧光色素之间的串扰。如果是第 一次进行多色IF检查,建议在单独的制备中另外染色靶向结构,并将这些图像与多色图像进行比较。ZH应该仔细查看所获得的数据并将其与您的期望和一抗的现有数据进行比较。
表2:哪些对照测试哪些内容

局限性
如前所述,IF检查有诸多优势,但同样也存在着一定的劣势。关键点是样本的固定:固定意味着灭活,因此活细胞成像已变得不再可能。因此对动态过程的分析会比较复杂,每个时间点上的细胞都必须予以固定和染色。所以快速动态过程无法通过IF来进行观察。这显然是融合蛋白表达荧光标记如GFP(绿色荧光蛋白)的优势,比较适合用于活细胞成像。

如上所述,IF实验过程中(固定/透化)会改变细胞结构,因此伪影可解释为假阳性信号。所以有必要为每个IF染色准备适当的对照品,可能很费时。另一个缺点同样不可避免:荧光染料的光漂白。像GFP这样的荧光蛋白也受此影响,但当储存在适当的条件下,即使在几个月的永 久性制备后,GFP也能被检测到。相反,IF荧光色素的强度损失更快,这反映在显微镜下样本的快速漂白。即使是用抗褪色剂封固介质也只能暂时起作用。
图4:整套程序的流程图

标准IF流程
IF实验所需时间:约5个小时
这是一种盖玻片上通过化学交联剂进行固定的培育细胞接受间接IF检查的标准方案。

· 湿盒非常适合IF实验,并且可以轻松完成自制(见幻灯片“如何制备湿盒”)。该处理可防止试剂干燥并允许在黑暗中进行培养,这对于处理荧光色素很重要,并且对于已经存在的荧光蛋白是必要的。
· 试剂用量的选择要确保盖玻片能够完全湿润。确保样本JD不会完全干燥。
· 所有培育步骤都在室温下完成。
1. 清洗细胞两次并使用镊子小心地将带有向上翻转细胞的盖玻片放入湿盒。
2. 使用4% 福 尔 马 林 进行10分钟的固定并清洗3次。
3. 使用0.1% TX-100/PBS进行15-20分钟的透化处理并清洗3次。
4. 使用5%正常山羊血清/PBS或1% BSA/PBS进行45分钟的封闭(无需清洗)。
5. 在封闭溶液内稀释一抗并使用2小时(或在4℃下连夜使用)。清洗4次将未结合的一抗彻底清除掉。
6. 使用二抗进行1个小时的孵育,在封闭溶液或清洗缓冲液内进行稀释。
7. 吸取二抗,如有需要可使用Hoechst或DAPI [1 μg/ML]在PBS当中孵育10分钟。彻底清洗4次,即便此时还没有出现细胞核染色。
8. 用镊子轻轻取出盖玻片并将其进入H2O内,清除掉清洗缓冲液的残留盐分。
9. 在显微镜载玻片上滴一滴封固溶液并将盖玻片与细胞倒置这滴溶液上。用镊子轻轻按压试样,使封固介质均匀分布而不会挤压样本。
10.固化后就准备好进行显微镜观察了。
配方
清洗缓冲液

· 1 × PBS(磷酸盐生理盐水缓冲液)
1. 137 mM:NaCI
2. 2.7 mM:KCI
3. 10mM:Na2HPO4
4. 1.8 mM:KH2PO4
· 使用HCI将pH值调节到7.2-7.4
· 如为PBS++,需添加ZZ浓度为1 mM的CaCl2和MgCl2
· 如为PBS-T,需添加ZZ浓度为0.05%的Tween 20

固定缓冲液
· 福 尔 马 林:
1. 将4% PFA(多聚甲醛)溶解于温暖(50-70℃)的dH2O当中,pH值8(使用NaOH进行调节)。
2. 将10 × PBS添加到ZZ浓度为1 × PBS的溶液当中(如100 mL 10 × PBS溶于900 mL 4% PFA/dH2O)。
3. 使用HCI将pH值调节到7.2-7.4。

· 甲醇(预先冷冻至-20℃):
1. 100%甲醇(-20℃)
· 甲醇/丙酮(预先冷冻至 -20℃):
1. 50%甲醇(-20℃)和50 %丙酮(-20℃)
透化缓冲液
· TX-100(Triton X-100):
1. PBS,ZZ浓度0.1% TX-100
· 皂甙:
1. PBS,ZZ浓度0.1%的皂甙

· 其他清洁剂可在PBS当中以相同浓度进行使用。
封闭缓冲液
· BSA(牛血清蛋白):
1. PBS,ZZ浓度为1% BSA
· 奶粉:
1. PBS,ZZ浓度为1%奶粉
· 正常血清:
1. PBS,ZZ浓度为5%正常血清
细胞核染料
· Hoechst或DAPI:
  1. 在PBS中制备Hoechst 33342或DAPI溶液,ZZ工作浓度为1 μg/mL。

了解更多:https://www.leica-microsystems.com.cn/cn/?nlc=20201230-SFDC-011237

2021-07-10 13:38:49 597 0
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使用免疫荧光显微镜观察细胞结构需要a特异的抗体b扫描电镜c带有一定波长过虑镜片的光镜d荧光试剂e透射电镜... 使用免疫荧光显微镜观察细胞结构需要 a 特异的抗体 b 扫描电镜 c 带有一定波长过虑镜片的光镜 d 荧光试剂 e 透射电镜 展开
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鱼用显微镜跟一般的显微镜有什么区别啊
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2014-04-24 00:17:53 403 1
细胞培养用什么显微镜?

倒置荧光显微镜MF52-N应用于细胞培养

为管理细胞培养实验室的日常工作,倒置显微镜必不可少。倒置荧光显微镜MF52-N应用于细胞培养,满足明场观察和荧光转染观察需要。细胞多为贴壁生长,倒置显微镜采用“物镜位于样品下方,聚光镜位于样品上方”的设计,这样就能使物镜尽量贴近细胞,并在上方保持较大的工作空间。


近期,北京区域安装倒置荧光显微镜MF52-N搭配1250万像素显微镜相机MSX2,以用于细胞培养。细胞培养一般需要用到如相差等反差观察法,倒置荧光显微镜MF52-N采用无限远光学设计和数显LED荧光模块,光路经过深度优化,能提供简单易用的荧光激发和高质量的相衬、荧光和明场成像。


为实现重要的记录和标准化目的,显微镜应配备数字摄像头,能够记录和梳理拍摄的数据。此次搭配1250万像素显微镜相机MSX2,色彩还原性好,成像清晰。

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来源:https://www.mshot.com/article/1740.html

2023-05-05 14:35:20 242 0
水泥用什么显微镜
 
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显微镜一般多少钱
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2018-12-01 22:37:21 283 0
精密机电工厂一般用什么样的显微镜
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2016-12-11 03:55:39 264 1
病理切片检查用什么显微镜?

病理切片的检查,主要就是显微镜检查,需要对病理切片进行HE等染色,这种镜检主要是通过取得病理组织,然后把它制成切片进行染色,在显微镜下观察,观察组织结构以及组织来源,同时观察细胞的形态以明确疾病的性质,从而对临床的提供一个有效的方案。明美显微镜可应用于病理切片镜检,除此之外还能观察其他染色,比如FISH检测标记染料,主要用于肿瘤的检查等。

一、FISH检测——正置荧光显微镜MF43-N配显微镜相机和FISH软件

正置荧光显微镜MF43-N搭配显微镜相机、FISH软件拍摄的图片

研究级正置荧光显微镜MF43-N采用优良的无限远光学系统,6孔转盘式荧光模块设计,荧光激发块更换拆除方便,可自主方便更换想要的荧光激发块,荧光可供选择的荧光波段繁多且亮度高,应用面广,可以扩展应用在FISH领域、FRET领域、CTC检测领域。结合了真彩LED照明的光学元件,实现一流的色彩还原。满足各种功能需求。落射荧光显微系统采用模块化设计理念,可以快捷地调整照明系统,切换荧光滤色片组件。配置平场半复消色差荧光物镜与大视野目镜,应用于生物制药,医学检测、疾病预防等领域内的荧光。

荧光原位杂交分析系统利用荧光标记的特异核酸探针与细胞内相应的靶DNA分子或RNA分子,杂交,通过在荧光显微镜或共聚焦激光扫描仪下观察荧光信号,来确定与特异探针杂交后被染色的细胞或细胞器的形态和分布,或者对结合了荧光探针的DNA区域或RNA分子在染色体或其他细胞器中进行定位。

二、ANA-HEp2免疫荧光诊断采用荧光生物显微镜

使用使用荧光生物显微镜MF23搭配显微镜相机观察ANA-HEp2免疫荧光

荧光生物显微镜MF23采用无限远平场消色差物镜和大视野目镜,可用双目或三目观察头,搭配LED荧光激发装置,实现明场和荧光显微观察,供临床试验室利用显微放大原理观察微小细胞、组织等样本用。

三、HE染色切片-生物显微镜和倒置显微镜

生物显微镜ML31搭配显微镜相机MSX1拍摄的HE染色片

生物显微镜ML31是一款采用无限远光学设计的高倍放大显微镜,配备平场消色差物镜和长寿命LED透射光源,柯勒式照明,可以获得清晰、平坦、高衬度的成像效果,可以用来观察植物切片、植物细胞,或者半透明物体以及粉末、细小颗粒等样品。


倒置生物显微镜MI52-N采用优异的无限远光学系统,可用于细胞培养和切片观察,流线型的设计理念,紧凑稳定的高刚性主体,充分体现了显微操作的防震要求。超长工作距离聚光系统可对高培养皿或圆筒状烧瓶进行无沾染培养细胞观察,照明系统充分考虑散热性与安全性,人机工程学设计理念,使操作便捷,空间更广阔。

四、医院病理科日常的切片观察-有医疗器械注册证荧光生物显微镜

荧光生物显微镜MF43-M采用优良的无限远光学系统,6孔转盘式荧光模块设计,荧光激发块更换拆除方便,可自主方便更换想要的荧光激发块,荧光可供选择的荧光波段繁多且亮度高,应用面广,可以扩展应用在FISH领域、FRET领域、CTC检测领域。 结合了真彩LED照明的光学元件,实现一流的色彩还原。满足各种功能需求。落射荧光显微系统采用模块化设计理念,可以快捷地调整照明系统,切换荧光滤色片组件。配置平场半复消色差荧光物镜与大视野目镜,应用于生物制药,医学检测、疾病预防等领域内的荧光。

如果您对病理切片检查显微镜感兴趣或有疑问,欢迎与我们联系,期待与您相约!

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2023-05-22 16:33:14 1020 0
材料学用什么显微镜

材料学是指研究材料组成、结构、工艺、性质和使用性能之间相互关系的学科,为材料设计、制造、工艺优化和合理使用提供科学依据。材料学研究经常会用到多种显微镜,比如金相显微镜、荧光显微镜等,同时为了方便测量,还会配备显微镜相机和成像软件。

一、倒置荧光显微镜MF52-N搭配显微镜相机MS23观察材料-荧光小球。

倒置荧光显微镜MF52-N由LED落射荧光显微系统与倒置生物显微系统组成,采用优良的无限远光学系统,配置长工作距离平场物镜与大视野目镜。紧凑稳定的高刚性主体,充分体现了显微操作的防震要求。落射荧光显微系统采用模块化设计理念,切换荧光滤光片组件。产品可应用于细胞组织,透明液态组织的显微观察,也可用于生物制药,医学检测、疾病预防等领域内的荧光显微观察。

显微镜相机MS23采用大靶面高性能的成像芯片,配合USB3.0数据传输接口,具有大视野、高灵敏度、高动态范围和高帧率等性能特点,可广泛应用于明暗场、相衬、偏光、DIC和荧光成像等显微成像领域,是采集高质量显微图片和进行显微图像分析的理想工具。

二、金相显微镜MJ31搭配显微镜相机MDX10观察材料的结构

金相显微镜MJ31是一款LED光源的透射+落射金相显微镜,配件简易偏光功能,色温在各亮度下恒定,主要应用于半导体、FPD、电路板、金属材料、精密刀具等制造领域,适用于教学及研究方面。

MDX10显微镜数字相机采用高性能成像芯片,针对显微镜拍摄场景特别优化,精确还原样品的精细结构和真实色彩,采用USB3.0数据传输接口,2000全分辨率下运行流畅,极大提升采集效率,是病理诊断、金相分析和体视观察等应用领域的理想工具。

三、偏光显微镜MP41搭配显微镜相机MS60和高温热台K3000观察液晶材料

MP41透反射偏光显微镜,亦称矿相显微镜或矿石显微镜,是利用光的偏振特性对具有双折射性物质进行研究鉴定的必备仪器,可供广大用户进行单偏光、正交偏光、消光和锥光观察。广泛应用于地质、化工、医疗、药品等领域的研究与检验,也可进行液态高分子材料,生物聚合物及液晶材料的晶相观察,是科研机构与高等院校进行研究与教学的理想仪器。

搭配MP41可选K3000高温热台,可对样品进行步进加热和恒温控制,上限可以加热到500℃,对很多材料研究来说都是必备的配件。

四、生物显微镜ML11搭配显微镜相机观察晶球材料

 

生物显微镜ML11配置消色差物镜和大视野目镜,具有成像清晰,视野广阔,操作方便等特点,可广泛应用于生物学、工业、农业等领域,是教学、科研等单位的理想仪器。

显微镜相机MD28-W

五、体视显微镜MZ101搭配MS60观察泡沫材料

体视显微镜MZ101具有工作距离长,变倍范围大等出色之处,可以满足不同变倍率的观察需求;MZ101变倍比高达1:9,放大倍率7-63X,在使用的过程中不仅操作简便,符合人体工程学的设计,让操作人员拥有非常舒适的操作体验。采用高亮白光LED照明,支持透射、反射、透反射照明方式的选择也是MZ101这款体视显微镜的特色之处。

如果您对材料学显微镜感兴趣或有疑问,欢迎与我们联系,期待与您相约!

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2023-05-22 16:25:17 136 0
荧光观察用什么显微镜?

一、荧光基础知识

在显微成像中,荧光指的是一种光致发光现象,某些分子能吸收特定波长的光线,然后再发射出其他波长的光线的物理现象,这种分子一般称为荧光团。通常情况下,由于斯托克斯位移,荧光团的激发峰值和发射光谱之间存在差值,发射光线能量低于吸收光线,波长比激发光更长。

荧光现象有两种:自发荧光与继发荧光。自发荧光也称固有荧光,是指经照射后就能发出荧光;继发荧光也称二次荧光,物质经照射后不能或只能部分发生微弱荧光,需先用荧光染料标记处理,再经照射才能发生荧光。目前在荧光显微技术中,主要利用的是继发荧光现象。


念珠藻叶绿体的自发荧光,明美MF52-N拍摄

荧光产生包含激发和发射两个过程,在荧光显微技术中具体体现为以下几个关键部件:

(1)激发光源:主要包含以下两个指标

Ø 光源光谱覆盖发射光谱:荧光团在特定波段范围才能被大部分激发,因此激发光源的光谱范围要能匹配所观察样本中的荧光团激发特征。

Ø 发射光谱波段的强度:荧光信号一般较弱,需要使用较高亮度的激发光以产生较强信号的发射荧光信号。

 

(明美-四通道LED光源MG120,宽光谱 + 高光功)

(2)激发块:用于形成特异性激发/发射的一组滤光片,一般包含以下三个

Ø 激发滤光片EX:滤过光源中特定波段的光,用以激发样本中特定染料

Ø 发射滤光片EM:允许荧光团发射的特定波段的光通过

Ø 二向分色镜DM:反射激发波段的光,透过发射波段的光。透射荧光显微镜没有这个滤光片,但目前主流都是落射荧光显微镜,会有二向分光镜。

 

(明美可定制适配四家品牌,不同波段需求的激发块)

 

二、荧光显微成像的应用

荧光显微镜利用自发荧光或继发荧光现象,广泛用于生物(医学)、矿物、材料科学等领域的显微荧光观测。①在生物学领域,主要借助荧光染料标记,可准确和详细地识别细胞和亚微观细胞成分。②在矿物学领域,通常用于研究有自发荧光特性的物质,如石油、煤炭、氧化石墨烯等矿物。③在材料科学,可用于纺织工业或造纸业来分析基于纤维的材料,包括纺织品和纸张,在半导体领域,也可用来观测具有荧光特性的材料如磁珠等。

明美MF31-LED荧光显微镜观察SBS改性沥青

(MF43-N拍摄的磁珠荧光图片)

 

荧光显微技术在生物学领域中应用是广泛也是复杂的,主要是对细菌、细胞、组织或小型生物(如斑马鱼等模式生物)进行标记成像,它的微观层面都是通过荧光染料对分子层面进行标记。从荧光染料的选择看,通常需要考虑几个因素,一是荧光染料标记的位置,二是该染料对应的激发特征,包括吸收光谱特征和发射光谱特征。借助荧光染料,荧光显微技术不只局限于蛋白质,它还可以对核酸、聚糖进行染色,甚至钙离子等非生物物质也可以检测。以下根据染料结合的位置列举了一些常见的荧光染料及应用范围:


FITC荧光染色,MF52-N拍摄

(1)免疫荧光(IF):主要标记的是蛋白质。免疫荧光技术利用抗体可以和相应抗原特异性结合的特性,主要有两种方式:一是利用内源荧光信号,即通过克隆技术用遗传学方法将荧光蛋白与目的蛋白相连,如GFP等;二是利用荧光标记的抗体与目的蛋白特异性结合。

Ø FITC(异硫氰酸荧光素):是一种有机荧光染料,495/517 nm为该染料激发/发射峰值,可以和蛋白质上的基团结合,主要用于免疫荧光和流式细胞术中。

Ø TRITC(四甲基罗丹明-5(6)-异硫氰酸):属于罗丹明家族的衍生物,550/573 nm为该染料激发/发射峰值,可与蛋白质结合。

Ø 花箐染料(cy3、cy3.5、cy5、cy5.5、cy7等系列):非特异性吸附少,消光系数高,荧光量子产率高,从而让标记显影时背景弱,信号强。除细胞显影外,它们也常用于生物筛选、蛋白免疫印迹、生物医学显影、小动物体内成像等。

Ø Alexa Fluor系列:属于带负电荷且亲水的荧光染料系列,是不同基础荧光物质的磺化形式。这些产品标识涵盖了对应的激发波长,相比于FITC等染料,具有更好的稳定性和荧光亮度。


DAPI荧光染色,MF52-N拍摄

(2)DNA染色:主要标记核酸。同蛋白质一样,对核酸进行标记与研究同样有重要意义,如对细胞核(主要成分为核酸)进行染色标记可以判断细胞的数量和位置。

Ø DAPI(4',6-二脒基-2-苯基吲哚):当DAPI与双股DNA结合时,在358nm处有一个吸收峰值,在461nm处有一个发射峰值,其发射光的波长范围含盖了蓝色至青绿色。DAPI也可与RNA结合,但产生的荧光强度不及与DNA结合的结果。DAPI可以透过完整的细胞膜,因此被广泛用于活细胞和固定细胞的染色。

Ø Hoechst(33258、33342、34580):这三种染料都可在350nm左右的紫外光激发,在461nm处发出蓝靛色荧光。与DAPI类似,Hoechst可透过完整细胞膜,被广泛用于活细胞和固定细胞染色。

Ø PI(碘化丙啶):是一种不能透过细胞膜的DNA染色剂。与核酸结合后,激发波长为538 nm,发射波长为617 nm。由于该染色剂无法进入完整的细胞中,因此该染色剂常用于区分细胞群中的活细胞和死细胞。

 

 

Fura2钙离子探针做的研究图片, 引自公开文献
Front. Neural Circuits 11:11. doi: 10.3389/fncir.2017.00011

(3)离子成像:研究细胞中各种离子的流动与分布对细胞活动的深入理解有重要作用。通过各种离子指示剂,如钙离子、钠离子、镁离子、锌离子等指示剂与离子结合形成荧光团,利用光谱特征检测对应离子的分布状态。

 

三、荧光显微成像的挑战

应用荧光显微技术进行成像的过程中,不仅要考虑成像的质量,包括分辨率、对比度、荧光信号强弱、背景光、多通道成像等,还要考虑荧光染料、光照等对样本的影响,比如荧光染料毒性、光毒性、光漂白等。以下列出了荧光显微技术应用中的常见挑战与应对方法:


汞灯需搭配带计时器的复杂控制箱来使用

 

(1)激发光源选择和使用。传统荧光成像使用的是高压汞灯,具有特异性的光谱特征和较高的光强,但使用有很多麻烦,首先需要预热,然后光强靠ND滤镜调节,寿命较短可能就200小时,在寿命用完前还会有光强衰减问题,需要调整ND滤镜,替换灯泡后需要重新校中。目前很多应用都用LED荧光光源取代汞灯作为荧光光源,如宽光谱大功率LED荧光光源MG-100,寿命长单个可以顶50个汞灯,光强更稳定可控,并且可以即开即用,省事省心。


明美可定制适配四家品牌的滤光片组

 

(2)滤光片质量和匹配度。激发块中的滤光片质量会影响激发光和发射光的透过率,影响荧光效率并带来杂散光和背景噪声问题。同时,滤光片的参数能否匹配染料的激发峰和发射峰,也会对荧光效果产生重大影响。对于简易荧光需求,明美建议使用数显荧光模块,整合光源和BGU等常用激发块,可以为四家品牌显微镜升级荧光观察,简单易用效果好。对于专业荧光需求,明美提供匹配四家品牌主流荧光显微镜的激发盒和滤光片组,可按需定制不同滤光片组合,如钙离子Fura2探针需要用U激发G发射,一般的U激发B发射滤光片组并不适合。

 

(MF43-N+MC50-S拍摄的小鼠脑片荧光图像)

 

(3)光毒性与荧光染料毒性:在生物学领域的荧光成像中,需考虑光毒性与荧光染料毒性对样本的影响,如细胞内的有机分子在与氧反应时吸收光发生分解并产生自由基,部分荧光染料本身也能产生自由基,这是引起细胞等生物样本损伤的主要来源。通常的应对思路是:①使用具有较低能量(波长较长)激发光谱的荧光染料;②尽可能低的光强和尽可能短的激发时间,需要在成像质量与样本健康之间保持平衡;③降低帧速率,尤其在长时间的荧光成像中,这种情况需要提高相机的灵敏度,保证捕获微弱的荧光信号。

 

 

(单通道荧光拍摄,经软件合成多色荧光图像)

(4)多色荧光成像:在生物学领域应用较多,尤其是在对活细胞标记成像时,需同时对多种物质进行标记,并在一个图像中显示,而大多数荧光染料具有宽发射光谱,在使用多种染料标记时会出现荧光光谱重叠现象。对于多色荧光成像,有两种应对思路,一是针对每种染料使用对应的单通道窄带滤光片,后通过软件进行合成,这种方式对成像速度及软件图像处理提出较高要求;二是使用宽光谱光源同时激发,选用双通滤光片或多通滤光片,这种滤光片的的特点是允许两种或以上波段荧光信号通过,可实现一组滤光片同时观察两种或以上荧光染料,这种方式要求相邻的发射光谱范围没有重叠,所得到的荧光信号之间能较好的被区分。

 

(双通滤光片荧光拍摄,镜下可同时观察到B\G两种荧光信号)

来源:https://www.mshot.com/article/1527.html

2022-09-21 10:34:10 360 0

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