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- 只爱krystal 2018-01-19 00:00:00
- 没有图片不能判断，不过可以通过以下方式判断细胞是否被污染。 细胞培养中常见的生物污染类型有7种，分别是细菌污染、支原体污染、原虫污染、黑胶虫污染、真菌污染、病毒污染以及非细胞污染。他们在细胞培养中污染的特点如下： 1、细菌：细菌在普通倒置显微镜下为黑色细沙状，根据感染细菌的不同，可有不同的外形，培养液一般会浑浊变黄，对细胞生长影响明显。 2、支原体：黑色的，好象多为多形，培养液一般培养液一般会浑浊，原体感染，国内血清很多都没有做支原体阴性检测，而支原体是牛血清中Z常见的微生物之一。而且它不能用过滤的办法除去。支原体感染细胞以后，细胞病变不很明显，只是慢慢死去。 3、黑胶虫：可以穿透滤膜，也可以通过空气传播，低倍下为黑色点状，高倍下可看见黑色的小虫游来游去，培养液也是不浑的，一般不会太影响，细胞还是可以用的。常常是细胞生长状态良好，且观测到的运动物无明显增多，且培养液颜色、透明度无明显变化，可在同一批号的血清养的细胞中发现类似现象。对细胞生长状态不会有明显影响，在细胞增殖旺盛之后会自然消失，除更换血清外无须特殊处理。 4、真菌：一般培养液清亮，不变色，镜下有丝状物，有些真菌开始很像死细胞碎片，只是它很多很多的小块很清楚，象珊瑚状，不象细胞碎片分不清，慢慢的会长出很细的黑色丝状物。真菌生长的比较慢，不象细菌那么容易被发现，但是一旦发现有它的存在细胞就被污染了，也很难救活了。 5、原虫：培养液可轻微浑浊，显微镜下那些细小的点状物数量非常多，轻微活动，细胞虽然可以生长但繁殖速度却明显减慢，而且细胞状态不好，边缘不清楚，细胞不透亮。他们与细胞可共生但会与细胞争夺营养。这种共生是非常普遍的，但他们的数量小，细胞站优势所以不会影响到细胞的正常生长，只有当他们到达一定的数量时就会影响到细胞的生长，Z终形成恶性循环。 6. 病毒：组织细胞培养过程中，如果没有除去潜在的病毒，就会产生病毒污染。目前，从原代猴肾细胞的培养中已发现不少于20种血清性病毒。尽管病毒污染的细胞不影响原代培养，但生产疫苗是不安全的。因此，潜在病毒是细胞大量生产和疫苗、干扰素等生物制品制作中的难题 7、非同种细胞污染 ：即是细胞交叉污染，由于细胞培养操作时各细胞株所需的器材和溶液没有严格分开，往往会使一种细胞被另一种细胞污染。目前，世界上已有几十种细胞都被HeLa细胞所污染，致使许多实验宣告无效。非细胞培养物所造成的化学成分的污染也偶有发生，大多是由于细胞培养所需物品清洗消毒不彻底而带入一些有毒化学物质所致。
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凡在细胞培养环境中混入对细胞生长以及生存有害的成分以及造成细胞不纯的异物都应视为污染。
一般情况下，细胞污染根据污染源的不同，可分为物理污染、化学污染和生物污染。
物理污染
物理污染是细胞培养过程中Z容易被实验人员忽视的一种污染，往往是由一些放射性物质、辐射、或者是温度和其他物理环境的变化引发的。
这些物理性的变化会改变细胞培养体系中的一些生化成分，进而影响细胞的生长，导致细胞生长受YZ甚至死亡，或者细胞的代谢发生变化。
通过合理设计细胞房布局和规范实验操作可以大大降低物理污染的概率。
一些会引发机械震动的设备如涡旋振动仪、离心机等，建议不要放在二氧化碳培养箱附近。常用试剂按照存放要求（4℃或者-20℃的温度条件下，某些特殊试剂有避光的要求）置于固定的位置，并且避免周围有同位素或者其他放射性物质的存在。
操作上，培养箱在使用过程中，尽量避免频繁开关门以免造成二氧化碳浓度和温度的长时间或者大幅度的波动。处理细胞（如进行传代操作）时，也不宜长时间让细胞处于室温状态，影响其生长。同时，用于细胞培养的培养基、缓冲液、胎牛血清等，一般情况下需保证温度在37℃左右时再用于细胞，以免温度过低损伤细胞。
化学污染
化学污染往往存在于培养环境的各种介质中，造成细胞培养过程中常见的污染之一。
培养介质中的杂质、水、试剂、耗材、以及常用的玻璃器皿等都可能造成化学污染。
在细胞培养过程Z常使用到的水（包括蒸馏水、双蒸水、超纯水等），或多或少都会存在一些杂质。即使是去除了金属离子、内毒素等的超纯水，也会随着放置时间纯净度会下降，在实验室中尽量需要现配现用。另外，大部分自行配制的试剂溶液，依据性质不同需要通过过滤或者高温灭菌的方式除去其中的杂质。
在细胞培养过程中，牛血清是必不可少的一个天然添加物。但由于血液物质的成分复杂性，导致每一批次的血清制品都会有略微的差别。尽可能的使用同一批次的血清产品，是保证减小化学化境变化的前提。
一些常用的玻璃器皿，清洗不到位（建议多层级清洗后再用蒸馏水润洗）也会导致一些清洗剂的残留，进而影响其盛放试剂的纯度。
生物污染
生物污染是细胞培养新手Z容易遇到的一种污染情况。通常情况下科研人员普遍认知的污染是细菌污染，其实生物污染还包含真菌、病毒、支原体、酵母等其他微生物以及不同细胞之间的交叉污染。
酵母污染
（图源：UNC Lineberger Comprehensive Cancer Center）
实验室常见的细菌通常是大肠杆菌、葡萄球菌等。细菌污染比较容易察觉，细菌的快速增殖会产生大量的酸性代谢物质，导致培养基迅速变黄，并有肉眼可见的浑浊现象。在细胞培养过程中，如无特殊要求，在培养液中加入一定浓度的抗生素是有助于抵御细菌污染的。
细菌污染
（图源：UNC Lineberger Comprehensive Cancer Center）
相较而下，真菌的生长就会缓慢许多，其对细胞培养体系的影响也相对较慢。一般情况下，实验室常见的产生污染的真菌多为白色念珠菌、酵母菌、黑霉菌等。这些菌株在污染后期往往会形成白色或者是黄色的肉眼可见的漂浮物，在高倍显微镜下也可以看到明显的菌丝。
真菌污染
（图源：UNC Lineberger Comprehensive Cancer Center）
而对于病毒和支原体这种污染情况，则更难在污染初期被研究人员察觉，并且会在潜移默化中对细胞的生长增殖产生一定的危害与影响。
支原体污染
（图源：Contamination of Tissue Cultures by Mycoplasmas）
另外，细胞污染也是一种生物污染，如在多个细胞系培养的过程中，某细胞混入了另一种细胞的培养体系，导致不纯。这种情况通常是实验操作人员进行同时对多种细胞传代或者处理时未更换移液枪枪头或是共用移液管等造成的。严格标准化的操作流程可以避免这种情况的发生。
总之，生物污染的发生和化学污染类似，通常是多因素的。通常情况下，保持实验人员个人的卫生与正确的操作方式、管理好细胞房的布局与良好的通风体系、严格控制所用关键试剂与耗材的来源与品质，是降低生物污染的先要。如在某些疯牛病疫区产出的胎牛血清，其血源有很大风险携带疯牛病毒、口蹄疫病毒等影响细胞生长的病毒。同时，某些品质不好的血清还会带来黑胶虫污染的困扰。选择海关允许合法进口的并且有严格质检的牛血清产品，就能从根源上杜绝胎牛血清带来污染的可能性。
瑞沃德AlphaCell特级胎牛血清，其血源来自新西兰和澳大利亚的天然纯净牧场内严格编码的牧牛。采用世界ling先的心脏穿刺技术采集原料血，通过低温离心、多次过滤，并于超洁净车间进行无菌灌装后，再冷链运输至国内，全程严格监管，有效杜绝污染。
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- 细胞被“黑胶虫”污染了，怎么办？
正在培养的细胞状态“突然”恶化！在显微镜下观察，感觉有黑点状的不明物体在游动！
但没看见悬浮物，也没感觉培养基pH变化速度加快。
是不是支原体？
但支原体怎可能在低倍数显微镜下看得这么清楚？
难道是它？？？
科研学术圈一直流传着这样一种生物——它，可以污染细胞，污染后短期内不会影响贴壁生长的细胞贴壁；同时污染后的培养基也不会像细菌、真菌污染之后的培养基迅速变黄浑浊，有菌丝团漂浮在上清中。但是，没有人能确切地说出它到底是原虫还是其他病原微生物，也没有一个标准的图像记录，不管是相机实拍还是扫描电镜，甚至都没人能确定到底是“黑焦虫”还是“黑胶虫”。
1.“黑胶虫”究竟是什么？
有研究人员通过检测，发现实验室的“黑胶虫”为变形杆菌a-2亚群，其存在于胎牛血清中。
但后又有研究表明“黑胶虫”并非生物，而是一种碳酸钙纳米颗粒或硅复合物，称其为“硅小体”，来源于培养基对玻璃细胞培养器皿的侵蚀。
在“黑胶虫血清”的说法流行后，也有研究者表明自己实验室相似的情况出现原因是由于细菌污染，并从被“黑胶虫”污染的细胞培养基中分离到了一株短波单胞菌属的新菌株[1]。实际上，并不是所有的细菌污染马上就会导致细胞立即死亡，也不是所有的污染会让培养基变黄且浑浊，相反有时细菌污染会让培养基变得更红（细菌分解蛋白质产胺会导致pH值上升因此变红）。
很多人猜测，所谓的“黑胶虫”可能只是凋亡小体或细胞碎片，因为细胞状态好的时候就看不到了，而当颗粒物直径足够小，在液体中做不规则的布朗运动也很正常。尽管到目前，关于黑胶虫究竟是什么仍无定论，但我们应尽量避免“黑胶虫”污染。
2、如何避免或应对“黑胶虫”污染？
采用原装进口特级胎牛血清。
出现问题的培养体系中的血清，有很多是经过热灭活处理的，热灭活操作会使血清中产生线状的蛋白质聚合体，因其颗粒较小进行布朗运动便被认定为是生物，所以在进行血清融化的过程中要进行梯度处理，最适合在4℃缓慢融化
3.如果遇到“黑胶虫”污染怎么办？
换优质胎牛血清。
停止热灭活处理血清，目前大部分高品质血清都不需要热灭活操作，甚至通常因为较高温度处理后，血清质量受影响，细胞生长速率降低。同时热灭活过的血清，蛋白等沉淀物的形成显著增多，这些沉淀物在倒置显微镜下观察，像是“小黑点”，常常会让研究者误以为是血清遭受污染。所以在不是做免疫学研究或昆虫细胞培养等特殊场景时，血清尽量不经热灭活。
虽说是“黑胶虫”，但是其实有很大可能性是被其他微生物污染，如果对细胞状态影响很大，正常情况下应该直接丢弃，若细胞非常珍贵，可以用伯氨奎、磺胺、四环素、贝尼尔，庆大霉素进行洗涤。并尽早更换品质好的一次性细胞培养耗材以及相关培养试剂。
- 大家帮我看看我该选哪个专业(小项)
- 070302分析化学 _ 01天然产物分离与分析 _ 02色谱与分离科学 _ 03现代光分析化学及联用技术 _ 04精细化学品合成及其过程分析 _ 05电分析化学 _ 06现代波谱分析 070303有机化学 _ 01有机合成化学 _ 02应用有机化学 _ 03金属有机化学 _ 04不对称合成... 070302分析化学 _ 01天然产物分离与分析 _ 02色谱与分离科学 _ 03现代光分析化学及联用技术 _ 04精细化学品合成及其过程分析 _ 05电分析化学 _ 06现代波谱分析 070303有机化学 _ 01有机合成化学 _ 02应用有机化学 _ 03金属有机化学 _ 04不对称合成 _ 05功能色素化学 070304物理化学 _ 01化学反应动力学 _ 02分子材料设计 _ 03精细化工与资源催化 _ 04热力学与洁净能源 080501材料物理与化学 _ 01多相材料表面与界面设计与控制技术 _ 02纳米材料的物理与化学特性 _ 03聚合物材料结构与性能 _ 04材料摩擦磨损及理论 _ 05能源与环境材料化学 _ 06材料电化学 _ 07磁性材料设计 _ 08高分子纳米复合材料制备技术 _ 09先进复合材料 _ 10辐射固化技术 080502材料学 _ 01聚合物共混与纳米复合材料 _ 02材料成型过程计算机仿真 _ 03复合材料加工工程 _ 04紫外光固化材料 _ 05阻尼减振及波吸收高分子复合材料 _ 06金属材料及表面工程 _ 07纳米材料及应用技术 _ 08信息功能材料 _ 09纳米功能玻璃材料 _ 10耐磨复合材料 ★081701化学工程 _ 01超重力场工程 _ 02生物质能源与化学工程 _ 03离子液体与萃取分离 _ 04GX传质分离过程及设备 _ 05海洋生物化工及资源工程 _ 06化工过程专家系统 _ 07膜材料制备及膜分离技术 _ 08生化分离技术与工程 _ 09化工过程控制与优化 _ 10化工过程系统集成（工程） _ 11新型干燥过程及设备 _ 12颗粒设计技术 _ 13生化反应工程及生物材料 _ 14绿色化学反应与分离 _ 15催化反应精馏过程与技术 _ 16燃料电池技术 _ 17化工过程模拟与测量 _ 18超临界流体技术 _ 19相平衡热力学 ★081702化学工艺 _ 01石油加工与石油化工工艺 _ 02有机化工催化剂与工艺 _ 03有机中间体的合成工艺 _ 04化工过程模拟与优化 _ 05化工产品工程 _ 06化学反应与分离工程 ★081704应用化学 _ 01环境友好农药 _ 02绿色有机合成 _ 03催化加氢 _ 04农药、医药及其中间体开发 _ 05绿色化学与电化学合成 _ 06纳米材料电化学 _ 07能源电化学 _ 08环境电化学 _ 09光谱电化学 _ 10环境化学与环境化工 _ 11绿色精细有机合成及产品开发 _ 12有机催化 _ 13氟化学技术 _ 14仪器分析和色谱分析 _ 15新农药筛选与结构表征 _ 16新农药研制与工程开发 _ 17功能材料 _ 18有机合成和金属有机化学 _ 19计算化学 _ 20材料物理化学和量子化学研究 ★081705工业催化 _ 01化工和能源催化 _ 02新型催化加氢催化剂和医药染料及中间体合成 _ 03催化新材料与环境友好催化剂 _ 04绿色化学合成与碳-化学催化 _ 05精细化工和石油化工催化剂 _ 06不对称催化和手性技术 _ 07催化反应工程和清洁工艺技术 _ 08金属氮化物与纳米催化剂 090403农药学 _ 01农药剂型工程及制备机理研究 _ 02新农药研究与开发 _ 03农药分析 展开
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