全部评论(1条)
-
- 不要张着嘴放屁 2017-12-01 00:00:00
- A：Western Blot导致“背景高”的原因有很多，主要有以下几个方面： ①. 抗体浓度过高，洗涤不充分， ②. 封闭不充分，会造成抗体在膜上的非特异结合，导致高背景。 ③. 使用了不恰当的封闭剂，可尝试不同的封闭剂。 ④. 曝光过度，可减少底物显色时间，缩短曝光时间。 ⑤. 操作过程中膜干了。确保膜完全浸没于buffer中，始终杜绝膜干。 所以选择好的抗体和发光试剂盒非常关键，抗体技术目前国内还不成熟，建议选择进口试剂，不然容易特异性不好，发光试剂盒技术已经很成熟了，目前国内国外很多公司都研发出了灵敏度很高的试剂盒，进口可以看一下pierce的，但价格较贵，国产可以看一下上海炎熙生物的极敏型ECL试剂盒。和pierce一样是fg级别。很稳定。
-
赞(10)
回复(0)
热门问答
- 为什么Western Blot化学发光(ECL)会出现高背景？
- Western Blot 化学发光为什么出现高背景
- Western Blot 化学发光（ECL）为什么会“淬灭”?
- Western blot化学发光(ECL)时，出现非特异条带
Western blot化学发光(ECL)时，出现非特异条带，应该怎么办？
- 蛋白质印迹为什么叫western blot
- 和方位有什么关系吗？还是历史原因？
- western blot是什么意思
- Western免疫印迹（Western Blot）的原理是什么？
- western blot 的工作原理
- western blot 的工作原理，要详细点的，谢了
- western blot可以测哪些翻译后修饰
- western blot为什么用三层滤纸
- ProteinSimple发布单细胞western blot系统
细胞异质性是肿瘤研究，干细胞研究，免疫学研究的极其重要的研究方向。单细胞研究是
分析细胞异质性的主要手段。单细胞组学研究也是jing准医学首要的研究领域。
美国ProteinSimple公司首推基于芯片Western Blot技术，进行单个细胞蛋白质表达水平定量分析系统: Milo.
Milo具有极其强大的功能：
1. 单张芯片进行1000个单细胞western blot
2. 每个单细胞可进行数十个靶蛋白检测
3. 仅需使用Western blot验证抗体，具有抗体通用性
4. 基于western blot技术，蛋白进行分离后检测，提高免疫学检测特异性
5. 全程检测只需4小时
- Western Blot归一化讲座精彩内容提炼
期刊对Western Blot数据要求：
1. 内参和目的蛋白在同一张印迹膜上；
2. zuihao选择膜染色进行总蛋白归一化；
3. 如果使用看家蛋白，需要提供看家蛋白表达稳定并且不受实验条件影响的证据；
4. 成像方法的线性范围需要提供。
看家蛋白一般常用于内参质控，整张膜上的weiyi质控标准，但是看家蛋白一般表达量比较高，可能与目的蛋白不在一个线性范围内，影响定量；并且看家蛋白证明在多种实验条件下是会发生变化，例如：细胞融合，疾病和药物ZL等等，影响定量jingzhun性。
总蛋白质控直接在膜上检测总蛋白，变异性小，误差小，动态范围更宽，使用整个泳道或泳道中大部分信号用于归一化，而不是单一的条带，例如JBC、Nature和Proteomics等期刊推荐使用总蛋白进行归一化。
Azure可提供一站式Western Blot归一化解决方案。
提供两种总蛋白染色试剂Azure Red和TotalStainQ进行膜染色和总蛋白归一化，AzureRed适合低丰度表达样品，TotalStain更适合细胞裂解液样品。
Azure Sapphire双模式多光谱激光成像系统和Azure Imager多功能分子成像系统可进行总蛋白归一化，成像更简单，归一化更方便。
Azure成像系统除了可进行Western Blot成像外，功能非常强大，可进行凝胶、In cell Western孔板成像、2D和2D-DIGE、微阵列芯片、切片、动植物组织、小鼠成像、放射性同位素磷屏成像等。
- western blot 荧光免疫法和化学发光法所用的曝光仪一样吗
- western blot安装电泳槽，蛋白面对哪里
- 蛋白免疫印迹杂交(Western Blot)设备多少钱
- western blot转膜不用甲醇可以吗
- western blot和流式细胞术哪个更好
- Western Blot归一化：看家蛋白or总蛋白
做Western Blot的小伙伴，是不是还在为归一化方法而纠结呢？今天小编就和大家汇总一下看家蛋白和总蛋白归一化的方法。
看家蛋白归一化
使用看家蛋白的缺点是在样品间和不同条件下表达水平可能不一致。如使用看家蛋白进行标准化，必须先花费时间和精力来验证内参的选择。
使用看家蛋白的第二个重大挑战是它们的表达丰度很高，如果样品中的看家蛋白表达非常高，这会限制在凝胶上加载的样品量，如果感兴趣的蛋白不是同样的表达丰度，那这两种蛋白质就不在同一线性检测范围内。
如果您正在进行多重蛋白印迹，例如比较同一蛋白质的磷酸化和非磷酸化形式，则需要考虑的第三个挑战是从不同物种中产生一抗和二抗的复杂性。
检测的看家蛋白可能干扰感兴趣蛋白的检测。理想情况下，看家蛋白应该与感兴趣蛋白的大小不同，因此这两种蛋白可在印迹上空间分辨。当实验在同一印迹上检查多种目的蛋白时，这就变得越来越困难。
总蛋白归一化
使用总蛋白归一化，是直接在膜上检测总蛋白，并且该值在归一化时用作分母。总蛋白染色提供更宽的动态范围，并且表现出比看家蛋白更低的可变性和更准确的定量数据。
与使用看家蛋白相比，图像采集后的分析工作流程基本不变; 整个泳道或泳道中大部分信号用于归一化，而不是单一的条带。
例如：JBC、Narute和Proteomics等期刊会推荐使用总蛋白归一化方法。
使用总蛋白染色剂对膜进行染色提供了质控优势，可以验证转印是否完全。
Azure提供全套的总蛋白归一化解决方案。咨询请拨打：电话：010-57256059
3月突出贡献榜
推荐主页
最新话题
沪公网安备 31011502008050号
参与评论
登录后参与评论