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- xpgsldf 2016-11-14 00:00:00
- 因为生物体内都是有稳态的,比如人体的内环境啊还有细胞质都是稳态,他的理化性质比较稳定,而且对于外界环境的变化有一定的抵消作用,这样生物样品不会失去他原有的性质.所以你在体外对生物样品进行分析的时候必须提供这种环境才能够测得真实值.所以必须使用能够模拟生物本身的稳态的缓冲液. 具体原则是在不污染待测项目的前提下尽量使用较少的、能够Z大程度的模拟生物体内环境的缓冲液. 磷酸缓冲液即磷酸盐缓冲液(PB,Phosphate Buffer),是生物化学研究中使用Z为广泛的一种缓冲液,通常使用的有磷酸钠缓冲液(NaH2PO4&Na2HPO4)和磷酸钾缓冲液(K2HPO4&KH2PO4),由于它们有二级解离,缓冲的pH值范围很广。
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- 缓冲液在蛋白中的组成
酶联免疫或化学发光免疫分析的对象包括有酶、蛋白、抗体、多肽、抗原、核酸、糖、脂质等物质,其中酶、蛋白、抗体或多肽均属于蛋白类分子,需要使用蛋白缓冲液来保护蛋白。
1. 生物缓冲液,包括有Tris-HCl缓冲液、Tricine缓冲液、PB磷酸缓冲液、CB碳酸缓冲液等,其中Tris的缓冲体系应用较为普遍,缓冲能力比较强,同时对蛋白有良好的溶解性,为蛋白提供合适的pH环境。
2. 盐类,主要是氯化钠,调节蛋白缓冲液的离子强度(类似盐浓度)。通常配制时,需较少的离子强度防止蛋白沉淀;但需要将蛋白脱离出来时,应增加离子强度,否则蛋白难以沉淀脱离完全。对于有些蛋白,两性离子的盐类有助于蛋白结合。
3. 表面活性剂:吐温20、Triton X-100等,改变缓冲溶液表面张力,增加试剂相容性。
4. 有时还需要添加糖类如蔗糖、海藻糖等,惰性蛋白如Casein(酪蛋白),防腐剂如叠氮钠、卡松(异噻唑啉酮混合物)等。
蛋白缓冲液选择优化
虽然蛋白缓冲液的基本组成类似,不过没有通用的缓冲液,不同的系统必须分别优化。不同的蛋白其合适的pH值、亲水性、溶解性、稳定性都有差异。另外,蛋白在缓冲液中越不稳定,蛋白结合力越强。当缓冲液pH与蛋白等电点相同时,蛋白最不稳定,容易聚集沉淀。
蛋白缓冲液的稳定作用
蛋白缓冲液中添加有糖,对包被蛋白的稳定性有重要作用,减缓蛋白老化作用,并增加亲水性;添加的表面活性剂也是增加蛋白的亲水性,惰性蛋白也具有保护作用。在蛋白结合包被步骤中,需用沉淀剂(醇)降低蛋白的稳定性,也可润湿膜,减少膜带有的静电。
这里的蛋白在缓冲液中的稳定与不稳定是特定的,改变缓冲液的部分条件以优化不同的蛋白处理步骤,前提都是不能使蛋白变性或失活。德晟是生物缓冲剂厂家,生产有Tris、Bicine、MOPS等多种缓冲剂。
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