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- sunhong1114 2017-05-12 00:00:00
- 注射用水微生物超标要做菌种鉴定 传统方法细菌做革兰氏染色 运动性试验 各种代谢 然后查伯杰氏细菌手册;用分子做的话提总DNA,pcr扩增16srDNA全长片段,上NCBI数据库比对,选择近缘序列构建系统发育树鉴定。 真菌的话主要根据形态,特别是有性型生殖形态鉴定;分子的话一般扩增ITS区域,比对,建树鉴定。 首先你要确定待鉴定的菌种一定是纯种 。如果菌种不纯,所观察到的现象则是混合现象,这样自然不会得到正确的结果。因此在鉴定之前,首先要将菌种纯化。 纯化方法,一般有2种:平板划线单菌落分离法和单细胞分离法。前一种操作简便,效果良好,适用范围广。 菌种鉴定的方法一般有常规鉴定和分子生物学方法: (1)常规鉴定:菌落形态观察、革兰氏染色、菌毛染色、糖类分解实验、吲哚实验、淀粉水解实验、V-P实验、甲基红实验、柠檬酸盐利用实验、硝酸盐还原实验、接触酶实验等 (2)分子生物学方法:细菌16SrDNA菌种鉴定:提取DNA,特定引物PCR扩增,PCR产物纯化测序,进化树分析;真菌18S rDNA/ITS菌种鉴定流程也是一样的。
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