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- 张超19930112 2017-05-27 00:00:00
- 交换后的离子再回收利用。。。
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- qxj____ 2017-05-27 00:00:00
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离子交换色谱(IEC)因吸附量较大,被广泛应用于血浆蛋白的粗纯工艺。但是IEC容易受到样品中盐浓度的影响,如果样品溶液中含盐,则除了过滤以外,还需要进行脱盐、透析等前处理。而另一方面,近几年市面上出现了一种不易受到盐浓度影响的耐盐型(salt-tolerant)离子交换填料,可以作为一种混合模式填料用于这类纯化应用。
最近发表在期刊《Biotechnology Journal》上的一篇文献中,研究人员使用了东曹的耐盐型阳离子交换填料TOYOPEARL Sulfate-650F,从凝血酶原复合物浓缩液(PCC)中有效纯化凝血因子Ⅸ(FactorⅨ;九因子)。
文献介绍
M. Begić et al., Salt-tolerant cation-exchanger containing sulfate groups as a viable alternative for mixed-mode type and heparin-base affinity resin, Biotechnol. J., 2021; 2100100, CC BY NC ND, https://doi.org/10.1002/biot.202100100
与以磺酸基为官能团的阳离子交换填料TOYOPEARL GigaCap S-650M和SP-650M相比,耐盐性更高的TOYOPEARL Sulfate-650F则是导入了硫酸酯基作为官能团。
为了研究磺酸型填料和硫酸酯型填料的耐盐性,作者使用了以上这3种具有代表性的阳离子交换填料。首先,使用溶菌酶考察了洗脱液的pH和盐浓度对吸附量的影响。结果表明,携带硫酸酯基的TOYOPEARL Sulfate-650F对盐浓度的依赖性有很大不同,在更高盐浓度下也具备吸附能力(参照FIGURE2)。导致该现象的原因可能是,在硫酸酯型填料中,官能团的S原子和基质的碳原子之间是-O-,那么与磺酸型的-CH2-相比,其疏水性会变高,所以具备了耐盐性。
凝血因子Ⅸ的纯化
下图是使用耐盐型阳离子交换填料TOYOPEARL Sulfate-650F分离PCC中的维生素K依赖性凝血因子的结果。
首先,使用含有0.4 mol/L NaCl的高盐浓度洗脱液,让吸附较弱的凝血因子Ⅱ、因子Ⅶ、因子Ⅹ不被填料吸附直接流穿。然后,通过降低盐浓度和提升pH的阶梯梯度洗脱,把吸附在柱子上的因子Ⅸ洗脱下来。使用Sulfate-650F无需对样品进行脱盐处理,即可获得与使用肝素亲和层析相同纯度的因子Ⅸ。
工艺开发和筛选用预装柱在工艺开发早期阶段需要进行制备填料的筛选和分离条件探讨/优化,东曹SkillPak预装柱预装填有亲和、阴/阳离子交换、疏水以及尺寸排阻等各种分离模式的TOYOPEARL层析填料。
1 mL和5 mL的SkillPak预装柱主要用于纯化工艺开发或变更时参数和方法的优化。50 mL和200 mL规格的预装柱可将开发好的纯化工艺线性放大。我们还提供耐盐型离子交换填料套装,其中包含TOYOPEARL NH2-750F和Sulfate-650F两种填料产品。
参考文献:
1. T. Burnouf, An overview of plasma fractionation, Annals of Blood, 2018, 3: 33
2. J. M. Bult, Plasma fractionation technologies: benefit and limitations, September 21, 2021
3. M. Begić et al., Salt-tolerant cation-exchanger containing sulfate groups as a viable alternative for mixed-mode type and heparin-base affinity resin, Biotechnol. J., 2021; 2100100, CC BY NC ND
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