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考马斯亮蓝g-250染色法测定蛋白质含量与其他方法相比有什么优缺点

Miseft967 2017-09-19 19:25:43 1279  浏览
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全部评论(1条)

  • 美玲小姐wang 2017-09-20 16:34:49
    蛋白质的存在影响酸碱滴定中所用某些指示剂的颜色变化,从而改变这些染料的光吸收。在些基础上发展了蛋白质染色测定方法。涉及的指示剂有甲基橙、考马斯亮蓝、溴甲酚绿和溴甲酚紫。目前广泛使用的染料是考马斯亮蓝。 考马斯亮蓝G-250在酸性溶液中为棕红色,当它与蛋白质通过范德华键结合后,变为蓝色,且在蛋白质一定浓度范围内符合比尔定律,可在595nm处比色测定。2—5分钟即呈Z大光吸收,至少稳定1小时。在0.01—1.0 mg蛋白质/ml范围内均可。该法操作简便迅速,消耗样品量少,但不同蛋白质之间差异大,且标准曲线线性差。高浓度的Tris、EDTA、尿素、甘油、蔗糖、丙酮、硫酸铵和去污剂时测定有干扰。缓冲液浓度过高时,改变测定液pH值会影响显色。考马斯亮蓝染色能力强,比色杯不洗干净会影响光吸收值,不可用石英怀测定

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1 前言

豆乳是黄豆加水、磨成汁后再煮熟的饮料。豆乳饮料营养非常丰富,且易于消化吸收,它是数百种天然植物中Z受营养学家推荐的食物。本文参照《GB 5009.5-2016 食品安全国家标准 食品中蛋白质的测定》标准,对某品牌浓香豆乳进行蛋白质含量的测定。

2 仪器与试剂

2.1 仪器

K1160 全自动凯氏定氮仪,SH420F 石墨消解仪,分析天平。

2.2 试剂

硫酸(分析纯),催化剂片(分析纯无水硫酸钾 3g 和分析纯无水硫酸铜 0.2g),20g/L硼酸溶液,溴甲酚绿-甲基红混合指示剂,40%氢氧化钠。

3 实验方法

3.1 取样

称取样品 3.0g(精确值 0.1mg)左右,加入消化管。加入混合催化剂 3gK2SO4、0.2gCuSO4,加入 10mL 浓硫酸。

3.3 消解

利用石墨消解炉进行消解,将消化管放在石墨炉上,盖上排气罩,连接废气吸收系统,消化过程采用曲线升温模式,设定消解参数如表 1:

表 1 消解参数设置

             阶段            温度/℃          保持/min              备注
               1             200               20 不加排废罩,挥发水分
               2             230               20
               3             350               20
               4             420               90

3.4测试

将消化管放置于凯氏定氮仪上,定氮仪参数设置如表 2:

表 2 定氮仪参数设置

      硼酸    稀释水      碱液    蒸馏量  蛋白系数   蒸汽流量   滴定酸
     25mL     30mL     40mL      5min      6.25     0.1169mol/L

4 测试结果

4.1 实验结果

       名称   样品重量 g     氮含量%蛋白质含量%     平均值%       RSD%



       豆乳

      3.1171     0.4887     3.0541



      3.0592



        0.13

      3.0504     0.4901     3.0632
      3.1046     0.4899     3.0617
      3.1745     0.4892     3.0578

4.2 结论

通过实验数据可以看出,测定该豆乳样品的粗蛋白平均值为 3.0592%。

豆乳样品包装袋上营养成分表中蛋白质标示值为 3.0g/100g,样品测定的蛋白质平均值符合《GB 28050-2011 食品安全国家标准 预包装食品营养标签通则》要求的食品中蛋白质的允许误差范围≧80%标示值。

参考文献

[1] GB 5009.5-2016 食品安全国家标准 食品中蛋白质的测定[S]. [2] GB 28050-2011 食品安全国家标准 预包装食品营养标签通则[S].


2020-02-11 11:15:03 333 0

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