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       由武汉东湖国家自主创新示范区生物医药行业协会主办，北京中航环宇国际交流ZX承办，2019ZG武汉光谷生物学术年会暨生物制药质量分析技术论坛，于2019年12月19-20日在武汉纽宾凯光谷国际酒店胜利召开。

        ProteinSimple作为知名的生物制药仪器和技术提供商，参加了本次盛会。

1. 会议分享

       ZG科学院院士，ZG科学院大连化学物理研究所研究员，张玉奎院士在大会上介绍了基于蛋白质组学的jing准医学的新技术和新方法。

       ZG食品药品检定研究院，生物制品检定所，重组药物室的饶春明主任，在大会上介绍了生物技术药物质量控制的检定方法的建立及验证，以及新版药典三部标准提高的研究。

       湖北省药品监督检验研究院院长，姜红院长在大会上做了报告，报告内容涵盖了对疫苗管理法的解读，批签发制度的介绍，以及新技术的应用实例的分享。

ProteinSimple在大会上分享了生物大分子药物表征的创新技术，内容包含：

1. 电荷异质性：iCIEF（全柱成像毛细管等电聚焦电泳法，2020版药典收录）

2. 大小异质性：CE-SDS（2020版药典修订）

3. 大小异质性鉴别：Jess CE-SDS免疫学检测技术

4. SDS-PAGE成像：FluorChem系列符合 21 CFR Part 11成像系统

5. 工艺相关杂质：Ella-Cygnus第三代HCP全自动快速ELISA技术

6. 颗粒物形态：MFI微流体成像颗粒表征技术

2. ProteinSimple大会部分PPT分享

3. 会议交流

（来源：ProteinSimple）

       由武汉东湖国家自主创新示范区生物医药行业协会主办，北京中航环宇国际交流ZX承办，2019ZG武汉光谷生物学术年会暨生物制药质量分析技术论坛，将于2019年12月19-20日在武汉纽宾凯光谷国际酒店召开。

       ZG生物制药已经进入高速发展阶段。如中检院单抗室王兰主任在2019年ZG生物制品年会演讲：2018年361个项目在IND（临床申报）48个项目在NDA（新药上市申请），2019年则达到177个项目进入NDA阶段。

       同时，王兰主任也更新了在NDA阶段的全面表征技术

        以中检院单抗室更新的全面质量表征技术为指导，在本次武汉光谷生物学术年会上，ProteinSimple将在19日11:00-11:30演讲：生物大分子药物质量表征全线解决方案，涵盖：

       1.电荷异质性：iCIEF（全柱成像毛细管等电聚焦电泳法，2020版药典收录）

       2.大小异质性：CE-SDS（2020版药典修订）

       3.大小异质性鉴别：Jess CE-SDS免疫学检测技术

       4.SDS-PAGE成像：FluorChem系列符合 21 CFR Part 11成像系统

       5.工艺相关杂质：Ella-Cygnus第三代HCP全自动快速ELISA技术

       6.颗粒物形态：MFI微流体成像颗粒表征技术 

会议日程安排和演讲题目可能根据专家建议略有调整，大会组委会保留修改解释权。

敬请各位行业专家莅临会场指导，交流。

（来源：美国ProteinSimple公司）

18日的武汉还是大雪纷飞，轰动三镇，昨天就是晴空朗朗，气温回升，准备好的厚棉衣似乎突然变得多余。

在18日就到达武汉预备参加ZG武汉光谷生物学术年会暨生物制药质量分析技术论坛的专家学者也见证此次大雪，次日到现场时还啧啧称奇：“武汉就连天气都如此好学了吗？”

让武汉的大雪都停下来的研讨会到底是一个什么来路呢？

研讨会开幕式

2019年12月19日-20日ZG武汉光谷生物学术年会暨生物制药质量分析技术论坛在武汉纽宾凯光谷国际酒店召开，本次会议是由美中生物医药协会、武汉光谷生物学术年会组委会共同主办。

△ ZG武汉光谷生物学术年会暨生物制药质量分析技术论坛

国内经过三十年的发展，随着基因重组技术的成熟，生物制药行业也成为了国内制药行业发展Z为活跃领域，但有关生物制药领域的研讨会资源分配不匀，而此次研讨会主旨是提高生物分析技术在药物研发与质量控制领域的应用，展示新的技术、资源及新的仪器，从而让不同区域的从业者均能与前沿技术接轨，更好的服务企业。

会议现场

△ZG食品药品检定研究院百白破疫苗与毒素室主任马宵作《联合疫苗质量控制新进展》报告，谈到了在百日咳疫苗临床研发中的疫苗免疫持久观察、百日咳疫苗有效性，从而提升疫苗持久性及有效性。

△WTO专家教授孙悦平上台作《我国生物制品监管及质量保障体系》报告，提到了关于生物质量监管中的7个系统、3个关键要素，ZD提到关于管控质量监督问题，生物制品关乎人员安全问题，紧抓、系统、科学能够降低风险。

△实验仪器领域的专家，上海知楚摇床创始人钱俊向在场的研究人员们分享了《不一样的ZG制造——知楚摇床》。其中钱总分享道“以造飞机的精神造摇床”是知楚成立之后就立下的标准，在培养摇床研发中以精益求精作为技术要求，不断在提升仪器的技术水平及质量。

上海知楚&武汉集思展台

作为本次参展商的上海知楚，联合本土战略合作伙伴集思仪器，在研讨会期间，也携带了知楚摇床及相关实验室仪器设备参展，包括：知楚ZQZY-CS8、博旅发酵罐及其他实验室仪器。

“颜色亮眼、运行声音小”，“箱体内部空间大、重量轻可堆叠多层”进行不同需求的实验样品振荡培养，会议展厅内看过样机演示的客户对知楚的评价。

其中，重量轻可堆叠多层可以说是知楚近几年一直在努力攻克的问题，如何在保证仪器技术同时又能够减轻机体本身重量减少用户使用空间。

△展会现场客户咨询知楚仪器

技术上的过硬，服务上更不曾懈怠，近十年的时间知楚摇床未收取一分钱维修费、上门费、配件费服务全国用户。专一、专注、高执行这也是上海知楚对于ZG实验室仪器行业Z真诚的态度。

对于实验室仪器行业的高度热诚，以服务本土实验室用户为己任，这也是武汉集思仪器与知楚合作能达成多年战略合作伙伴多年的原因，恰好也与本次研讨会的初衷一致，将Z新仪器及科研资讯带到一线从业人员身边，从而更好的服务于他们。

持续2天高能的会议在回暖的温度中接近尾声，来自各领域的专家感受到了武汉浓郁的科研氛围及专业的科研仪器设备服务商，九省通衢的大武汉正在以高速的高知能力发展，而未来的科研事业中武汉集思&上海知楚将会一路相随！

生物大分子药物目前主要包括治 疗性蛋白药物与核酸药物等，随着生物技术的迅速发展，生物大分子已被普遍用以治 疗肿瘤、本身免疫系统疾病和遗传代谢病等多种疾病。生物治 疗药物在临床和商业上的成功引起了行业内对其开发的日益重视，需要高质量的生物分析来支持这些药物的开发。

与常规药物一样，评估大分子药物的安全性和有效性需要彻底了解其药代动力学（PK）、药效学（PD）、毒代动力学（TK）以及免疫原性等特征。在药物与机体相互作用中，PK是研究机体对药物的处置作用，而PD和TK是分别研究药物对机体有益/有害的效应。PD/PK和PK/TK的相互关系是药物药理学评价的核心。FDA、NMPA等监管机构要求药物进入临床前必须证明其有效性和安全性，临床前和临床研究均需要研究药物的PK，同时FDA建议对免疫原性风险检测最 好在IND阶段和临床I期开展。因此，建立好的PD/PK/TK等生物分析方案对于大分子药物的临床前及临床分析评价极为重要。

与小分子药物相比，大分子药物具有分子量大、结构复杂、细胞外基质不容易透过、使用量低、身体易溶解等特性，其生物分析充满挑战。

生物大分子药物与传统小分子药物的药代动力学

特征比较（药学进展 ，2018年8期 ）

传统的生物分析方法通常依赖于基于小分子检测的液质联用系统和基于生物制剂的配体结合分析（ligand-binding assay，LBA)），目前这两种方法也用于抗体等生物药的生物分析中。在现在的创新药物中，还有mRNA、病毒载体、细胞治 疗产品等，这些药物本质上并非蛋白质药物，因此qPCR、流式细胞术、成像技术等手段也越来越多地用于生物药的生物分析中。

01、基于配体结合分析

生物分析中基于配体结合分析LBA是一种常用的分析工具，用于根据与其他生物分子的相互结合作用（binding interaction），定量测定生物分子（目标分析物，Analyte）在生物体液中的浓度，主要包括酶联免疫(ELISA)等。

目前ELISA是生物制药行业使用最广泛的配体结合式（LBA）检测平台，它一直以来都是蛋白质定量分析最常用的技术，现在大多数生物标志物的商业检测试剂盒都是基于ELISA的。这项技术对于某些临床前生物分析的应用仍然很有吸引力，比如血清单克隆抗体的PK。但是ELISA操作复杂、测试运行时间长，采用自动化平台可缩短分析人员操作的时间， 提高工作效率。

丹纳赫生命科学旗下贝克曼库尔特的Biomek i7自动化工作站结合美谷分子仪器的SpectraMax i3 多功能酶标仪，可以自动化地对样本进行高通量的ELISA操作，大大避免实验误差及重复的人工劳动。

自动化工作站进行ELISA实验流程

自动化工作站进行ELISA实验的结果

02、液相色谱串联质谱检测系统LC-MS/MS

与LBA 相比，LC-MS/MS 在生物分析中的优势在于可以提供快速的方法开发和验证、高特异性和高重现性，还可以实现多种分析物同时定量。另外，LC-MS/MS 方法也更容易在不同的分析物类别和基质之间转移。但是灵敏度、样品制备、方法开发和定量准确度相关的难题也亟需解决。

丹纳赫生命科学旗下SCIEX开发了一种通用的混合LBA和LC-MS/MS两种技术的工作流程，该工作流程结合了这两种技术的优势，可用于蛋白质药物的PK分析。该方法检测阿达木单抗在小鼠血浆中的浓度，先用磁珠方法进行免疫亲和性样品的制备，然后将阿巴利单抗标准品进行消化后进入TripleTOF™ MS系统进行肽图谱分析，用以选择蛋白质定量的特征性肽段。在QTRAP 6500+系统进行定量分析后，50 到 10000 ng/mL 的线性关系可达0.99763，定量限为50 ng/mL。

LC-MS/MS方法的前处理流程

阿达木单抗的提取离子色谱图   

SCIEX QTRAP™ 6500+ 系统

03、qPCR技术

qPCR法是常用的分析核酸药物表达量的一种方法，其定量下限可以达到pg/mL甚至fg/mL，这可以极大增强药物在体内暴露的检测时间。此外，RT-qPCR使用的样本量极少，只需要几微升血浆样本或1毫克组织即可满足分析需求，减少了对珍贵样本的使用，而且能够使用384孔板实现对样本的高通量分析。然而获得信号特异、低背景的qPCR结果也非易事，丹纳赫生命科学旗下IDT埃德特的双淬灭荧光探针，在靠近报告基团9bp左右的位置增加一个中间淬灭基团，为FRET作用中提供了一个能量的“中转站”，拉近了能量传递中每个基团间的距离，从而提高了荧光淬灭率降低了背景信号。

IDT 双淬灭荧光探针示意图

（蓝色序列片段即为双淬灭荧光探针）

在过去20年中，新型治 疗方式的出现改变了生物分析领域的现状，导致了一系列技术的发展和成熟。在发现阶段以及药物开发的临床前和临床阶段，健全的生物分析方法非常重要，这将有助于开发更安全、更有效的药物，同时减少开发的时间和成本。丹纳赫生命科学一系列先进的生物分析工具和方法能够有效帮助应对创新药物复杂结构和不同作用机制对PK、PD和免疫原性评估提出的重大挑战。

       近年来随着以治 疗性蛋白、肽、核酸及疫苗等生物药的广泛应用，对此类生物大分子的分离、解析、评价技术水平也提出了更高的要求。生物大分子的分离手段多种多样，例如：盐析、有机溶剂沉淀法、液相色谱法、电泳等方法。其中，高效液相色谱法在分辨率、选择性、分离速度方面具有明显优势。液相色谱法不仅适用于天然产物，还广泛应用于重组蛋白和合成核酸的研发、抗体药物生产中的纯化及质量管理等。

       在这本《生物分离读本》中，我们对分析这些生物大分子样品时所采用的液相色谱分离模式的原理、特点及实际应用案例进行了详细介绍。希望对您的分析工作有所帮助。

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9月15日（周三），马尔文帕纳科将在药视网网络药学讲堂开讲啦！马尔文帕纳科两位产品应用专家将为您带来生物技术药物稳定性的分析解决方案及案例分享，现开放报名通道，期待您的关注和参与！

■  会议日期：2021年9月15日（周三）

■  会议时间：15:00-16:30

■  活动类型：网络会议直播，需提前注册 

■  涉及技术类型：

• 微量热技术（DSC, ITC）

• 动态光散射技术（DLS）

• 静态光散射技术（SLS）

• 电泳光散射技术（ELS）

• 纳米颗粒跟踪分析技术（NTA）

生物技术药物如单克隆抗体、ADC药物、疫苗等是近年来发展迅猛的制药领域，重磅药物更是占据了药物销售榜前10名的多数席位。然而，与传统化学分子不同，生物技术药物由于其天然庞大的尺寸、结构的复杂性以及脆弱的稳定性，在药物研发和生产过程中也给开发者带来了巨大的挑战。

环境的改变与工艺的要求通常会导致维系蛋白质药物发挥功能的高级结构（High Order Structure, HOS）的改变，从而引起潜在的构象稳定性改变，进而影响到药效、生产可行性以及用药安全性（免疫原性）。同时，外部因素如制剂配方中的缓冲条件、pH环境以及添加成分也会通过与药物分子相互作用导致胶体稳定性的改变，进而产生聚集体等问题。常见的二级结构技术如CD 等通常不能准确的判断高级结构稳定性的变化，而传统的加速实验在药物研发早期又显得较为费时费力。

近年来，用于热稳定性研究的技术如微量热差示扫描量热法和用于胶体稳定性分析的光散射技术（包括动态光、静态光和电泳光散射）越来越受到生物药物开发者的关注。

在本次网络研讨会中，马尔文帕纳科的技术专家将通过实际案例和大家共同研讨生物技术药物的稳定性分析手段-微量热差式扫描微量热法技术方案，同时还将为大家介绍动态光散射技术(DLS)、静态光散射(SLS)、电泳光散射(ELS)在抗体药稳定性分析中的应用，探讨如何实现快速、原位、无损、微量抗体药稳定性测量。欢迎大家积极参与讨论。

报告主题及内容

主题一：生物技术药物的热稳定性解决方案

 主讲人：韩佩韦博士

 课程内容：

²  生物技术药物稳定性面临的挑战

²  微量热差示扫描量热仪基本原理及其参数的意义

²  生物技术药物热稳定性研究的案例分享——抗体筛选、配方、生物类似药可比性研究等

 主题二：光散射技术在抗体药稳定性表征上的应用

 主讲人：张鹏博士

 课程内容：

²  FDA对抗体药在粒径表征方面的法规介绍

²  动态光散射技术（DLS）在抗体药稳定性及团聚体的表征

²  静态光散射技术（SLS）在抗体药稳定性的表征

²  电泳光散射技术（ELS）对抗体药稳定性的表征

²  纳米颗粒跟踪分析技术（NTA）对抗体药团聚体的表征

点击或扫描二维码报名（填写注册信息并提交即可）https://zyt.ouryao.com/plugin.php?id=yaoshi&a=live&liveid=731&referid=668326

主讲人信息

韩佩韦 博士

生命科学业务发展经理 微量热技术产品经理

中科院生物物理所生物物理学博士，现任马尔文生命科学业务发展经理、微量热技术产品经理。长期负责蛋白质稳定性以及分子间相互作用技术如DSC, ITC, SPR等的技术支持和市场拓展。在2014年加入马尔文帕纳科之前，多年任职于通用电气（中国）医疗集团生命科学部（现Cytiva），曾任技术经理、Biacore & Microcal产品经理和Label-Free技术资深应用科学家等职位。韩佩韦博士长期活跃于生命科学领域和生物制药行业，组织和举办过相关的几百场技术交流会和培训班，并在多个大型会议上做分会技术报告，在分子相互作用领域和微量热应用领域具有丰富的经验。

张  鹏 博士

纳米粒度产品线高级应用专家

毕业于复旦大学，主攻方向为递药系统设计及肿瘤细胞靶向递药治疗。至今发表10余篇学术论文，作为课题负责人，承担并完成中国博士后基金面上项目一项，此外曾多次参与国家自然科学基金青年、面上项目。目前担任马尔文帕纳科纳米产品线高级应用专家，在颗粒粒径表征方面有着丰富的经验。

大咖云集

在全人类与新冠病毒的战役中，疫苗和ZL药物研究进展的给我们带来了曙光。掌握和储备更多的知识可以加速药物研发进程，惠及更多深受病痛折磨的同伴，为此我们特邀请了赛默飞的ZS国内外专家进行三场生物药表征的网络直播研讨会，不仅有更前沿的研究进展，还有精彩的答疑一一呈上，欢迎大家一起与大咖对话。

Tip   直播会配备专业中文字幕，听课交流无障碍！

ZT简介及具体时间安排

diyi场

Updateing your Peptide Mapping and Glycan analysis for Therapeutic protein

5月7日晚上19:30-21:30

主要内容

diyi部分：生物药物是复杂的蛋白质，需要通过肽图分析来确认产生正确的序列并鉴定翻译后修饰。传统的蛋白水解消化步骤复杂且繁多。即使拥有经验丰富的技术人员，重现性也会受到影响。我们设计了一个简单的自动化消化工作流程，并用于监视多个属性的优化后的合规性分析。该方案在4个独立实验室的研究显示了该方法的简便转移。

第二部分：糖型分布是关键质量属性之一，也非常有挑战，本部分我们从完整水平，肽图和糖苷分析三个角度进行糖型分析的表征。

讲师：Ken Cook, Ph.D.

讲师介绍

Ken Cook领导着一支由生物制药分析专家组成的团队，他的团队致力于开发和支持色谱法和质谱法中的所有产品的新技术。ZL性蛋白药物表征的LC/HRMS联用技术，离子交换色谱法与质谱的直接联用，聚糖分析，聚集体分析，以及基因ZL药物在线过程监控等新技术取得了很大的成功，获得了国内外生物制药行业和学术界的广泛好评。

他的职业生涯始于大学生物化学专业的蛋白质化学讲师，在生物制药领域有着32年以上的丰富经验。在生物制药分析，蛋白质化学，蛋白质组学，代谢组学，寡核苷酸和脂质组学出版了很多专著文献。

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 Tip   本场直播，赛默飞将抽取有购买意向的客户免费SY明星产品—SmartDigest试剂盒，数量有限，先到先得！

第二场

Advances in Column Technology and Universal Separation Platform for Analysis of Monoclonal Antibodies (mAbs)

 5月28日晚上 20:00-22:00

主要内容

diyi部分：蛋白药物的蓬勃发展，大大提高了我们的生活质量，新的工艺技术也带来了更多的分析挑战，Thermo Fisher Scientific 先进的色谱技术和解决方案在新型生物药物中有着什么样的优势和特色呢？本部分将会在完整水平上进行详细分享。

第二部分：pH缓冲液和盐梯度进行阳离子和阴离子交换层析的通用分离平台。我们通过为几种单克隆抗体方法开发的离子交换表征方法来证明该平台的实用性和便利性。

讲师：Shanhua Lin, Ph.D

讲师介绍

林博士现任赛默飞世尔科技公司色谱消耗品业务部（CCS）的研发总监，负责CCS业务中所有产品的新产品开发和创新。包括支持新产品的分析和支持色谱消耗品事业部战略远景的跨职能计划。在他的领导下，研发团队开发并向市场推出了多种HPLC消耗品，用于ZL性单克隆抗体的表征和质量控制。其中包括用于单克隆抗体的滴度测定，聚集体分析和电荷变异体分析的HPLC色谱柱和pH 梯度缓冲液。

她的职业生涯横跨生物分析行业和学术界20多年，经验包括新药推出的早期研究和表征，林博士在特拉华大学获得生物化学博士学位，并与Robert Cotter教授一起在约翰.霍普金斯医学院完成了博士后学业。目前已经撰写了20多个出版物和ZL。

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第三场

特色官能团色谱柱在核苷酸和多肽分析中的特色应用

 6月9日 晚上19:30-21:30

主要内容

diyi部分：核苷酸既可以作为基因诊断试剂又可以作为ZL药物，其可以作为抗肿瘤药物，抗病毒 药物，抗真菌药物和抗抑郁药物有着基因ZL的优势，给许多难以治愈的疾病带来了曙光，对于核苷酸的分析和制备，在不同官能团的色谱柱在不同分离模式中什么样的出色应用，我们将会做详细分享。

第二部分：多肽药物的开发已经发展到疾病FZ的各个领域如抗肿瘤多肽、抗病毒多肽、多肽疫苗、细胞因子模拟肽、KJ活性肽、诊断用多肽、减肥用多肽等，大多数多肽是通过合成制备的，合成多肽工艺中的杂质和辅料如何监控和分析也成为新药开发的一大挑战，本部分将分享赛默飞特殊官能团色谱柱在这些领域中的新应用。

讲师：史俊霞

讲师介绍

史俊霞现任赛默飞世尔科技（ZG）有限公司色谱和质谱部门耗材高级产品专家，加入赛默飞后多次赴欧美研修生物药物表征新技术新方案，并特色地结合本地药企的研发需求，成功开发了IgG2,IgG4，双特异性抗体，融合蛋白的多维度表征方法，对多肽药物工艺控制杂质分析有着独到的见解和特色方案，帮助本土企业解决了很多工艺杂质控制难题， 在核苷酸药物分析中，根据企业需求，给出jing准解决方案，助力企业快速完成QC方法转移和确认。

她毕业于华东师范大学分析化学专业，一直在知名仪器耗材公司从事客户支持和方法开发，尤其擅长蛋白，抗体，多肽，疫苗等ZL性药物的关键质量属性和工艺控制多维度表征。

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免费听课，惊喜相送

即日起至6月30日，凡报名会议的客户，下单时可获得带250ul内插管的聚丙烯样品瓶一套，实付满8000元再送高回收样品瓶一套。赠品有限，先到先得哦！

近期爆发的新型冠状病毒肺炎（COVID-19，对应的病毒为SARS-CoV-2）突出了开发有效ZL方法的重要性。在近期的公众号中，我们向大家介绍了“人民的希望”瑞德西韦的工作机制^[1]，在此，我们结合疫苗、血清、多肽和单抗的研究案例，向大家继续介绍靶向病毒的大分子ZL和我们的解决方案是如何推动下一代ZL研究的。

No.1针对MERS的疫苗优化研究

中东呼吸综合征冠状病毒(MERS-CoV)，是近年来第二个造成大规模人群传染的冠状病毒，相较于SARS病毒，其致死率高、发病快，因此急需研发有效的疫苗用于被动免疫。在2015年由NIH的Barney S. Graham主导的研究中，科学家评价和比较了靶向MERS的多种疫苗方案^[2]。

基于DNA和蛋白为免疫原的免疫流程，图片源自参考资料2。

围绕MERS冠状病毒的刺突蛋白(S)，研究构建了多种cDNA和蛋白免疫原，分别通过电转和配合佐剂的形式免疫小鼠。为了提升研究的安全性，科学家建立了带有化学发光报告基因的假病毒体系。通过检测由病毒感染所致的化学发光，研究利用可溶性DPP4（MERS 靶点）和DPP4抗体验证了假病毒的功能。

MERS假病毒功能性验证，左图：基于过表达技术验证DPP4过表达提升病毒的感染能力，Huh7.5内源性高表达DPP4。中图：基于可溶性DPP4的竞争实验。右图：利用DPP4抗体YZ假病毒的感染。假病毒的化学发光检测基于96-well white/black Isoplate微孔板和Microbeta平台。图片源自参考资料2。

借助假病毒体系，研究追踪和评价了不同免疫策略产生的血清的中和能力和针对多种MERS病毒株的交叉中和能力。从结果可以看出，全程S1蛋白和2X S DNA-S1蛋白的免疫方案所获得的抗体Z为有效，且能中和多种MERS病毒株。通过进一步的竞争实验和血清吸附实验，研究证实不同的免疫流程得到的血清靶向的S蛋白位置也不一样。与经典的微量中和实验(Microneutralization)相比，研究证实假病毒体系评价抗体中和能力更为敏感，灵敏度约有一个数量级的提升。通过解析抗体的亚型，研究发现基于S DNA的免疫方案能诱导IgG2a为主导的免疫反应，而S1蛋白刺激则产生IgG1为主导的免疫反应。在小鼠中，IgG2a的出现反映了Th1型免疫反应，促进了抗病毒相关因子如interferon-γ的释放，提升了T细胞介导的抗病毒反应。因此，相较于蛋白，基于DNA的疫苗可以通过建立T辅助细胞免疫应答来更有效的控制病毒感染。

血清的交叉中和能力检测。假病毒的化学发光检测基于96-well white/black Isoplate微孔板和Microbeta平台。图片源自参考资料2。

对应的，在非人灵长类动物（印度恒河猴）模型上，全程S1蛋白和2X S DNA-S1蛋白的免疫方案产生的中和抗体滴度优越于基于全程DNA的免疫方案。病毒接种后，相较于对照组，免疫组动物显著降低肺部病理指标。疫苗中DNA免疫原的引入更是进一步缓解肺部的损伤情况，并加速了康复过程。

基于非人灵长类动物（印度恒河猴）模型的疫苗评价。上图：免疫流程。下左图：动物血清中和实验，基于96-well white/black Isoplate微孔板和Microbeta平台。下右图：通过CT评价疫苗的保护作用。图片源自参考资料2。

No.2基于转基因牛的抗病毒血清研究

在抗击SARS和流感的临床疗法中，“恢复期血浆”ZL(Convalescent‑phase plasma therapy)获得了一定的成效，有效降低了死亡率。但是，该法的LX很大程度上依赖于是否能及时获得有效的血清。相比下，基于动物的超免疫血清虽然能解决量的问题，但其使用可能会导致严重的免疫反应和毒性。单克隆抗体疗法，又一种基于被动免疫的ZL方法，面临耗时长和出现耐药突变病毒株等挑战。

为了解决上述的问题，有研究人员将目光转向了转基因牛(Transchromosomic (Tc) bovines)来快速获得大量、有效的抗病毒血清。通过基因工程，研究人员敲除牛自身的IgG，并引入完整的、可指定IgG亚型人抗体表达体系，来达到免疫系统人源化的效果。免疫后的牛每只每月可提供高达150到600 g的人IgG。目前，已有多项临床前研究利用该技术对抗MERS和Ebola等传染病^[3,4]。在此，我们着重介绍靶向MERS的研究。

在免疫原段，该研究利用了两种材料：灭活的Jordan病毒株(WKVV)和基于Al-Hasa病毒株S蛋白的纳米材料(SPNV)。两种免疫原均能刺激产生S蛋白特异的血清和人IgG(SAB-300/301)。基于安全性和生产可行性等因素，研究主要围绕基于SPNV产生的人IgG开展动物和临床研究。

上图：基于转基因牛的免疫过程。下图：利用Anti-Spike抗体检测所得血清（左）和纯化人IgG（右）的有效含量。图片源自参考资料3。

除了特异性检测外，研究利用免疫荧光成像技术，结合Anti-Spike抗体来衡量免疫所得血清和抗体的抗病毒中和作用(FRNA50)。相较于只能完成一轮感染的假病毒体系，FRNA50能直观、全面地反映药物处理对于病毒感染能力的影响。在该研究中，此法还结合mRNA检测验证病毒的灭活效果，确保疫苗的安全性。结合FRNA50和传统的半数组织培养感染量(Tissue culture infectious dose-50%,TCID50)测定法，研究证明纯化的血清含有高水平的中和多抗。在过表达DPP4的小鼠模型上，无论是预防性还是ZL性给药，SAB-301都能有效的控制肺部的病毒量。在安全性上，SAB-301不支持抗体依赖的病毒感染增强作用(Antibody-dependent enhancement,ADE)。目前，由SAB Biotherapeutics公司推出的SAB-301已进入一期临床试验。

利用FRNA50检测所得血清（左）和纯化人IgG（右）靶向MERS病毒的中和能力。FRNA50基于Operetta高内涵平台和配套微孔板。图片源自参考资料3。

No.3利用ADCC抗击H7N9禽流感的单抗研究

作为肿瘤免疫疗法的主要推动者，单克隆抗体（单抗）也被广泛用于抗击SARS和HIV等多种病毒的研究中。此外，基于HIV-1和流感中和单抗的研究也为疫苗设计提供了新的思路。但是，基于杂交瘤技术的传统单抗制备面临着耗时长，步骤多且繁琐等问题，限制了其对可能出现的新型疫情爆发的应对能力。相比下，噬菌体展示技术为快读获得高亲和力人源单抗提供了新的途径。基于该技术平台，复旦大学研究人员建立超大型天然全人源抗体库，并成功鉴定靶向MERS和流感的QL抗体^[5,6]。

在抗击H7N9流感的工作中，为了获得低突变的高特异抗体，研究人员以重组表达的HA和HA1蛋白为抗原，基于健康人B细胞来源的天然抗体库开展多轮筛选，获得单抗m826。经序列分析，研究人员证明m826与胚系基因高度同源，是胚系抗体。相较于体细胞高度突变的抗体，胚系抗体建立时间短，安全性高且成药性更好，适用于靶向急性感染的抗体和疫苗研发。

基于噬菌体展示技术的H7N9抗体筛选，图片源自参考资料6。

非常有意思的是，在红细胞凝集YZ (Hemagglutination inhibition,HI)反应中，m826仅表现出微弱的抗病毒能力。进一步的细胞病变效应(Cytopathic effect,CPE)检测和免疫荧光法中和实验证明m826不能中和流感病毒，YZ其在靶细胞的增殖。利用亲脂性荧光染料R18和SP-DiOC18（3）来标记病毒，研究发现m826对病毒与靶细胞的结合和膜融合过程无显著影响。但是，m826能很强结合表达H7N9 HA蛋白的细胞，是ADCC（Antibody-dependent cell-mediated cytotoxicity，抗体依赖的细胞介导的细胞毒性作用）活力的QL介导者。同时，由于不能中和H7N9病毒，m826还能成为高价值的工具性抗体。在动物模型上，IgG1 m826能有效的预防和控制H7N9的感染。因此，m826依赖于ADCC，而不是中和能力抗击流感病毒。这一发现为抗病毒抗体的筛选和研发提供了新的思路和途径。

左图：基于免疫荧光成像技术（荧光标记病毒）的中和实验，H7N4抗体为中和阳性对照。右上：病毒结合检测，红色荧光探针R18标记病毒，感染30分钟后进行成像检测。NA为结合阴性对照；m336为阴性对照抗体。右下：利用荧光探针R18和SP-DiOC18（3）双标记病毒，病毒膜融合发生会诱导SP-DiOC18（3）绿色荧光信号加强。Baf A1为融合阴性对照。上述高通量成像检测均基于Opera或Operetta高内涵平台。图片源自参考资料6。

No.4靶向膜融合的广谱抗病毒多肽研究

作为动物来源的病毒，冠状病毒因其多样性，较高的传播能力和进化能力限制了单一的靶向疗法的临床应用。因此，从长远角度来看，能作用于多种冠状病毒的新型广谱抗病毒 药物，会成为抗击流行性和新型冠状病毒感染的终 极武器。相较于高度变异的受体结合区(Receptor-binding domain, RBD)，病毒膜融合涉及的Heptad repeat (HR)区高度保守。同时膜融合也是病毒感染和复制重要的功能性过程。因此，该区域成为了YZ性多肽的研究ZD。靶向冠状病毒的膜融合过程，来自于复旦大学的研究团队研发出广谱多肽YZ剂EK1，为抗击冠状病毒和类似病毒提供了新的大分子ZL策略^[7]。

冠状病毒可通过胞内体膜融合途径(Endosomal pathway)或/和细胞表面胞浆膜融合途径(Non-endosomal pathway)进入细胞。病毒通过结合宿主细胞受体激活其S2亚基的HR1和HR2区，互相结合形成对膜融合至关重要的6-HB(Six-helix bundle)结构。

冠状病毒的膜融合过程和竞争性多肽工作机制，图片源自参考资料7。

鉴于此，研究人员以多种冠状病毒的保守HR区为模板，合成HR1和HR2区来源的多肽（HR1P和HR2P）用于竞争。通过过表达技术，研究进一步建立靶向多种冠状病毒的细胞细胞融合实验，系统性筛查HR1P和HR2P对细胞融合的YZ。结果显示由OC43株来源的HR2P具有广谱且的YZ融合能力。在此基础上，研究人员通过引入氨基酸和突变等方法，进一步优化多肽的可溶性和成药性。所获得的多肽EK1，在进一步的一系列体外检测，包括细胞细胞融合实验，假病毒法，Blam-Vpr法和活病毒增殖能力检测中，都表现出的广谱抗病毒能力。

细胞细胞融合实验，过表达病毒S蛋白并带有GFP信号的293T细胞为作用细胞，Huh-7为靶细胞，

图片源自参考资料7。

除了可以用于免疫缺陷和老年患者外，多肽类药物的另一优势是支持非侵入性鼻腔给药，适合用于靶向呼吸道的病毒感染。因此，检测鼻腔给药下的EK1的体内分布非常重要。基于活体成像技术，研究观察到Cy5荧光标记的EK1可广泛分布于整个呼吸道中，并集中在肺部。此外，一些肺外的器官，包括肝脏、肾和脾，都能检测到EK1的分布，表明EK1可以进入血液循环系统和其他脏器中。因此，EK1还可能作用于由冠状病毒导致的系统性或多器官感染。在OC43和MERS感染小鼠模型上，EK1均表现出QL的抗病毒能力，有效YZ了因感染带来的体重减轻和死亡现象。从体外到体内的多方面安全性评价表明通过鼻腔给药的EK1是低免疫原性，安全的ZL策略。因此，EK1是一个新型、有潜力的广谱抗冠状病毒 药物，值得进一步的深入研究。

上：基于活体成像检测鼻腔给药下Cy5标记的EK1在小鼠体内的分布；小动物活体成像检测基于IVIS平台。下：EK1处理对模型鼠死亡率、体重和病毒滴度的影响，图片源自参考资料7。

总结

通过上述四个案例，我们总体介绍了靶向病毒段的大分子疗法的研究流程和关注点。助力此类ZL方法的研发，珀金埃尔默提供成熟的整体应用解决方案。针对携带萤火虫报告基因的假病毒研究，我们提供全面、配套的涵盖化学发光试剂，微孔板和高通量检测平台的解决方案。对于基于慢病毒包装系统的假病毒，我们还可以提供p24检测解决方案，用于快速衡量病毒的感染能力。此外，基于成像平台的解决方案，我们还可以分析短程和长程的复杂亚细胞活动，例如由病毒介导的膜融合过程。在血清和抗体的筛查和分析中，强大的高内涵解决方案能Z大程 度发挥表型筛选的优势，发现具有中和能力、安全的潜在抗体。同时，ADCC，作为关键的抗感染抗体工作机制之一，也是我们的主要应用关注点。针对ADCC的检测，我们提供金标准、灵活的放射和非放射解决方案，助力抗体类药物的深入评价^[8]。Z后，在临床前动物研究中，除了中和检测外，我们提供覆盖功能到结构的活体成像解决方案，助力病理检测、药物分析和药效评价等核心工作。

参考文献

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5. Ying T, et al. Junctional and allele-specific residues are critical for MERS-CoV neutralization by an exceptionally potent germline-like antibody. Nat Commun. 2015 Sep 15;6:8223.

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8. DELFIA经典技术应用于单抗研发及细胞ZL——AD0116细胞杀伤ZT之ADCChttps://mp.weixin.qq.com/s/0lkBdDHL5MFIyoeoFV4wWQ

ZG国际生物仿制药论坛于2014年3月6-7日在武汉召开。300多位国内外生物仿制药lingxian企业高管参加了此次会议，带来了Z先进的国际技术理念、成功的国内外企业实践案例，为ZG生物制药企业在药品申报注册、技术协作以及质量优化领域带来积极的提升和推动。ProteinSimple公司应邀参加了此次会议，并介绍了全柱检测毛细管等电聚焦电泳技术。

iCE3是采用全柱检测技术的毛细管等电聚焦电泳，既结合了凝胶平板等电聚焦技术的高分辨率与可靠性，又具备了毛细管柱分离技术的自动进样和定量检测能力。与单点检测的普通cIEF不同，iCE3在蛋白聚焦分离后无需移动，容易优化聚焦时间，重现性好，速度快3-5倍，能检测宽pI值的样品。主要应用在蛋白质产品的表征、质量控制、制剂研究等。产品遍布各大制药公司，在北美拥有高达80%的市场占有率。