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金刚烷胺

金刚烷胺Z早是用于YZA型流感病毒的药物。在20世纪90年代末，曾用于动物病毒的预防和ZL。但长期使用金刚烷胺会使动物体内产生一定的毒性，这些毒素Z终会累积在人体内，从而危害人的身体健康。金刚烷胺在动物性食品中残留量的检测也是今年国家食品安全监督抽检中的一个重要检测项目。

安谱实验根据2019年新国标GB31660.5-2019《动物性食品中金刚烷胺残留量的测定 液相色谱-串联质谱法》，使用CNW PSA SPE小柱进行实验，此方法耗材简单易得，回收率高，重现性好。

一、样品前处理

1.猪肉基质： 

称取均质处理的猪肉样品2g于50mL离心管中，加入 D15-金刚烷胺内标溶液（加标浓度20ppb，猪肉基质空白样品则不需要加标），加1%乙酸乙腈溶液10mL，漩涡2min，3000 r/min离心5min，上清液转入另一50mL离心管中，重复提取一次，合并两次上清液。在合并的上清液中加无水硫酸钠3g、正己烷10mL，涡旋1min，3000r/min离心5min，弃去正己烷层，剩余溶液转至100mL鸡心瓶中，40℃水浴下旋转蒸干，用1.0 mL甲醇溶解残渣。

2.鸡肝基质：

称取均质处理的鸡肝样品2g于50mL离心管中，加入 D15-金刚烷胺内标溶液（加标浓度20ppb，鸡肝基质空白则不需要加内标），加1%乙酸乙腈溶液10mL，漩涡2min，3000r/min 离心5min，上清液转入另一50mL 离心管中，重复提取一次，合并两次上清液。在合并的上清液中加无水硫酸钠3g、正己烷10mL，涡旋1min，3000r/min离心5min，弃去正己烷层，剩余溶液转至100mL鸡心瓶中，40℃水浴下旋转蒸干，用1.0mL甲醇溶解残渣。

二、小柱操作

SBEQ-CA2450  CNWBOND PSA 乙二胺基-N-丙基 SPE小柱 50mg， 1mL/100 pcs

净化：将溶解液直接匀速通过小柱，呈滴状流入试管中。

浓缩：量取滤液0.5 mL于离心管中，40℃氮气吹干，加入50%乙腈水溶液0.5 mL，涡旋30s，10000 r/min离心5 min，取上清液过0.22 μm针式滤器供上机测定

三、LCMS/MS测定条件

液相条件: 

色谱柱：Athena C18（2.1*50mm，1.8um）

流速：0.2 mL/min

柱温：40℃

进样量：1ul

流动相:  A: 0.1%甲酸水   B: 甲醇  

质谱参数:  

离子源：ESI

采集模式：正模式

扫描方式：MRM      

离子源温度：300℃

电压：4000V

金刚烷胺离子对：152_135（定性定量） 152_93（定性）

盐酸金刚烷胺-D15离子对：167_150（定性定量）

四、实验谱图

1.金刚烷胺标品图谱20ppb

2.猪肉基质加标谱图（20ppb）

3.猪肉基质空白谱图

4.鸡肝基质加标20ppb

 5.鸡肝基质空白

五、实验数据

采用基质配标标准溶液配制标准曲线，本次实验猪肉基质空白中检出金刚烷胺1.1ug/kg，鸡肝基质空白中检出金刚烷胺0.3ug/kg 。

六、实验耗材

金刚烷胺，是最zao用于YZ流感病毒的抗病du药。在20世纪90年代末，曾用于动物病毒的预防和ZL。但长期使用金刚烷胺会使动物体内产生一定的毒性，这些毒素ZZ会累积在人体内，从而危害人的身体健康。我国农业部 560 号公告明确规定抗病du药物为禁用兽药。金刚烷胺在动物性食品中残留量的检测是国家食品安全监督抽检中的一个重要检测项目。

安谱实验根据国标GB31660.5-2019《动物性食品中金刚烷胺残留量的测定 液相色谱 - 串联质谱法》，使用QuEChERS多功能针式滤器（SBEQ-CE01-PSA-50）将四步净化步骤整合简化为一步操作，提取液经过滤器直接过滤至进样瓶中即可上机检测，实现同时净化吸附和微孔滤膜过滤等多种作用功能，极为显著地减少样品净化处理步骤，使操作更为简单，大幅提高工作效率。实验结果回收率高，稳定性好，可完成国标应用检测。

1

实验过程

样品基质

鸡肉、猪肝

前处理方法

基质均质后，称 2g（精确至 20mg）装入 50mL 带盖离心管中加入金刚烷胺 -D15 内标，加入 10mL 1% 乙酸乙腈，涡旋 2min，3000r/min 离心 5min，收集上清液，重复提取一次，合并两次上清液；上清液中加入无水硫酸钠 3g，正己烷 10mL，涡旋 1min，3000r/min 离心 5min，弃去正己烷层，剩余溶液氮吹干， 用 1.0mL 甲醇溶解残渣。

净化

甲醇提取液匀速通过 QuEChERS 多功能针式滤器，收集净化液。

浓缩复溶

用移液器吸取 0.5mL 净化后溶液于离心管中，40℃氮气吹干；加入 0.5mL 50% 乙腈水溶液，涡旋 30s，10000r/min 离心5min，取上清液上 LC-MS/MS 测试。

基质匹配标准溶液

取各自空白组织试料，除不加 D15- 金刚烷胺工作液外 , 均按照上述前处理方法制得空白基质溶液，准确量取金刚烷胺和D15- 金刚烷胺标准工作液适量，分别用空白基质溶液稀释，制成金刚烷胺浓度为 20ug/L，D15- 金刚烷胺浓度为 20ug/L 的基质匹配标准溶液，临用现配，供 LC-MS/MS 测定。

2

色谱条件

色谱柱：Athena C18 2.1×50mm，1.8um （LAEQ-2105UA）

流动相：A：5mM 乙酸铵（含 0.1% 甲酸）水溶液；B：乙腈

流速：0.2ml/min

进样量：10uL

程序洗脱：0-0.5min，5%B；3min，95%B；3.5-5min，5%B

质谱条件（以 PerkinElmer 为例）：电喷雾离子源，正离子扫描，多反应离子监测，反吹干燥气60，质谱接口加热温度 320℃，雾化气220，ESI 喷雾电压4500V，辅助加热气温度 300℃。

3

实验谱图

图1 鸡肉基质金刚烷胺标准曲线

图2 猪肝基质金刚烷胺标准曲线

图3 鸡肉基质 -CNW 净化后提取离子图

图4 鸡肉基质 - 某 A 品牌净化后提取离子图

图5 纯溶剂标准品提取离子图

图6 猪肝基质 -CNW 净化后提取离子图

图7 猪肝基质 - 某 A 品牌净化后提取离子图

图8 纯溶剂标准品提取离子图

4

实验数据

表1. 鸡肉基质中金刚烷胺的回收率

表2. 猪肝基质中金刚烷胺的回收率

表3. 三种净化方法（鸡肉基质）的金刚烷胺回收率对比

注：对比 QuEChERS 多功能针式滤器与 QuEChERS，实验结果显示 QuEChERS 多功能针式滤器性能未改变，效果更好。

5

实验结论

采用所开发的 SBEQ-CE01-PSA-50 小柱进行两种类型基质（鸡肉、猪肝）中的 0.01ug/g 金刚烷胺加标实验，样品间平行性良好，RSD值较小，基质适应性较好，杂质去除效果较好，除杂后基质效应小，优于某 A 品牌。加标回收率优于传统的 QuEChERS 和某 A 品牌净化方法。因此，QuEChERS 多功能针式滤器性能优异，可完成国标应用检测。

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实验耗材

氨丙啉的危害及检测目的

氨丙啉是一种抗球虫药，主要以盐酸盐形式存在，在世界范围内被广泛应用于FZ球虫病。由于该药GX、安全，不易引起球虫耐药性，在鸡、兔、犊牛、羔羊中均有应用。盐酸氨丙啉虽然毒性较低，但是由于不规范使用，抗球虫药长期、持续添加在饲料中，极容易造成药物在肉及蛋品中的残留现象，危害人体健康。为此我国农业农村部和国家市场监督管理总局2019年发布的GB 31650-2019《食品安全国家标准食品中兽药ZD残留限量》中明确规定了氨丙啉在动物靶组织中的残留限量。

本文阐述了如何将氨丙啉从样品基质中分离提取出来，并经过净化后，转化成液质联用仪可以检测的形式。以提取、净化为ZD，依据行标SN/T 4583-2016，为检测人员和相关领域研究人员提供一定的参考。

检测项目：氨丙啉

应用范围：鸡肉、鸡肝、鸡肾、鸡蛋、牛肉、牛肝、牛肾、牛脂肪和牛奶

液相色谱-质谱/质谱法

方法原理：试样中的氯丙啉用1 %三lyu乙酸-乙腈溶液（3+7）提取，经HLB固相萃取柱净化，用液相色谱-质谱/质谱测定，外标法定量。

前处理仪器：

分析天平（感量0.01 g 和0.1 mg）；均质器（15000 r/min）；离心机（5000 r/min）；涡旋振荡器；氮吹仪；具塞塑料离心管（50 mL），比色管（50 mL）。

检测仪器：LC-MS/MS+ESI源

#样品的制备、保存与要求#

1.肌肉、肝脏、肾脏、鸡蛋、脂肪

取样品中又代表性的可食部分约500 g，用粉碎机粉碎，装入洁净容器作为试样，密封并做好标识，于零下18 ℃ 冰箱内保存。

2.牛奶

从所取全部样品中取出有代表性样品500 mL，充分混匀，装入洁净容器中，密封，并标明标记，于4 ℃ 以下冷藏存放。

制样操作过程中应防止样品受到污染或发生残留物含量的变化。

前处理方法

1.提取

称取试样约5 g（精确到0.01 g ）于50 mL塑料离心管中，加入20 mL 1 %三lyu乙酸-乙腈溶液（3+7），15000 r/min均质提取1 min，5000 r/min离心5 min，上清液转移至50 mL比色管中，残渣再用20 mL三lyu乙酸-乙腈溶液重复提取一次，合并提取液于比色管中，定容至刻度，混匀。提取液经滤纸过滤后待净化。

2.净化

分取10 mL提取滤液，于45 ℃ 氮气吹至约3 mL，加入2 mL正己烷，涡旋振荡30 s，5000 r/min离心5 min，弃去正己烷层，下层溶液以小于2 mL/min流速过HLB柱（6 cc/500 mg，6 mL甲醇和6 mL水活化），3 mL水洗涤样品管后上柱，再用6 mL水淋洗小柱，抽干10 min，以6 mL甲醇洗脱并收集，洗脱液在45 ℃氮气吹干，用1.0 mL定容液（乙酸铵-乙腈溶液4+6）溶解，过0.2 μm滤膜后，供液相色谱-质谱/质谱分析。

国标解读及注意事项

1.盐酸氨丙啉标准物质先用水溶解，再用乙腈定容，配成溶液浓度以氯丙啉计为100 μg/mL的标准储备液。

2.本方法使用1 %三lyu乙酸-乙腈溶液提取目标化合物，正己烷除脂，HLB柱富集净化，稀释倍数=5，相当于1 g试料进行上机检测。

3.提取液先用氮吹方法浓缩，乙腈挥发后，剩余水相用正己烷除脂后，再过柱净化。

4.固相萃取过程中需要控制流速，使溶液一滴一滴地流下，以保证富集的效果。

5.本方法使用基质曲线进行定量分析，根据具体检测样品选取合适的基质制作空白样品基质液。

参考文献

SN/T 4583-2016 出口动物源食品中氨丙啉残留量的测定 液相色谱-质谱/质谱法

图1 动物源性食品中氨丙啉残留量测定的前处理流程图

氨丙啉信息表

伊维菌素的危害及检测目的

阿维菌素类药物（Avermectins，AVMs）由链霉菌的发酵产物中分离的大环内酯类抗生素，包括伊维菌素、多拉菌素、阿维菌素、爱普菌素等品种。阿维菌素类药物是目前兽医临床上应用最广泛的兽用驱虫药，被广泛应用于牛、羊等动物，其作用机理是干扰害虫神经生理活动，致使害虫出现麻痹而中毒死亡。阿维菌素类药物虽然作用剂量小，但其脂溶性较高，残留时间长，世界卫生组织将其列为高毒化合物。该类药物的不规范使用和食物链富集，易引发运动失调、呼吸缓慢、中 枢神经系统中毒等症状，甚至致人死亡，对人类健康造成严重威胁，所以应对动物性食品中阿维菌素类药物含量进行监测。我国农业农村部和国家市场监督管理总局2019年发布的GB 31650-2019《食品安全国家标准食品中兽药最 大残留限量》中明确规定了伊维菌素、多拉菌素、阿维菌素、乙酰氨基阿维菌素在动物靶组织中的残留限量。

本文阐述了如何将伊维菌素从样品基质中分离提取出来，并经过净化后，转化成液相色谱-串联质谱仪可以检测的形式。以提取、净化为ZD，依据国标GB/T 22953-2008，为检测人员和相关领域研究人员提供一定的参考。

检测项目：伊维菌素、阿维菌素、多拉菌素、乙酰氨基阿维菌素

应用范围：河豚鱼肌肉、鳗鱼肌肉、烤鳗

GX液相色谱法

方法原理：河豚鱼、鳗鱼和烤鳗中残留的伊维菌素、阿维菌素、多拉菌素和乙酰氨基阿维菌素残留用乙腈提取后，正己烷脱脂，中性氧化铝柱净化。样品溶液供液相色谱-串联质谱仪检测，外标峰面积法定量。

前处理仪器：

分析天平（感量0.1 mg和0.01 g）；组织捣碎机；匀浆机（8000 r/min）；离心机（4000 r/min）；超声波水浴；液体混匀器；固相萃取装置；氮吹仪。 

检测仪器： HPLC-MS/MS+ESI源

试样的制备与保存

取样品约500 g用组织捣碎机捣碎，装入洁净容器作为试样，密封，并标明标记，于零下18 ℃冰箱中保存。制样操作过程中应防止样品受到污染或残留物含量发生变化。

前处理方法

1.提取

准确称取2 g组织样品（准确至0.01 g）至50 mL离心管中，加入8 mL乙腈，匀浆机上8000 r/min均质20 s，4000 r/min离心5 min，上清液转移至50 mL离心管中；另取一50 mL离心管加入8 mL乙腈，洗涤匀浆刀头10 s，洗涤液移入前一离心管中，用玻棒捣碎离心管中的沉淀，液体混匀器上振荡30 s，4000 r/min离心5 min，上清液合并至50 mL离心管，离心管中的沉淀再加入6 mL乙腈，用玻棒捣碎离心管中的沉淀，液体混匀器上振荡30 s，4000 r/min离心5 min，上清液合并至50 mL离心管中，乙腈定容至25.0 mL刻度，混匀备用。

2.净化

向上述装有样品提取液的50 mL离心管中加入10 mL乙腈饱和的正己烷脱脂，涡旋振荡1 min，4000 r/min离心5 min，弃去上层正己烷，重复此操作一次，下层乙腈溶液待用。

将中性氧化铝净化柱安置在固相萃取装置上，准确移取10.0 mL已脱脂的样品提取液至中性氧化铝净化柱中，控制流速在1 mL /min～2 mL /min，用2 mL×2乙腈淋洗净化柱，收集全部流出液，流出液转移至吹氮管中，50 ℃下氮气吹至干，用1.00 mL乙腈溶解残渣，并置超声波水浴中超声振荡10 min，0.2 μm滤膜过滤，供液相色谱-串联质谱测定。

国标解读及注意事项

1.标准物质用乙腈配成100 μg/mL的标准储备液，在零下18 ℃保存。

2.本方法通过乙腈提取，正己烷脱脂，中性氧化铝柱净化的方式进行目标化合物的提取净化。

3.本方法采用洗涤均质刀头，三次提取的方式，提高目标化合物的回收率。

4.氧化铝柱净化过程中除了活化溶液，其余溶液（上样液和淋洗液）都要收集。为保证净化效果，过柱时需要控制流速，使溶液一滴一滴地流下。可用商品化的中性氧化铝固相萃取柱替代方法中手工填充的中性氧化铝净化柱。

5.由于该类化合物没有对应的同位素内标用于回收率的校正，所以本方法使用空白样品提取液配制基质标准工作液，进行定量。

参考文献

GB/T 22953-2008 河豚鱼、鳗鱼和烤鳗中伊维菌素、阿维菌素、多拉菌素和乙酰氨基阿维菌素残留量的测定 液相色谱-串联质谱法

河豚鱼、鳗鱼中伊维菌素残留量测定的前处理流程图：

动物性食品中杆菌肽残留量测定的前处理方法

杆菌肽的危害及检测目的

杆菌肽是由一组类似的多肽成分组成的混合物，其中杆菌肽A、B1和B2组分被认为ZJ抗微生物活性。兽医临床上常见以杆菌肽锌和杆菌肽亚甲基水杨酸盐形式用于畜禽促生长和FZ动物的坏死性肠炎。在欧盟，亚甲基水杨酸杆菌肽还被推荐用于ZL由产气荚膜梭菌引起的兔坏死性肠炎。杆菌肽KJ谱广、吸收低，但会带来神经毒性和肾毒性，还会产生抗药性风险，是ZL中使用普通抗生素无效的ZH选择。若该类抗生素通过食物链进入人体，会对人体造成健康隐患。因此我国农业农村部和国家市场监督管理总局2019年发布的GB 31650-2019《食品安全国家标准食品中兽药ZD残留限量》中明确规定了杆菌肽在动物靶组织中的残留限量。

本文阐述了如何将杆菌肽从样品基质中分离提取出来，并经过净化后，转化成液质联用仪可以检测的形式。以提取、净化为ZD，依据国标GB/T 20743-2006，为检测人员和相关领域研究人员提供一定的参考。

检测项目：杆菌肽

应用范围：猪肉、猪肝和猪肾

液相色谱-质谱/质谱法

方法原理：试样中杆菌肽残留用酸化的甲醇水匀浆提取，经双硫腙三lv甲烷溶液进行液液分配净化后，再经固相萃取柱净化，液相色谱-串联质谱仪测定，外标法定量。

前处理仪器：

分析天平（感量0.01 g 和0.1 mg）；高速组织捣碎机（10000 r/min）；振荡器；离心机（4000 r/min）；离心管（10 mL和60 mL具塞）；贮液器（50 mL）；固相萃取真空装置；氮吹仪；微量注射器（25 μL和100 μL）。

检测仪器：LC-MS/MS+ESI源

样品的制备与保存

猪肝脏、肾脏要去除脂肪和其他的非肝脏、肾脏组织，猪肉要去皮和骨头，将其搅碎拌匀，分出0.5 kg作为试样，将制备好的试样密封，并做上标记。试样置于零下18 ℃条件下保存。

前处理方法

1.提取

称取10 g试样（精确到0.01 g ）置于60 mL离心管中，加入0.1 mL甲酸和20 mL甲醇+水（1+1），于高速组织捣碎机上匀浆提取1 min，然后加入20 mL经甲醇+水（1+1）饱和的0.0025 %双硫腙三lv甲烷溶液，于振荡器上剧烈振荡10 min，以4000 r/min离心10 min，取上清液10 mL于50 mL试管中，弃去其余上清液。

往上述双硫腙三lv甲烷溶液中加入30 mL水，捣碎残渣，置于振荡器上剧烈振荡10 min，移取全部上清液于另一60 mL离心管中。重复提取一次，合并上清液，混匀，以4000 r/min离心10 min，取上清液30 mL与50 mL试管中的提取液合并，混匀。

2.净化

在预处理过的固相萃取柱（HLB 60 mg/3 mL用3 mL甲醇和3 mL水活化）顶部连接贮液器，移入上述试管中样液，待样液全部通过萃取柱后，加入2 mL水，弃去全部流出液。然后，将固相萃取柱在50 kPa～55 kPa的负压下抽干1 h，ZH用2 mL甲醇洗脱，收集洗脱液于10 mL试管中，洗脱液在35 ℃水浴中用氮气吹干，用0.5 mL甲醇重新溶解残渣，再加入0.5 mL 0.3 %甲酸溶液，摇匀后，供液相色谱-串联质谱仪测定。

国标解读及注意事项

1.杆菌肽标准物质用0.1 %甲酸甲醇溶液配成浓度为0.1 mg/mL的标准储备液，在2 ℃～4 ℃保存，有效期3个月。

2.本方法使用酸化甲醇水均质提取，经双硫腙三lv甲烷液液分配净化后，再用HLB固相萃取柱净化，相当于5 g样品进行上机检测。

3.杆菌肽易溶于水，在弱酸性条件下稳定，有机相越高回收率越低，使用酸化甲醇水（1+1）提取回收率高但是容易乳化，使用双硫腙三lv甲烷进行液液分配净化，离心后可降低乳化程度，使上清液更加清澈。

4.通过两次水洗双硫腙三lv甲烷残渣，不仅可提高目标物的回收率，确保稀释倍数准确，还可以在合并上清液后降低甲醇比例，为下一步固相萃取净化做好准备。

5.固相萃取过程中需要控制流速，使溶液一滴一滴地流下，以保证净化富集的效果。

6.本方法使用基质标准工作溶液进行定量分析，根据具体检测样品选取合适的基质制作空白样品提取液配制基质曲线。

参考文献

GB/T 20743-2006 猪肉、猪肝和猪肾中杆菌肽残留量的测定 液相色谱-串联质谱法

图1 猪肉、猪肝和猪肾中杆菌肽残留量测定的前处理流程图

表1  杆菌肽信息表

动物性食品中氨丙啉残留量测定的前处理方法

氨丙啉的危害及检测目的

氨丙啉是一种抗球虫药，主要以盐酸盐形式存在，在世界范围内被广泛应用于FZ球虫病。由于该药GX、安全，不易引起球虫耐药性，在鸡、兔、犊牛、羔羊中均有应用。盐酸氨丙啉虽然毒性较低，但是由于不规范使用，抗球虫药长期、持续添加在饲料中，极容易造成药物在肉及蛋品中的残留现象，危害人体健康。为此我国农业农村部和国家市场监督管理总局2019年发布的GB 31650-2019《食品安全国家标准食品中兽药ZD残留限量》中明确规定了氨丙啉在动物靶组织中的残留限量。

本文阐述了如何将氨丙啉从样品基质中分离提取出来，并经过净化后，转化成液质联用仪可以检测的形式。以提取、净化为ZD，依据行标SN/T 4583-2016，为检测人员和相关领域研究人员提供一定的参考。

检测项目：氨丙啉

应用范围：鸡肉、鸡肝、鸡肾、鸡蛋、牛肉、牛肝、牛肾、牛脂肪和牛奶

液相色谱-质谱/质谱法

方法原理：试样中的氯丙啉用1 %三氯yi酸-乙腈溶液（3+7）提取，经HLB固相萃取柱净化，用液相色谱-质谱/质谱测定，外标法定量。

前处理仪器：

分析天平（感量0.01 g 和0.1 mg）；均质器（15000 r/min）；离心机（5000 r/min）；涡旋振荡器；氮吹仪；具塞塑料离心管（50 mL），比色管（50 mL）。

检测仪器：LC-MS/MS+ESI源

样品的制备、保存与要求

1.肌肉、肝脏、肾脏、鸡蛋、脂肪

取样品中又代表性的可食部分约500 g，用粉碎机粉碎，装入洁净容器作为试样，密封并做好标识，于零下18 ℃ 冰箱内保存。

2.牛奶

从所取全部样品中取出有代表性样品500 mL，充分混匀，装入洁净容器中，密封，并标明标记，于4 ℃ 以下冷藏存放。

制样操作过程中应防止样品受到污染或发生残留物含量的变化。

前处理方法

1.提取

称取试样约5 g（精确到0.01 g ）于50 mL塑料离心管中，加入20 mL 1 %三氯yi酸-乙腈溶液（3+7），15000 r/min均质提取1 min，5000 r/min离心5 min，上清液转移至50 mL比色管中，残渣再用20 mL三氯yi酸-乙腈溶液重复提取一次，合并提取液于比色管中，定容至刻度，混匀。提取液经滤纸过滤后待净化。

2.净化

分取10 mL提取滤液，于45 ℃ 氮气吹至约3 mL，加入2 mL正己烷，涡旋振荡30 s，5000 r/min离心5 min，弃去正己烷层，下层溶液以小于2 mL/min流速过HLB柱（6 cc/500 mg，6 mL甲醇和6 mL水活化），3 mL水洗涤样品管后上柱，再用6 mL水淋洗小柱，抽干10 min，以6 mL甲醇洗脱并收集，洗脱液在45 ℃氮气吹干，用1.0 mL定容液（乙酸铵-乙腈溶液4+6）溶解，过0.2 μm滤膜后，供液相色谱-质谱/质谱分析。

国标解读及注意事项

1.盐酸氨丙啉标准物质先用水溶解，再用乙腈定容，配成溶液浓度以氯丙啉计为100 μg/mL的标准储备液。

2.本方法使用1 %三氯yi酸-乙腈溶液提取目标化合物，正己烷除脂，HLB柱富集净化，稀释倍数=5，相当于1 g试料进行上机检测。

3.提取液先用氮吹方法浓缩，乙腈挥发后，剩余水相用正己烷除脂后，再过柱净化。

4.固相萃取过程中需要控制流速，使溶液一滴一滴地流下，以保证富集的效果。

5.本方法使用基质曲线进行定量分析，根据具体检测样品选取合适的基质制作空白样品基质液。

参考文献

SN/T 4583-2016 出口动物源食品中氨丙啉残留量的测定 液相色谱-质谱/质谱法

图1 动物源性食品中氨丙啉残留量测定的前处理流程图

 表1  氨丙啉信息表

文章来源 坛墨质检（https://www.gbw-china.com/)

动物性食品中β-受体激动剂残留的检测
迪马科技

　　β-受体激动剂能促进脂肪分解，抑 制脂肪沉淀，显著提高酮体的瘦肉率，因此曾被用作畜禽的促生产剂。但这类药物易在动物体组织内残留，通过食物链进入人体，引起食物中毒。我国自2002起，已经将盐酸克伦特罗、沙丁胺醇、莱克多巴胺等列为禁用药品，并列入年度例行监测计划。

迪马科技参考国标GB 31658.22-2022，建立了SPE-UPLC-MS/MS法，测定动物性食品中β-受体激动剂的残留，该方案通过对动物性食品酶解、高氯酸沉淀蛋白，经乙酸乙酯、叔丁基甲醚萃取，ProElut PXC净化, Inspire PFP色谱柱分离检测，回收率在70%-120%之间。

本方案具有提取方法回收率高、净化效果优异、方法稳定性好等优点。

 1、适用范围

本方案适用于猪肉、猪肝中克伦特罗、莱克多巴胺、沙丁胺醇、西马特罗、齐帕特罗、氯丙那林、特布他林、西布特罗、马布特罗、溴布特罗、班布特罗、克仑丙罗、妥布特罗、利托君、克仑赛罗、马喷特罗、克仑潘特、羟甲基克仑特罗共18种β-受体激动剂单个或混合物残留量的检测。

2、标准品

(1) 混标储备液：精密称取适量克伦特罗等标准品，用甲醇溶解并定容，配制成浓度为100μg/mL混标储备液(Cat.#: 47936)；

(2) 混标中间液Ⅰ：准确吸取适量混标储备液，用甲醇稀释并定容，配制成浓度为0.1μg/mL混标中间液；

(3) 混标中间液Ⅱ：准确吸取适量混标中间液Ⅰ，用甲醇稀释并定容，配制成浓度为0.01μg/mL混标中间液；

(4) 内标储备液：精密称取适量克伦特罗-D9、莱克多巴胺-D6、沙丁胺醇-D3、西马特罗-D7、齐帕特罗-D7、氯丙那林-D7、特布他林-D9、西布特罗-D9、盐酸马布特罗-D9、盐酸班布特罗-D9、克仑丙罗-D7、盐酸妥布特罗-D9、羟甲基克仑特罗-D6，用甲醇溶解并定容，配制成浓度为10μg/mL内标储备液；

(5) 内标工作液：准确吸取适量内标储备液，用甲醇稀释并定容，配制成浓度为0.1μg/mL内标工作液。

3、提取

(1) 称取样品2.0g于50mL塑料离心管中，加6mL 0.2mol/L乙酸铵缓冲液、40μL β-葡萄糖醛酸酶/芳基硫酸酯酶，涡旋混匀，37℃避光水浴16h，放置室温，备用；

(2) 取备用液，加100μL内标工作液，涡旋混匀，8000rmp离心8min，取出上清；

(3) 向下层残渣加入5mL 0.1mol/L高氯酸溶液，涡旋5min, 8000rmp离心8min，取上清,与步骤(2)上清混匀，用高氯酸调pH值至1.0±0.2，8000rmp离心8min，取出上清；

(4) 将上清液用10mol/L NaOH溶液调pH值至10.0±0.5；

(5) 加乙酸乙酯15mL，涡旋5min, 5000rmp离心5min，取上层有机相；

(6) 下层水相中再加入10mL叔丁基甲醚，涡旋5min, 5000rmp离心5min，取上层有机相；

(7) 合并两次有机相，混匀，50 ℃水浴氮吹至干，用5mL 2%甲酸溶液超声1min,涡旋1min溶解残渣，备用。

注：0.2mol/L乙酸铵缓冲液：取乙酸铵15.4g,溶解于1000mL水中，用乙酸调pH值至5.2；

0.1mol/L高氯酸溶液：取高氯酸8.7mL，用水稀释至1000mL。

 4、净化

ProElut PXC 60mg/3mL (Cat.#: 68203)

(1)活化：用3mL甲醇和3mL 2%甲酸溶液活化小柱；

(2)上样：将备用液全部上柱，弃去流出液；

(3)淋洗：用3mL水和3mL甲醇淋洗小柱，弃去流出液，推干；

(4)洗脱：用3mL 5%氨水甲醇洗脱小柱，推干，接收流出液，混匀；

(5)重新溶解：将流出液在50℃水浴氮吹至近干，用0.5mL 甲醇-0.1%甲酸水(1:9)溶解残渣,混匀，过尼龙膜(Cat.#: 37177)，上机分析。

5、分析条件

UPLC 条件

色谱柱：Inspire PFP，100x2.1mm，3μm (Cat.#: 81612)

流  速：0.3mL/min

进样量：5μL

柱 温：35℃

流动相：A: 0.1% 甲酸水溶液 B: 0.1% 甲酸乙腈

质谱条件

电离模式：ESI

扫描方式：正离子扫描

检测方式：多反应监测

电喷雾电压：5500V

雾化气压力：50psi

辅助气压力：50psi

气帘气压力：20psi

离子源温度：500℃

注：溴布特罗、利托君、克仑赛罗、马喷特罗和克仑潘特采用莱克多巴胺同位素内标定量，如果有5种药物一一对应的同位素内标，优先采用。

6、添加回收结果

相关产品信息

动物性食品中氮哌酮及代谢物残留量测定的前处理方法

氮哌酮的危害及检测目的

氮哌酮是一种丁酰苯类神经安定药，动物使用后可消除紧张感，使其活动力下降，对环境淡漠并长期处于安静状态。有助于降低因应激及创伤引起的死亡率，因此在长途运输中常常给猪等动物使用该药。氮哌醇是氮哌酮在动物体内的代谢产物，与原药氮哌酮的化学结构相近，是氮哌酮的残留标示物。通过食物链氮哌酮及其代谢产物氮哌醇会对人体产生直接的危害。为此我国农业农村部和国家市场监督管理总局2019年发布的GB 31650-2019《食品安全国家标准食品中兽药ZD残留限量》中明确规定了氮哌酮及其残留标示物氮哌醇在猪靶组织中的残留限量。

本文阐述了如何将氮哌酮及其代谢物从样品基质中分离提取出来，并经过净化后，转化成GX液相色谱可以检测的形式。以提取、净化为ZD，依据国标GB 29709-2013，为检测人员和相关领域研究人员提供一定的参考。

检测项目：氮哌酮、氮哌醇

应用范围：猪的肌肉、皮+脂、肝脏和肾脏

GX液相色谱法

方法原理：试样中残留的氮哌酮和氮哌醇用乙腈萃取，正己烷除脂，MCX柱净化，GX液相色谱测定，外标法定量。

前处理仪器：

分析天平（感量0.01 g 和0.00001 g）；冷冻高速离心机；氮吹仪；旋涡混合器；固相萃取装置；超声波清洗机；均质机；离心管；滤膜（0.2 μm）。

检测仪器：HPLC +PDA

样品的制备与保存

取新鲜或冷冻空白组织、供试组织，去除筋膜，绞碎，并使均质。

取均质后的供试样品，作为供试试料。

取均质后的空白样品，作为空白试料。

取均质后的空白样品，添加适宜浓度的标准工作液，作为空白添加试料。

试料于零下20 ℃ 以下保存。

前处理方法

1.提取

称取试样5 g±0.05 g，于离心管中，加乙腈10 mL，旋涡混合1 min，超声2 min，5000 r/min离心5 min，取上清液，残渣中加乙腈10 mL重复提取一次，合并两次上清液。于40 ℃水浴旋转蒸干。用2 %甲酸水溶液5 mL溶解残余物，加正己烷4 mL，混匀，5000 r/min离心5 min，弃正己烷层液，备用。

2.净化

MCX柱依次用甲醇3 mL、水3 mL和2 %甲酸水溶液3 mL活化，取备用液过柱，控制流速小于1 mL/min，用2 %甲酸水3 mL和甲醇3 mL淋洗，抽干，用5 %氨化甲醇4 mL洗脱。收集洗脱液，于40 ℃氮气吹干，用流动相（乙腈-乙酸铵溶液1+1）1.0 mL溶解残余物，旋涡混匀，供GX液相色谱法测定。

国标解读及注意事项

1.氮哌酮和氮哌醇标准物质用甲醇配成1 mg/mL的标准储备液，在零下20 ℃ 以下避光保存，有效期3 个月。

2.本方法使用乙腈两次提取目标化合物，正己烷除脂，阳离子交换柱富集净化，相当于5 g试料进行上机检测。

3.MCX柱净化方法为“酸上样，碱洗脱”。

4.氨水甲醇溶液现用现配，避免氨水挥发，影响洗脱效果；洗脱过程中洗脱溶剂少量多次加入，可以增加洗脱率。

5.固相萃取过程中需要控制流速，使溶液一滴一滴地流下，以保证离子交换的效果。

参考文献

GB 29709-2013 食品安全国家标准 动物性食品中氮哌酮及代谢物多残留的测定 GX液相色谱法

图1 猪组织中氮哌酮和氮哌醇残留量测定的前处理流程图

表1  氮哌酮和氮哌醇信息表

文章来源 坛墨质检（https://www.gbw-china.com/)

抗病毒类药物的危害及检测目的

抗病毒类药物主要包括金刚烷胺、金刚乙胺、美金刚、吗啉胍等。金刚烷胺和金刚乙胺是第、一批被允许用来治/疗A型禽流感病毒的特/效药，两者都属于穿入和脱壳YZ剂，YZ病毒的繁殖。研究发现，金刚烷胺可以引起角膜水肿，高剂量摄入时表现出一定的毒性。美金刚和金刚乙胺互为同分异构体，但其性质和作用机理却并不相同。美金刚原被广泛用于中/枢神经系统的治/疗，具有一定的神经毒性。吗啉胍又被称为病毒灵，是一种广谱抗病毒类药物，对甲型和乙型流感病毒、副流感病毒、鼻病毒、呼吸道合胞体病毒等有较好的治/疗/效果，剂量过大会引起多汗、恶心、低血糖等不良反应。我国在1999年12月将吗啉胍列为禁用药，2005年中华人民共和国农业部第560号公告将金刚烷胺、金刚乙胺、利巴韦林和吗啉胍这4种抗病毒类药物列为禁用兽药，禁止用于动物生产。虽然抗病毒/药属动物禁用药物，但其在动物养殖过程中依然被广泛使用。若饲养者不科学、不合理地使用该类药物，易导致药物在畜禽机体内残留与富集，不仅会造成畜禽中毒，也会引起病毒耐药毒株的出现，使抗病毒/药物有效性降低，其耐药性也有转移扩散到人体的风险，对消费者的健康存在很大的隐患。

本文阐述了如何将抗病毒类药物从样品基质中分离提取出来，并经过净化后，转化成液质联用仪可以检测的形式。以提取、净化为ZD，依据行标SN/T 4253-2015，为检测人员和相关领域研究人员提供一定的参考。

检测项目：金刚乙胺、金刚烷胺、美金刚、吗啉胍、咪喹莫特、奥司他韦、阿昔洛韦

应用范围：鸡肉、鸡肉制品、猪肉、肝脏、鱼、虾、蛋、皮蛋等动物组织

液相色谱-质谱/质谱法

方法原理：试样中7种抗病毒类药物用三氯乙/酸-乙腈混合溶液提取并沉淀蛋白，经混合型阳离子交换固相萃取柱净化后，液相色谱-质谱/质谱仪测定，内标法定量。

前处理仪器：分析天平（感量0.1 mg和0.01 g）；组织捣碎机、高速冷冻离心机（4 ℃冷冻，18000 r/min）；离心机（5000 r/min）；涡旋混合器；pH计；氮吹仪；固相萃取装置。

检测仪器：HPLC-MS/MS+ESI源

试样制备与保存

鸡肉、肝脏、鱼肉放在组织捣碎机均质，充分混匀，均分成2份，分别装入清洁容器内，并标明标记；鸡肉制品取鸡肉部分；蛋、虾去壳后取可食部分放在组织捣碎机均质，充分混匀，均分成2份，分别装入清洁容器中，并标明标记。

制样操作过程中，应尽可能防止样品受到污染或发生残留物含量的变化。

试样于-18 ℃以下保存，新鲜或冷冻的组织样品可在2 ℃～6 ℃贮存72 小时。

前处理方法

1.提取

称取试样5 g（精确至0.01 g）于50 mL离心管中，加入0.1 mL内标标准工作溶液（0.1 μg/mL），加入15 mL三氯乙/酸乙腈（90+10）溶液，加盖后在超声波发生器中超声10 min，再旋涡混匀3 min，4 ℃条件下15000 r/min离心5 min，取出上清液，再加入10 mL三氯乙/酸乙腈溶液重复提取一次，离心后合并上清液至25 mL的容量瓶中，用乙腈定容至刻度。

2.净化

分别用3 mL甲醇、3 mL水和3 mL2 %甲酸水溶液活化混合阳离子交换固相萃取小柱（60 mg，3 mL），准确移取5 mL上清液加入到小柱中，依次用5 mL2 %甲酸水溶液和3 mL 1 %甲酸乙腈淋洗，弃去全部流出液；然后真空抽干小柱5 min，用4.0 mL洗脱溶液（氨水乙酸铵甲醇2.5+2.5+95）洗脱至10 mL玻璃管中，在50 ℃用氮气浓缩仪吹至近干。准确加入1.0 mL乙腈-甲醇-水溶液（70+10+20）溶解残渣，涡旋30 s后过0.2 μm滤膜，供液质测定。此样液应在48 h内测定完毕。

注意事项

1.标准物质分别用甲醇配制成100 μg/mL的标准储备液，其中阿昔洛韦先用少量二甲基亚砜溶解，再用50 %甲醇水配成100 μg/mL的标准储备液，在-18 ℃避光保存，可使用6个月。

2.本方法使用了金刚烷胺D6、美金刚D6、阿昔洛韦D4同位素内标进行回收率的校正。

3.本方法使用三氯乙/酸-乙腈提取并沉淀蛋白，MCX固相萃取柱净化。

4.MCX固相萃取柱的净化过程是“酸上样、碱洗脱”。淋洗后一定抽干小柱，防止水相进入洗脱液。氨化洗脱液一定要现用现配，防止氨水挥发，导致目标化合物洗脱不下来。

5.氮气浓缩过程中，吹至近干潮湿状态，定容后采取涡旋加超声的方式复溶，可以提高回收率。

6.金刚烷胺的残留检测，有GB 31660.5-2019作为依据，应根据需求进行选择使用。并注意其他药物检测方法的更新。

参考文献

SN/T 4253-2015 出口动物组织中抗病毒类药物残留量的测定 液相色谱―质谱/质谱法

图1 抗病毒类药物残留量测定的前处理流程图

本文版权归坛墨质检-标准物质ZX所有，更多详情访问：www.gbw-china.com

氯霉素类药物的危害及检测目的

氯霉素类药物主要包括氯霉素、甲砜霉素和氟甲砜霉素，又称为酰胺醇类，属于广谱抗生素，对革兰氏阳性菌和阴性菌均有yi制作用。由于氯霉素合成容易价格低，ZL食品动物传染性疾病效果较好，所以有在养殖过程中使用氯霉素的违法行为，从而造成动物源性食品中氯霉素残留。研究证明氯霉素可引发人体造血系统疾病，产生细菌耐药性等危害。2020年我国农业农村部公告第250号，将氯霉素及其盐、酯列入《食品动物中禁止使用的药品及其他化合物清单》中。

本文阐述了如何将氯霉素类药物从样品基质中分离提取出来，并经过净化后，转化成液质联用仪可以检测的形式。以提取、净化为ZD，依据国标GB/T 22338-2008，为检测人员和相关领域研究人员提供一定的参考。

检测项目：氯霉素类药物

应用范围：动物源性食品/水产品//畜禽产品/畜禽副产品

液相色谱-质谱/质谱法

方法原理：针对不同动物源性食品中氯霉素、甲砜霉素和氟甲砜霉素残留，分别采用乙腈、乙酸乙酯-yi醚或乙酸乙酯提取，提取液用固相萃取柱进行净化，液相色谱-质谱/质谱仪测定，氯霉素采用内标法定量，甲砜霉素和氟甲砜霉素采用外标法定量。

前处理仪器：

高速组织捣碎机；均质器；旋转蒸发仪；分析天平；移液枪（200 μL 和1 mL）；心形瓶（100 mL 棕色）；分液漏斗（200 mL）；聚四氟乙烯离心管（50 mL）；离心机；涡旋混合器；固相萃取装置。

检测仪器：LC-MS/MS+ESI源

试样制备

从原始样品中取出部分有代表性样品，经高速组织捣碎机均匀捣碎或混匀，用四分法缩分出适量试样，均分成两份，装入清洁容器内，加封后作出标记，一份作为试样，一份作为留样，于-20 ℃条件下保存。

前处理方法

1.提取

动物组织（肝、肾除外）与水产品

称取试样5 g（精确至0.01 g），置于50 mL离心管中，加入100 μL氯霉素氘代内标（氯霉素-D5 0.1 μg/mL）工作溶液和30 mL乙腈，匀浆，离心5 min。将上清液移入250 mL分液漏斗中，加15 mL乙腈饱和的正己烷，振荡5 min，静置分层，转移乙腈层至100 mL棕色心形瓶中。残渣中再加入30 mL乙腈，振摇3 min，离心5 min，取上清液转移至同一分液漏斗，振荡5 min，静置分层，转移乙腈层至同一棕色心形瓶中。向心形瓶中加入5 mL正丙醇，于40 ℃水浴中旋转蒸发近干，用氮气吹干，加5 mL丙酮-正己烷（1+9）溶解残渣。

动物肝、肾组织

称取试样5 g（精确至0.01 g），置于50 mL离心管中，加入30 mL乙酸钠缓冲液（0.1 mol/L pH 5.0），均质2 min，加入300 μL β-葡萄糖醛酸苷酶，于37 ℃温育过夜。消解样品中加入100 μL氯霉素氘代内标（氯霉素-D5 0.1 μg/mL）工作溶液，20 mL乙酸乙酯-yi醚（75+25），振摇2 min，离心5 min。取上层有机层入心形瓶中，在40 ℃水浴中旋转蒸发近干，用氮气吹干，加5 mL丙酮-正己烷（1+9）溶解残渣。

蜂蜜

称取蜂蜜试样5 g（精确至0.01 g），置于50 mL离心管中，加入100 μL氯霉素氘代内标（氯霉素-D5 0.1 μg/mL）工作溶液，5 mL水，混匀，再加入20 mL乙酸乙酯，振摇2 min，离心5 min，移取有机层到100 mL棕色心形瓶中，于离心管中再加入20 mL乙酸乙酯，振摇2 min，离心5 min，合并有机层于棕色心形瓶中，40 ℃水浴中旋转蒸发至干，3 mL水溶解残渣，混匀。

2.净化

动物组织与水产品

用5 mL丙酮-正己烷（1+9）淋洗LC-Si硅胶小柱，弃去淋洗液，将残渣溶解溶液转移到固相萃取小柱上，弃去流出液，用5 mL丙酮-正己烷（6+4）洗脱，收集洗脱液于心形瓶中， 40 ℃水浴中旋转蒸发至近干，氮气吹干，用1 mL水定容，定容液过0.45 μm滤膜至进样瓶，待测定。

蜂蜜

分别用5 mL甲醇，5 mL水活化EN固相萃取柱，将提取液转移上柱，用5 mL水淋洗，用玻璃棒压干1 min，用3 mL乙酸乙酯洗脱，洗脱液用氮气吹干，用1 mL水定容，定容液过0.45 μm滤膜至进样瓶，待测定。

国标解读及注意事项

1.氯霉素类标准物质用乙腈配成500 μg/mL标准储备液在4 ℃避光条件下保存可以使用6个月。

2.不同的基质使用不同的提取和净化方法，注意内脏组织需要酶解，β-葡萄糖醛酸苷酶只能冷藏，不能冷冻保存，否则会失活。

3.用水定容后，采用涡旋加超声方式复溶，可以提高复溶效果。

4.由于质谱检测过程中扫描方式为负离子扫描（ESI-），建议专门使用一台液质仪，只进行负离子扫描的检测，保证检测灵敏度。

5.可以在前处理过程中加入甲砜霉素和氟甲砜霉素相对应的同位素内标物质，校正回收率。

参考文献:GB/T 22338-2008 动物源性食品中氯霉素类药物残留量测定

动物组织（肝、肾除外）与水产品中氯霉素类药物残留量测定的前处理流程图

动物肝、肾组织中氯霉素类药物残留量测定的前处理流程图

蜂蜜中氯霉素类药物残留量测定的前处理流程图

*氯霉素类药物信息表

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硝基咪唑类药物（nitroimidazole,NMZs）是一类具有抗原虫感染和抗厌氧菌的硝基杂环类KJ药物，其具有kangjun和抗原虫作用。近年来作为饲料添加剂广泛应用于畜牧业生产中，同时也是一种生长促进剂，以促进畜禽的生长及改善饲料的转换率。由于这类化合物含有的硝基杂环类物质具有潜在致癌、致畸和致突变作用，因此欧美等发达国家已禁止在食源性动物中使用硝基咪唑类药物。我国也对硝基咪唑类药物进行了严格的限制，2020年生效实施的GB 31650-2019《食品安全国家标准 食品中兽药ZD残留限量》中仅规定了甲硝唑和地美硝唑两种物质允许作ZL使用，但不得在动物性食品中检出；同年农业农村部公告第250号，将洛硝达唑、替硝唑列入《食品动物中禁止使用的药品及其他化合物清单》中。

本文阐述了如何将硝基咪唑类化合物从样品基质中分离提取出来，并经过净化后，转化成液质联用仪可以检测的形式。以提取、净化为ZD，依据国标GB/T 21318-2007，为检测人员和相关领域研究人员提供一定的参考。

应用范围

猪肉/鸡肉/牛肉/猪肝/鸡肝/牛肝/猪肾/牛肾/鱼肉/奶粉/蜂蜜

方法原理

样品中残留的8种硝基咪唑、2种代谢物用甲醇-丙酮均质或超声波提取，经乙酸乙酯液液分配，以凝胶色谱（GPC）净化，再经固相萃取（SPE）净化，采用液相色谱/串联质谱确证，外标法定量测定。

前处理仪器

凝胶色谱仪（配有馏份收集浓缩器）；组织捣碎机；均质器；超声波发生器；旋转蒸发器；高速离心机；氮吹仪；固相萃取装置；具塞锥形瓶（250 mL）；分液漏斗（250 mL）；浓缩瓶（50 mL、250 mL）。

检测仪器：LC-MS/MS+ESI源

01提取

肌肉组织、脏器组织样品及水产品准确称取约20 g样品（精确至0.1 g）于250 mL具塞锥形瓶中，加入10 g硅藻土（80目～120目）与样品充分混匀，再依次加入5 mL饱和氯化钠水溶液和70 mL甲醇-丙酮（3+1），高速均质提取3 min。将提取液移入离心管中，于10000 r/min离心2 min，将上层提取液移入250 mL浓缩瓶中。残渣每次再用50 mL甲醇-丙酮（3+1）重复提取两次，合并提取液。

蜂蜜、乳及乳制品样品准确称取约20 g样品（精确至0.1 g）于250 mL具塞锥形瓶中，加入10 mL饱和氯化钠水溶液和70 mL甲醇-丙酮（3+1），超声波提取30 min。移入离心管中，于10000 r/min离心2 min，将上层提取液移入250 mL浓缩瓶中。残渣每次再用50 mL甲醇-丙酮（3+1）重复提取两次，合并提取液。

02液液分配

将提取液于40 ℃水浴中旋转浓缩至只剩水相，并转移至250 mL分液漏斗中，加入50 mL饱和氯化钠水溶液和25 mL乙酸乙酯，振摇3 min，静置分层，收集乙酸乙酯相。水相再用20 mL乙酸乙酯重复提取两次，合并乙酸乙酯相。经无水硫酸钠柱脱水，收集于250 mL浓缩瓶中，于40 ℃水浴中旋转浓缩至近干，加入5 mL乙酸乙酯-环己烷（1+1）溶解残渣，并用0.45 μm滤膜过滤，待净化。

03净化

凝胶色谱（GPC）净化凝胶色谱净化条件如下：净化柱：700 mm×25 mm，Bio Bcads S X3，或相当者；流动相：乙酸乙酯-环己烷（1+1）；流速：4.7 mL/min；样品定量环：5.0 mL；预淋洗体积：50 mL；洗脱总体积：210 mL；开始弃去体积：90 mL；收集体积：90 mL；ZH弃去体积：30 mL。

04凝胶色谱净化步骤如下

将5 mL待净化液按照凝胶色谱净化条件进行净化，合并馏份收集器中的收集液于250 mL浓缩瓶中，于40 ℃水浴中旋转浓缩至近干，加入5 mL甲醇以溶解残渣，待净化。

05固相萃取（SPE）净化

使用前用5 mL甲醇预淋洗C18固相萃取柱（1 g，6 mL），将5 mL溶解液倾入C18固相萃取柱中，以1 mL/min的速度收集流出液，再用10 mL甲醇进行洗脱。收集全部洗脱液于50 mL浓缩瓶中，于40 ℃水浴中旋转浓缩至干。用甲醇溶解并定容至1.0 mL，经0.45 μm滤膜过滤后，供液质测定和确证。

国标解读及注意事项

1.硝基咪唑标准物质用甲醇配成1000 μg/mL的标准储备液，在0 ～4 ℃条件下避光保存，可使用12个月。2.如果有条件，建议凝胶色谱净化系统中配合使用紫外检测器，准确监测目标化合物及杂质的流出情况。

3.固相萃取净化过程中，C18柱作为净化柱使用，注意上样过程中就需要收集流出液，再和洗脱液进行合并。

4.国标方法中使用基质添加标准曲线，外标法进行回收率的校正。注意做肉类样品的基质添加标准曲线前，先进行洗涤，然后加标，再进行后续提取净化等流程。

5.建议使用硝基咪唑标准物质相对应的同位素内标，进行回收率的校正。

参考文献：GB/T 21318-2007 动物源食品中硝基咪唑残留量检验方法

图1 肌肉组织、脏器组织样品及水产品中硝基咪唑残留量测定的前处理流程图

图2 蜂蜜、乳及乳制品样品中硝基咪唑残留量测定的前处理流程图

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      农业部于2017 年9 月30 日发布 《农业部关于公开征求农药Z大残留限量和农药残留检测方法等食品安全国家标准的意见的通知》（农农（农药）[2017]38 号），公开征集《食品中阿维菌素等71 种农药Z大残留限量》，《食品中苯并烯氟菌唑等59 种农药Z大残留限量》，《植物源性食品中草铵膦残留量的测定液相色谱- 质谱联用法》，以及《植物源性食品中208 种农药及其代谢物残留量的测定气相色谱- 质谱联用法》 等等10 项食品安全国家标准的意见，此次征集意见的标准涉及农药Z大残留限量和农药残留检测方法，如果10 项标准能够顺利实施，我国的农药Z大残留限量和农药残留检测方法将又上一个新台阶。

      安谱实验diyi时间推出，前处理耗材、试剂标准品，前处理小型仪器解决方案：

左旋咪唑的危害及检测目的

       左旋咪唑作为一种广谱型抗线虫药，药源丰富，被广泛应用于畜禽养殖企业，效果良好。但不合理地使用左旋咪唑会造成动物产品中残留，研究表明，人体摄入过量左旋咪唑可引起畸变、癌变等症状，严重危害人类健康。为此我国农业农村部和国家市场监督管理总局2019年发布的GB 31650-2019《食品安全国家标准食品中兽药最 大残留限量》中明确规定了左旋咪唑在动物靶组织中的残留限量，并且规定泌乳期和产蛋期禁用。

       本文阐述了如何将左旋咪唑从样品基质中分离提取出来，并经过净化后，转化成高/效液相色谱仪可以检测的形式。以提取、净化为重/点，依据国标GB 29681-2013，为检测人员和相关领域研究人员提供一定的参考。

检测项目：左旋咪唑

应用范围：牛奶

GX液相色谱法

方法原理：试料中残留的左旋咪唑，用碳酸盐缓冲液和乙酸乙酯溶液提取，C18柱净化，甲醇洗脱，GX液相色谱测定，外标法定量。

前处理仪器：

分析天平（感量0.00001 g和0.01 g）；均质机；冷冻高速离心机；电热恒温水浴锅；旋涡混合器；茄形瓶（50 mL）；离心管；滤膜（0.45 μm）。

检测仪器： HPLC-PDA 

试样的制备与保存

取适量新鲜或冷藏的空白或供试牛奶，混合均质。

取均质后的供试样品，作为供试试料；

取均质后的空白样品，作为空白试料；

取均质后的空白样品，添加适宜浓度的标准工作液，作为空白添加试料。

试料于零下20 ℃以下保存。

前处理方法

1.提取

称取试料5 g± 0.05 g，于离心管中，加碳酸盐缓冲液5 mL，加乙酸乙酯10 mL，混匀，6000 r/min离心10 min，取上清液于茄形瓶中，再加乙酸乙酯10 mL萃取一次，合并两次上清液，于50 ℃水浴旋转蒸发至干，加碳酸盐缓冲液5 mL溶解残余物，备用。

2.净化

C18柱（3 mL/500 mg）依次用水3 mL、甲醇3 mL和碳酸盐缓冲液3 mL活化，取备用液过柱，用水3 mL淋洗，用甲醇5 mL洗脱，收集洗脱液，于50 ℃水浴氮气吹干，用流动相1.0 mL溶解残余物，滤膜过滤，供GX液相色谱测定。

国标解读及注意事项

1.左旋咪唑用甲醇配成1 mg/mL的标准储备液，在2 ℃～4 ℃保存，可使用3个月。

2.本方法使用碳酸盐缓冲液提取，乙酸乙酯萃取，C18固相萃取柱净化的方式进行目标化合物的提取净化。

3.本方法采用两次萃取的方式，提高目标化合物的回收率。

4.为保证固相萃取净化效果，过柱时需要控制流速，使溶液一滴一滴地流下。水淋洗后完全抽干小柱，再进行洗脱。

5.左旋咪唑也可以使用液质联用仪进行检测，同时添加相对应的盐酸盐同位素内标，进行回收率的校正。

参考文献

GB 29681-2013 食品安全国家标准 牛奶中左旋咪唑残留量的测定 GX液相色谱法

       氟乐灵是一种广泛应用的芽前二硝基苯胺类除草剂, 对人畜和鸟类低毒, 但对鱼类等水生生物高毒。氟乐灵施用于农田后, 可通过地表径流进入地表水, 在水产品中进行生物累积。2017年世界卫生组织国际癌症研究机构公布的致癌物清单中，氟乐灵属于3类致癌物。

       安谱实验一直致力于我们的食品安全，根据2019年新国标GB31660.3-2019 《水产品中氟乐灵残留量的测定》，使用CNW Florisil SPE小柱对鲫鱼的可食用部分进行检测，方法简单，回收率可达80%以上。

一、样品前处理

1、鱼肉基质空白：取2g搅碎均质后的鱼肉样品，于50 mL具塞聚丙烯离心管中，加丙酮10 mL，旋涡1 min，4 000 r/min离心10 min，取上清液，残渣加丙酮10 mL，重复提取一次，合并上清液，加正己烷30 mL、2%硫酸钠溶液10 mL，旋涡1 min，4 000 r/min离心10 min，取上清液于100 mL棕色鸡心瓶中，下层液体再加正己烷20 mL重复提取一次，合并上清液，于40℃旋转蒸发至近干，加正己烷2 mL使溶解，转移至10 mL玻璃离心管，鸡心瓶用正己烷2 mL洗涤一次，洗涤液合并入10 mL玻璃离心管，用氮气吹至约1 mL，溶液待SPE处理。

2、鱼肉基质加标：在样品中加入氟乐灵标准溶液（使上机检测浓度为5 ppb），其它操作同样品空白。

二、小柱操作

SBEQ-CA1555 CNWBOND Florisil SPE 小柱

1g,6mL/30pcs，100-200目

活化平衡：8mL正己烷

上样：全部待上样液，用3mL正己烷分三次润洗容器后，润洗液一并上样

洗脱：5mL 10%二氯甲烷正己烷溶液

浓缩：收集洗脱液，氮气吹至近干，准确加正己烷5mL溶解残余物 ，上机检测

注意事项：氟乐灵易挥发、易光解，在实验过程中氮吹流量和温度需控制，且需避光操作。

三、GC-ECD测定条件

色谱柱：CD-5(30m*0.25mm*0.25um)

进样口温度：230 ℃；分流模式：不分流

进样量：1μl；

柱流量：1.2 ml /min （恒流）

柱温：初始温度70℃，保留1min，30℃/min 升温至185℃，保留2.5min，25℃/min 升温至250℃，保留5min。

检测器：ECD

检测器温度：300℃

四、实验谱图

氟乐灵5ppb标准谱图

鱼肉基质空白谱图

鱼肉基质加标5ppb

五、实验数据

六、实验耗材

甲苄喹啉和癸氧喹酯的危害及检测目的

甲苄喹啉和癸氧喹酯同属于喹啉类抗球虫药物，用于预防及ZL球虫病。这类抗球虫药具有毒性低、耐受性好、代谢快的优点，应用非常广泛。甲苄喹啉的抗球虫效力较强，是癸氧喹酯的两倍。癸氧喹酯是WY被日本、欧盟、美国和ZG政府批准使用的化学型抗球虫药，与目前ZG允许使用的兽药饲料添加剂无任何配伍禁忌。尽管这类抗球虫药物的毒性较低，但抗球虫药物的使用易导致球虫出现抗药性，并且畜牧生产中使用抗球虫药物有加大剂量的倾向。为保障动物源性食品的安全，我国农业农村部和国家市场监督管理总局2019年发布的GB 31650-2019《食品安全国家标准食品中兽药ZD残留限量》中明确规定了癸氧喹酯在鸡靶组织中的残留限量。

本文阐述了如何将甲苄喹啉和癸氧喹酯从样品基质中分离提取出来，并经过净化后，转化成液质联用仪可以检测的形式。以提取、净化为ZD，依据行标SN/T 2444-2010，为检测人员和相关领域研究人员提供一定的参考。

检测项目：甲苄喹啉、癸氧喹酯

应用范围：鸡肉、鸡肝、鸡肾、鸡蛋、牛肝和牛奶

液相色谱-质谱/质谱法

方法原理：采用乙腈提取试样中残留的甲苄喹啉和癸氧喹酯，提取液经固相萃取柱净化，液相色谱-质谱/质谱检测和确证，外标法定量。

前处理仪器： 

固相萃取装置；氮吹浓缩仪；均质器；旋涡混匀器；离心机（5000 r/min以上）；分析天平（感量0.1 mg和0.01 g）；移液器（10 μL～100 μL和100 μL～1000 μL）；聚丙烯离心管（50 mL和15 mL，带螺旋盖）；容量瓶（100 mL和1000 mL）；往复式振荡器。

检测仪器：LC-MS/MS+ESI源

样品的制备与保存

1. 鸡肉、鸡肝、鸡肾、鸡蛋和牛肝

从所取全部样品中取出有代表性样品可食部分约500 g，充分捣碎均匀，均分成两份，分别装入洁净容器中，密封，并标明标记，于零下18 ℃ 以下冷冻存放。

2. 牛奶

从所取全部样品中取出有代表性样品约500 g，均分成两份，分别装入洁净容器中，密封，并标明标记，于4 ℃ 冷藏存放。

制样要求：在制样的操作过程中，应防止样品污染。

前处理方法
       1.提取

称取样品5 g（精确至0.01 g）于50 mL具塞离心管中，加入15 mL乙腈，旋涡混匀1 min，在往复式振荡器上振荡提取5 min，3000 r/min离心5 min，将上清液转移至另一50 mL离心管中。在残渣中加入10 mL乙腈，重复提取一次，5000 r/min离心5 min，合并乙腈层。在乙腈提取液中加入过量氯化钠，旋涡混匀1 min，5000 r/min离心3 min。取上层乙腈层5 mL于15 mL离心管中，45 ℃水浴下吹氮浓缩至3 mL，加水定容至10 mL，待净化。

2.净化

将待净化液转入HLB固相萃取柱（60 mg，3 mL使用前依次用5 mL甲醇和5 mL水活化），以约3 mL/min的流速使样液全部通过固相萃取柱，弃去流出液。再分别用3 mL 30 %乙腈水溶液，3 mL水淋洗，弃去流出液，用真空泵抽干固相萃取柱15 min。用3 mL乙腈洗脱被测物于15 mL离心管中，45 ℃水浴下吹氮浓缩至近干，用样品定容溶液（乙腈+水1+1加0.1 %甲酸）溶解并定容至1.0 mL，旋涡混匀后过0.2 μm滤膜，用液相色谱-质谱/质谱仪测定。

国标解读及注意事项

1.甲苄喹啉标准物质用N,N-二甲基甲酰胺配成100 mg/L的标准储备液，在零下18 ℃以下避光保存；癸氧喹酯标准物质用san氯甲烷配成100 mg/L的标准储备液，在零下18 ℃以下避光保存。

2.本方法使用乙腈分两次提取目标化合物，加盐净化后，再使用HLB柱进行富集净化，相当于1 g试料进行上机检测。

3.使用乙腈作为提取溶剂时，需要注意乙腈沉淀蛋白的效果很好，但是容易使肌肉样品“抱团”不分散，影响目标物的提取率。所以在加入乙腈后应立即进行涡旋处理，使肉样分散。

4.固相萃取过程中需要控制流速，使溶液一滴一滴地流下，以保证吸附解离的效果。

5. HLB柱淋洗后一定要充分抽干小柱中的水，防止水进入洗脱液中，导致后续浓缩过程中洗脱液不能被吹干。

6.本方法使用基质加标流程曲线进行定量，还可以使用癸氧喹酯相对应的同位素内标配制标准曲线。

参考文献

SN/T 2444-2010进出口动物源食品中甲苄喹啉和癸氧喹酯残留量的测定 液相色谱-质谱/质谱法

图1鸡肉、鸡肝、鸡肾、鸡蛋、牛肝和牛奶中甲苄喹啉和癸氧喹酯残留量测定的前处理流程图

甲苄喹啉和癸氧喹酯信息表