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      农业部于2017 年9 月30 日发布 《农业部关于公开征求农药Z大残留限量和农药残留检测方法等食品安全国家标准的意见的通知》（农农（农药）[2017]38 号），公开征集《食品中阿维菌素等71 种农药Z大残留限量》，《食品中苯并烯氟菌唑等59 种农药Z大残留限量》，《植物源性食品中草铵膦残留量的测定液相色谱- 质谱联用法》，以及《植物源性食品中208 种农药及其代谢物残留量的测定气相色谱- 质谱联用法》 等等10 项食品安全国家标准的意见，此次征集意见的标准涉及农药Z大残留限量和农药残留检测方法，如果10 项标准能够顺利实施，我国的农药Z大残留限量和农药残留检测方法将又上一个新台阶。

      安谱实验diyi时间推出，前处理耗材、试剂标准品，前处理小型仪器解决方案：

抗病毒类药物的危害及检测目的

抗病毒类药物主要包括金刚烷胺、金刚乙胺、美金刚、吗啉胍等。金刚烷胺和金刚乙胺是第、一批被允许用来治/疗A型禽流感病毒的特/效药，两者都属于穿入和脱壳YZ剂，YZ病毒的繁殖。研究发现，金刚烷胺可以引起角膜水肿，高剂量摄入时表现出一定的毒性。美金刚和金刚乙胺互为同分异构体，但其性质和作用机理却并不相同。美金刚原被广泛用于中/枢神经系统的治/疗，具有一定的神经毒性。吗啉胍又被称为病毒灵，是一种广谱抗病毒类药物，对甲型和乙型流感病毒、副流感病毒、鼻病毒、呼吸道合胞体病毒等有较好的治/疗/效果，剂量过大会引起多汗、恶心、低血糖等不良反应。我国在1999年12月将吗啉胍列为禁用药，2005年中华人民共和国农业部第560号公告将金刚烷胺、金刚乙胺、利巴韦林和吗啉胍这4种抗病毒类药物列为禁用兽药，禁止用于动物生产。虽然抗病毒/药属动物禁用药物，但其在动物养殖过程中依然被广泛使用。若饲养者不科学、不合理地使用该类药物，易导致药物在畜禽机体内残留与富集，不仅会造成畜禽中毒，也会引起病毒耐药毒株的出现，使抗病毒/药物有效性降低，其耐药性也有转移扩散到人体的风险，对消费者的健康存在很大的隐患。

本文阐述了如何将抗病毒类药物从样品基质中分离提取出来，并经过净化后，转化成液质联用仪可以检测的形式。以提取、净化为ZD，依据行标SN/T 4253-2015，为检测人员和相关领域研究人员提供一定的参考。

检测项目：金刚乙胺、金刚烷胺、美金刚、吗啉胍、咪喹莫特、奥司他韦、阿昔洛韦

应用范围：鸡肉、鸡肉制品、猪肉、肝脏、鱼、虾、蛋、皮蛋等动物组织

液相色谱-质谱/质谱法

方法原理：试样中7种抗病毒类药物用三氯乙/酸-乙腈混合溶液提取并沉淀蛋白，经混合型阳离子交换固相萃取柱净化后，液相色谱-质谱/质谱仪测定，内标法定量。

前处理仪器：分析天平（感量0.1 mg和0.01 g）；组织捣碎机、高速冷冻离心机（4 ℃冷冻，18000 r/min）；离心机（5000 r/min）；涡旋混合器；pH计；氮吹仪；固相萃取装置。

检测仪器：HPLC-MS/MS+ESI源

试样制备与保存

鸡肉、肝脏、鱼肉放在组织捣碎机均质，充分混匀，均分成2份，分别装入清洁容器内，并标明标记；鸡肉制品取鸡肉部分；蛋、虾去壳后取可食部分放在组织捣碎机均质，充分混匀，均分成2份，分别装入清洁容器中，并标明标记。

制样操作过程中，应尽可能防止样品受到污染或发生残留物含量的变化。

试样于-18 ℃以下保存，新鲜或冷冻的组织样品可在2 ℃～6 ℃贮存72 小时。

前处理方法

1.提取

称取试样5 g（精确至0.01 g）于50 mL离心管中，加入0.1 mL内标标准工作溶液（0.1 μg/mL），加入15 mL三氯乙/酸乙腈（90+10）溶液，加盖后在超声波发生器中超声10 min，再旋涡混匀3 min，4 ℃条件下15000 r/min离心5 min，取出上清液，再加入10 mL三氯乙/酸乙腈溶液重复提取一次，离心后合并上清液至25 mL的容量瓶中，用乙腈定容至刻度。

2.净化

分别用3 mL甲醇、3 mL水和3 mL2 %甲酸水溶液活化混合阳离子交换固相萃取小柱（60 mg，3 mL），准确移取5 mL上清液加入到小柱中，依次用5 mL2 %甲酸水溶液和3 mL 1 %甲酸乙腈淋洗，弃去全部流出液；然后真空抽干小柱5 min，用4.0 mL洗脱溶液（氨水乙酸铵甲醇2.5+2.5+95）洗脱至10 mL玻璃管中，在50 ℃用氮气浓缩仪吹至近干。准确加入1.0 mL乙腈-甲醇-水溶液（70+10+20）溶解残渣，涡旋30 s后过0.2 μm滤膜，供液质测定。此样液应在48 h内测定完毕。

注意事项

1.标准物质分别用甲醇配制成100 μg/mL的标准储备液，其中阿昔洛韦先用少量二甲基亚砜溶解，再用50 %甲醇水配成100 μg/mL的标准储备液，在-18 ℃避光保存，可使用6个月。

2.本方法使用了金刚烷胺D6、美金刚D6、阿昔洛韦D4同位素内标进行回收率的校正。

3.本方法使用三氯乙/酸-乙腈提取并沉淀蛋白，MCX固相萃取柱净化。

4.MCX固相萃取柱的净化过程是“酸上样、碱洗脱”。淋洗后一定抽干小柱，防止水相进入洗脱液。氨化洗脱液一定要现用现配，防止氨水挥发，导致目标化合物洗脱不下来。

5.氮气浓缩过程中，吹至近干潮湿状态，定容后采取涡旋加超声的方式复溶，可以提高回收率。

6.金刚烷胺的残留检测，有GB 31660.5-2019作为依据，应根据需求进行选择使用。并注意其他药物检测方法的更新。

参考文献

SN/T 4253-2015 出口动物组织中抗病毒类药物残留量的测定 液相色谱―质谱/质谱法

图1 抗病毒类药物残留量测定的前处理流程图

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氯霉素类药物的危害及检测目的

氯霉素类药物主要包括氯霉素、甲砜霉素和氟甲砜霉素，又称为酰胺醇类，属于广谱抗生素，对革兰氏阳性菌和阴性菌均有yi制作用。由于氯霉素合成容易价格低，ZL食品动物传染性疾病效果较好，所以有在养殖过程中使用氯霉素的违法行为，从而造成动物源性食品中氯霉素残留。研究证明氯霉素可引发人体造血系统疾病，产生细菌耐药性等危害。2020年我国农业农村部公告第250号，将氯霉素及其盐、酯列入《食品动物中禁止使用的药品及其他化合物清单》中。

本文阐述了如何将氯霉素类药物从样品基质中分离提取出来，并经过净化后，转化成液质联用仪可以检测的形式。以提取、净化为ZD，依据国标GB/T 22338-2008，为检测人员和相关领域研究人员提供一定的参考。

检测项目：氯霉素类药物

应用范围：动物源性食品/水产品//畜禽产品/畜禽副产品

液相色谱-质谱/质谱法

方法原理：针对不同动物源性食品中氯霉素、甲砜霉素和氟甲砜霉素残留，分别采用乙腈、乙酸乙酯-yi醚或乙酸乙酯提取，提取液用固相萃取柱进行净化，液相色谱-质谱/质谱仪测定，氯霉素采用内标法定量，甲砜霉素和氟甲砜霉素采用外标法定量。

前处理仪器：

高速组织捣碎机；均质器；旋转蒸发仪；分析天平；移液枪（200 μL 和1 mL）；心形瓶（100 mL 棕色）；分液漏斗（200 mL）；聚四氟乙烯离心管（50 mL）；离心机；涡旋混合器；固相萃取装置。

检测仪器：LC-MS/MS+ESI源

试样制备

从原始样品中取出部分有代表性样品，经高速组织捣碎机均匀捣碎或混匀，用四分法缩分出适量试样，均分成两份，装入清洁容器内，加封后作出标记，一份作为试样，一份作为留样，于-20 ℃条件下保存。

前处理方法

1.提取

动物组织（肝、肾除外）与水产品

称取试样5 g（精确至0.01 g），置于50 mL离心管中，加入100 μL氯霉素氘代内标（氯霉素-D5 0.1 μg/mL）工作溶液和30 mL乙腈，匀浆，离心5 min。将上清液移入250 mL分液漏斗中，加15 mL乙腈饱和的正己烷，振荡5 min，静置分层，转移乙腈层至100 mL棕色心形瓶中。残渣中再加入30 mL乙腈，振摇3 min，离心5 min，取上清液转移至同一分液漏斗，振荡5 min，静置分层，转移乙腈层至同一棕色心形瓶中。向心形瓶中加入5 mL正丙醇，于40 ℃水浴中旋转蒸发近干，用氮气吹干，加5 mL丙酮-正己烷（1+9）溶解残渣。

动物肝、肾组织

称取试样5 g（精确至0.01 g），置于50 mL离心管中，加入30 mL乙酸钠缓冲液（0.1 mol/L pH 5.0），均质2 min，加入300 μL β-葡萄糖醛酸苷酶，于37 ℃温育过夜。消解样品中加入100 μL氯霉素氘代内标（氯霉素-D5 0.1 μg/mL）工作溶液，20 mL乙酸乙酯-yi醚（75+25），振摇2 min，离心5 min。取上层有机层入心形瓶中，在40 ℃水浴中旋转蒸发近干，用氮气吹干，加5 mL丙酮-正己烷（1+9）溶解残渣。

蜂蜜

称取蜂蜜试样5 g（精确至0.01 g），置于50 mL离心管中，加入100 μL氯霉素氘代内标（氯霉素-D5 0.1 μg/mL）工作溶液，5 mL水，混匀，再加入20 mL乙酸乙酯，振摇2 min，离心5 min，移取有机层到100 mL棕色心形瓶中，于离心管中再加入20 mL乙酸乙酯，振摇2 min，离心5 min，合并有机层于棕色心形瓶中，40 ℃水浴中旋转蒸发至干，3 mL水溶解残渣，混匀。

2.净化

动物组织与水产品

用5 mL丙酮-正己烷（1+9）淋洗LC-Si硅胶小柱，弃去淋洗液，将残渣溶解溶液转移到固相萃取小柱上，弃去流出液，用5 mL丙酮-正己烷（6+4）洗脱，收集洗脱液于心形瓶中， 40 ℃水浴中旋转蒸发至近干，氮气吹干，用1 mL水定容，定容液过0.45 μm滤膜至进样瓶，待测定。

蜂蜜

分别用5 mL甲醇，5 mL水活化EN固相萃取柱，将提取液转移上柱，用5 mL水淋洗，用玻璃棒压干1 min，用3 mL乙酸乙酯洗脱，洗脱液用氮气吹干，用1 mL水定容，定容液过0.45 μm滤膜至进样瓶，待测定。

国标解读及注意事项

1.氯霉素类标准物质用乙腈配成500 μg/mL标准储备液在4 ℃避光条件下保存可以使用6个月。

2.不同的基质使用不同的提取和净化方法，注意内脏组织需要酶解，β-葡萄糖醛酸苷酶只能冷藏，不能冷冻保存，否则会失活。

3.用水定容后，采用涡旋加超声方式复溶，可以提高复溶效果。

4.由于质谱检测过程中扫描方式为负离子扫描（ESI-），建议专门使用一台液质仪，只进行负离子扫描的检测，保证检测灵敏度。

5.可以在前处理过程中加入甲砜霉素和氟甲砜霉素相对应的同位素内标物质，校正回收率。

参考文献:GB/T 22338-2008 动物源性食品中氯霉素类药物残留量测定

动物组织（肝、肾除外）与水产品中氯霉素类药物残留量测定的前处理流程图

动物肝、肾组织中氯霉素类药物残留量测定的前处理流程图

蜂蜜中氯霉素类药物残留量测定的前处理流程图

*氯霉素类药物信息表

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阿苯达唑的危害及检测目的

阿苯达唑（ABZ）又名丙硫咪唑，是苯并咪唑类驱虫药物，因其治LX果好、毒性小等方面的优势，被广泛用于ZL动物的肠道寄生虫感染病，是目前兽医临床使用最广泛药物之一。阿苯达唑进入动物体内后会快速代谢为阿苯达唑亚砜（ABZSO），阿苯达唑亚砜进一步转化为阿苯达唑砜（ABZSO2），ZZ代谢为2-氨基阿苯达唑砜（ABZSO2-2-NH2）。因此，为监控阿苯达唑药物的使用情况，保障动物源性食品的安全，我国农业农村部和国家市场监督管理总局2019年发布的GB 31650-2019《食品安全国家标准食品中兽药ZD残留限量》中明确规定了阿苯达唑在所有食品动物靶组织中的残留标志物及残留限量。

本文阐述了如何将阿苯达唑及其代谢物从样品基质中分离提取出来，并经过净化后，转化成GX液相色谱仪可以检测的形式。以提取、净化为ZD，依据国标GB 29687-2013，为检测人员和相关领域研究人员提供一定的参考。

检测项目：阿苯达唑、阿苯达唑亚砜、阿苯达唑砜、2-氨基阿苯达唑砜

应用范围：水产品（虾、蟹、鱼）

GX液相色谱法

方法原理：试料中残留的阿苯达唑及代谢物，用乙酸乙酯提取，正己烷除脂，乙酸乙酯反萃取，GX液相色谱-荧光检测器测定，外标法定量。

前处理仪器： 

分析天平（感量0.01 g 和0.00001 g）；均质机；离心机；旋转蒸发器；氮吹仪；梨形瓶（100mL）；滤膜（有机相0.45 μm）。

检测仪器：HPLC-FLD

试样的制备与保存

取适量新鲜或冷冻的鱼，去鳞、去皮，沿脊背取肌肉；虾，去头、去壳，取肌肉部分。绞碎，并使均质。

取均质后的供试样品，作为供试试料。

取均质后的空白样品，作为空白试料。

取均质后的空白样品，添加适宜浓度的标准工作液，作为空白添加试料。

试料于零下20 ℃ 以下保存。

前处理方法

1.虾、蟹类

提取：称取试料2 g±0.02 g，于50 mL离心管中，加乙酸乙酯15 mL，均质30 s，振荡5 min，4000 r/min离心10 min，取上清液于100 mL梨形瓶中，残渣备用。另取一50 mL离心管，加乙酸乙酯15 mL，清洗均质机30 s，洗涤液于残渣中，振荡5 min，4000 r/min离心10 min，上清液合并至100 mL梨形瓶中，于35 ℃旋转蒸发至干，用20 %甲醇溶液1.0 mL溶解残渣。

除脂：将上述溶液移入10 mL离心管中，再向梨形瓶中加入正己烷1 mL，洗涤，正己烷转入离心管中，振荡1 min，4000 r/min离心5 min，弃正己烷层液，再加入正己烷1 mL，重复操作两次，取下层液备用。

净化：备用液中加0.04 mol/L磷酸1 mL，混匀，加二氯甲烷1.5 mL，混合1 min，4000 r/min离心5 min，取二氯甲烷液于10 mL离心管中，再加二氯甲烷1.5 mL，重复提取两次，合并三次二氯甲烷液于10 mL离心管中，于35 ℃氮气吹干；用0.02 mol/L磷酸氢二钠溶液1.0 mL溶解残余物，加乙酸乙酯2 mL，混合1 min，4000 r/min离心5 min，将乙酸乙酯液移入另一10 mL离心管中，再向磷酸氢二钠溶液中加乙酸乙酯2 mL，重复提取两次，合并三次乙酸乙酯液，于40 ℃氮气吹干，用20 %甲醇-水1.0 mL溶解残留物，滤膜过滤，供液相色谱测定。

2.鱼类

提取：称取试料2 g±0.02 g，于50 mL离心管中，加乙酸乙酯15 mL，均质30 s，振荡5 min，4000 r/min离心10 min，取上清液于100 mL梨形瓶中，残渣备用。另取一50 mL离心管，加乙酸乙酯15 mL，清洗均质机30 s，将此液倒入上述残渣中振荡提取5 min，4000 r/min离心10 min，上清液合并至100 mL梨形瓶中，于35 ℃减压旋转蒸发至干，加入20 %甲醇溶液1.0 mL溶解残渣。

除脂：将上述溶液移入10 mL离心管中，再向梨形瓶中加入正己烷1 mL，洗涤，正己烷转入离心管中，振荡1 min，4000 r/min离心5 min，去除正己烷层，再加入正己烷1 mL，依法重复操作两次。下层溶液过0.45 μm有机相滤膜，供液相色谱测定。

国标解读及注意事项

1.标准物质用甲醇配成100 μg/mL的标准储备液，在零下18 ℃以下避光保存，可使用3个月。

2.本方法中鱼类的提取净化方式为：乙酸乙酯提取两次，正己烷除脂三次；虾和蟹的提取净化方式为：乙酸乙酯提取两次，正己烷除脂三次，二氯甲烷和乙酸乙酯反萃取三次。所有基质均相当于2 g试料上机检测。

3.由于虾蟹基质中会混入蟹黄等杂质，油脂含量高，颜色较深，所以需要通过使用二氯甲烷和乙酸乙酯进行反萃取，达到去除杂质，提高目标物回收率的效果。

4.根据基质中含油脂量的多少，调整正己烷除脂的次数。

5.本方法采用多次提取的方式提高目标化合物的回收率。

6.本方法使用基质流程曲线进行定量，根据实际样品选择适合的基质种类进行加标。

参考文献

GB 29687-2013 食品安全国家标准 水产品中阿苯达唑及其代谢物多残留的测定 GX液相色谱法

图1虾和蟹中阿苯达唑及其代谢物残留量测定的前处理流程图

图2鱼中阿苯达唑及其代谢物残留量测定的前处理流程图

阿苯达唑及其代谢物标准品信息表

甲苄喹啉和癸氧喹酯的危害及检测目的

甲苄喹啉和癸氧喹酯同属于喹啉类抗球虫药物，用于预防及ZL球虫病。这类抗球虫药具有毒性低、耐受性好、代谢快的优点，应用非常广泛。甲苄喹啉的抗球虫效力较强，是癸氧喹酯的两倍。癸氧喹酯是WY被日本、欧盟、美国和ZG政府批准使用的化学型抗球虫药，与目前ZG允许使用的兽药饲料添加剂无任何配伍禁忌。尽管这类抗球虫药物的毒性较低，但抗球虫药物的使用易导致球虫出现抗药性，并且畜牧生产中使用抗球虫药物有加大剂量的倾向。为保障动物源性食品的安全，我国农业农村部和国家市场监督管理总局2019年发布的GB 31650-2019《食品安全国家标准食品中兽药ZD残留限量》中明确规定了癸氧喹酯在鸡靶组织中的残留限量。

本文阐述了如何将甲苄喹啉和癸氧喹酯从样品基质中分离提取出来，并经过净化后，转化成液质联用仪可以检测的形式。以提取、净化为ZD，依据行标SN/T 2444-2010，为检测人员和相关领域研究人员提供一定的参考。

检测项目：甲苄喹啉、癸氧喹酯

应用范围：鸡肉、鸡肝、鸡肾、鸡蛋、牛肝和牛奶

液相色谱-质谱/质谱法

方法原理：采用乙腈提取试样中残留的甲苄喹啉和癸氧喹酯，提取液经固相萃取柱净化，液相色谱-质谱/质谱检测和确证，外标法定量。

前处理仪器： 

固相萃取装置；氮吹浓缩仪；均质器；旋涡混匀器；离心机（5000 r/min以上）；分析天平（感量0.1 mg和0.01 g）；移液器（10 μL～100 μL和100 μL～1000 μL）；聚丙烯离心管（50 mL和15 mL，带螺旋盖）；容量瓶（100 mL和1000 mL）；往复式振荡器。

检测仪器：LC-MS/MS+ESI源

样品的制备与保存

1. 鸡肉、鸡肝、鸡肾、鸡蛋和牛肝

从所取全部样品中取出有代表性样品可食部分约500 g，充分捣碎均匀，均分成两份，分别装入洁净容器中，密封，并标明标记，于零下18 ℃ 以下冷冻存放。

2. 牛奶

从所取全部样品中取出有代表性样品约500 g，均分成两份，分别装入洁净容器中，密封，并标明标记，于4 ℃ 冷藏存放。

制样要求：在制样的操作过程中，应防止样品污染。

前处理方法
       1.提取

称取样品5 g（精确至0.01 g）于50 mL具塞离心管中，加入15 mL乙腈，旋涡混匀1 min，在往复式振荡器上振荡提取5 min，3000 r/min离心5 min，将上清液转移至另一50 mL离心管中。在残渣中加入10 mL乙腈，重复提取一次，5000 r/min离心5 min，合并乙腈层。在乙腈提取液中加入过量氯化钠，旋涡混匀1 min，5000 r/min离心3 min。取上层乙腈层5 mL于15 mL离心管中，45 ℃水浴下吹氮浓缩至3 mL，加水定容至10 mL，待净化。

2.净化

将待净化液转入HLB固相萃取柱（60 mg，3 mL使用前依次用5 mL甲醇和5 mL水活化），以约3 mL/min的流速使样液全部通过固相萃取柱，弃去流出液。再分别用3 mL 30 %乙腈水溶液，3 mL水淋洗，弃去流出液，用真空泵抽干固相萃取柱15 min。用3 mL乙腈洗脱被测物于15 mL离心管中，45 ℃水浴下吹氮浓缩至近干，用样品定容溶液（乙腈+水1+1加0.1 %甲酸）溶解并定容至1.0 mL，旋涡混匀后过0.2 μm滤膜，用液相色谱-质谱/质谱仪测定。

国标解读及注意事项

1.甲苄喹啉标准物质用N,N-二甲基甲酰胺配成100 mg/L的标准储备液，在零下18 ℃以下避光保存；癸氧喹酯标准物质用san氯甲烷配成100 mg/L的标准储备液，在零下18 ℃以下避光保存。

2.本方法使用乙腈分两次提取目标化合物，加盐净化后，再使用HLB柱进行富集净化，相当于1 g试料进行上机检测。

3.使用乙腈作为提取溶剂时，需要注意乙腈沉淀蛋白的效果很好，但是容易使肌肉样品“抱团”不分散，影响目标物的提取率。所以在加入乙腈后应立即进行涡旋处理，使肉样分散。

4.固相萃取过程中需要控制流速，使溶液一滴一滴地流下，以保证吸附解离的效果。

5. HLB柱淋洗后一定要充分抽干小柱中的水，防止水进入洗脱液中，导致后续浓缩过程中洗脱液不能被吹干。

6.本方法使用基质加标流程曲线进行定量，还可以使用癸氧喹酯相对应的同位素内标配制标准曲线。

参考文献

SN/T 2444-2010进出口动物源食品中甲苄喹啉和癸氧喹酯残留量的测定 液相色谱-质谱/质谱法

图1鸡肉、鸡肝、鸡肾、鸡蛋、牛肝和牛奶中甲苄喹啉和癸氧喹酯残留量测定的前处理流程图

甲苄喹啉和癸氧喹酯信息表

阿苯达唑（，是目前兽医临床使用最广泛药物之一。阿苯达唑进入动物体内后会快速代谢为阿苯达唑亚砜（ABZSO2--2-NH因此，为监控阿苯达唑药物的使用情况，保障动物源性食品的安全，2019GB 31650《食品安全国家标准食品中兽药ZD残留限量》中明确规定了在所有食品动物靶组织中的残留标志物及残留限量。

阿苯达唑亚砜阿苯达唑砜2-

水产品（虾、蟹、鱼）GX液相色谱法方法原理：

 分析天平（感量0.00001 g均质机；离心机；100mL0.45）。检测仪器：

试样

去鳞，虾、取肌肉部分，

取均质后的空白样品，作为空白试料。

℃。 

称取试料±，50 mL15 mL，均质30 s，振荡4000 r/min min，取上清液于100 mL梨形瓶中，残渣备用。另取一50 mL15 mL，清洗均质机30 s，洗涤液于残渣中，振荡4000 r/min min，上清液合并至100 mL梨形瓶中，于35 用除脂：梨形瓶中加入正己烷1 mL，洗涤，正己烷转入1离心

4000 r/min min，取二氯甲烷液于10 mL1.5 mL，重复提取两次，合并三次二氯甲烷液于10 mL于35 用 min，5磷酸氢二钠溶液中加乙酸乙酯2 mL，重复提取两次，合并三次乙酸乙酯液，于40 用

称取试料±，50 mL15 mL，均质30 s，振荡4000 r/min min，取上清液于100 mL梨形瓶中，残渣备用。另取一50 mL15 mL，清洗均质机30 s，将此液倒入上述残渣中振荡提取4000 r/min min，上清液合并至100 mL梨形瓶中，于35 1.0 mL溶解残渣。

离心管中，再向1离心0.45滤膜，供液相色谱测定。 

 1.甲醇100储备液，在以下个月。

鱼类提取；虾和蟹提取，2

，达到去除提高目标物回收率的效果4.根据基质中含油脂量的多少，调整正己烷除脂的次数。

参考文献

图

图

动物源性食品中敌bai虫、敌敌畏、蝇毒磷残留量测定的前处理方法

敌bai虫、敌敌畏、蝇毒磷的危害及检测目的

敌bai虫、敌敌畏与蝇毒磷均属于有机磷农药，作为一种杀虫剂，有机磷农药具有广谱、GX、低毒、使用方便等特点，广泛应用于农业、畜牧业、水产、林业等方面的防虫或杀虫工作。有机磷农药的广泛使用，在给人们增加利益的同时也给环境造成了严重的污染。大量食用含有敌bai虫等农药残留的食物会导致机体正常生理功能的失调，引起病理改变和毒性危害。因此，为保障动物源性食品的安全，我国农业农村部和国家市场监督管理总局2019年发布的GB 31650-2019《食品安全国家标准食品中兽药ZD残留限量》中明确规定了敌bai虫和敌敌畏在牛和猪靶组织中的残留限量。

本文阐述了如何将敌bai虫、敌敌畏、蝇毒磷从样品基质中分离提取出来，并经过净化后，转化成液质联用仪可以检测的形式。以提取、净化为ZD，依据国标GB 23200.94-2016，为检测人员和相关领域研究人员提供一定的参考。

检测项目：敌bai虫、敌敌畏、蝇毒磷

应用范围：畜、禽分割肉、盐渍肠衣和蜂蜜

液相色谱-质谱/质谱法

方法原理：试样中的敌bai虫、敌敌畏、蝇毒磷用二氯甲烷或乙酸乙酯提取，提取液经浓缩、脱脂后，用液相色谱-质谱/质谱仪测定，外标峰面积法定量，子离子丰度比定性。

前处理仪器： 

分析天平（感量0.01 g 和0.0001 g）；超声波清洗器；旋涡混匀器；旋转蒸发仪；离心机（5000 r/min）；均质器；0.45 μm微孔滤膜。

检测仪器：UHPLC-MS/MS+ESI源

试样的制备与保存

1. 分割肉

取样品中有代表性的约500 g，用组织捣碎机捣碎，装入洁净容器作为试样，密封并做好标识。

2. 肠衣

取有代表性样品约100 g，用剪刀剪碎至2 毫米以下，装入洁净容器作为试样，密封并做好标识。

3. 蜂蜜

取有代表性样品约500 g，搅拌均匀后装入洁净容器内密封并做好标识。

试样保存与制样要求：分割肉、肠衣、蜂蜜等试样于零下18 ℃ 以下冷冻保存。在制样的操作过程中，应防止样品受到污染或发生残留物含量的变化。

前处理方法

1.分割肉

准确称取5 g均匀试样（精确至0.01 g）于50 mL具塞离心管中，加入5 g无水硫酸钠混匀，再加入15 mL二氯甲烷，用均质器（10000 r/min）均质2 min，4000 r/min离心3 min，将有机相转移至100 mL梨形蒸馏瓶中，残渣再用2×10 mL二氯甲烷均质提取两次。离心合并有机相，于40 ℃旋转蒸发至2 mL，将样液转移至5 mL刻度试管中，并用少量二氯甲烷洗涤梨形蒸馏瓶，合并洗涤液到刻度试管中，室温通氮浓缩至干。定量加入1.0 mL乙腈溶解残渣，加入2 mL环己烷旋涡混匀2 min后，2500 r/min离心3 min，将下层乙腈相过0.45 μm微孔滤膜后，供液相色谱-质谱/质谱仪测定。

2.肠衣

准确称取5 g试样（精确至0.01 g）于50 mL具塞离心管中，加入2 g无水硫酸钠混匀，再加入15 mL二氯甲烷，盖上盖混匀，置于超声波清洗器中超声30 min，冷却后将有机相过滤转移至100 mL梨形蒸馏瓶中，残渣再用2×10 mL二氯甲烷混匀超声提取两次，离心合并有机相，于40 ℃旋转蒸发至2 mL，将样液转移至5 mL刻度试管中，并用少量二氯甲烷洗涤梨形蒸馏瓶，合并洗涤液到刻度试管中，室温通氮浓缩至干。定量加入1.0 mL乙腈溶解残渣，加入2 mL环己烷旋涡混匀2 min后，2500 r/min离心3 min，将下层乙腈相过0.45 μm微孔滤膜后，供液相色谱-质谱/质谱仪测定。

3.蜂蜜

称取5 g试样（精确至0.01 g）于50 mL具塞离心管中，加入10 mL水和25 mL乙酸乙酯，于旋涡混合器上混匀1 min，以3000 r/min离心5 min，将上层乙酸乙酯提取液收集于浓缩瓶中，残渣再加入20 mL乙酸乙酯，重复上述操作，合并乙酸乙酯提取溶液。在50 ℃ 以下减压浓缩至约3 mL后转移至10 mL离心管中，用5 mL乙酸乙酯分两次洗涤浓缩瓶，合并洗涤液于离心管中，用氮气吹干。加1.0 mL乙腈溶解残渣，并过0.45 μm微孔滤膜后，供液相色谱-质谱/质谱仪测定。

国标解读及注意事项

1.标准物质用甲醇配成100 μg/mL的标准储备液，在0 ℃～4 ℃冷藏避光保存，可使用3个月。

2.本方法中肉类和肠衣的提取净化方式为：二氯甲烷提取三次，无水硫酸钠除水，环己烷除脂；蜂蜜的的提取净化方式为：水溶解后，乙酸乙酯提取两次。三种基质均相当于5 g试料上机检测。

3.根据基质中含水量的多少，调整无水硫酸钠的用量。

4.本方法采用多次提取的方式提高目标化合物的回收率。

5.本方法使用基质曲线进行定量，还可以使用三种化合物相对应的同位素内标配制标准曲线，进行回收率的校正。

参考文献

GB 23200.94-2016 食品安全国家标准 动物源性食品中敌bai虫、敌敌畏、蝇毒磷残留量的测定 液相色谱-质谱/质谱法

图1分割肉中敌bai虫、敌敌畏和蝇毒磷残留量测定的前处理流程图

图2肠衣中敌bai虫、敌敌畏和蝇毒磷残留量测定的前处理流程图

图3蜂蜜中敌bai虫、敌敌畏和蝇毒磷残留量测定的前处理流程图

 文章来源：标准物质ZX（https://www.gbw-china.com/)

金刚烷胺

金刚烷胺Z早是用于YZA型流感病毒的药物。在20世纪90年代末，曾用于动物病毒的预防和ZL。但长期使用金刚烷胺会使动物体内产生一定的毒性，这些毒素Z终会累积在人体内，从而危害人的身体健康。金刚烷胺在动物性食品中残留量的检测也是今年国家食品安全监督抽检中的一个重要检测项目。

安谱实验根据2019年新国标GB31660.5-2019《动物性食品中金刚烷胺残留量的测定 液相色谱-串联质谱法》，使用CNW PSA SPE小柱进行实验，此方法耗材简单易得，回收率高，重现性好。

一、样品前处理

1.猪肉基质： 

称取均质处理的猪肉样品2g于50mL离心管中，加入 D15-金刚烷胺内标溶液（加标浓度20ppb，猪肉基质空白样品则不需要加标），加1%乙酸乙腈溶液10mL，漩涡2min，3000 r/min离心5min，上清液转入另一50mL离心管中，重复提取一次，合并两次上清液。在合并的上清液中加无水硫酸钠3g、正己烷10mL，涡旋1min，3000r/min离心5min，弃去正己烷层，剩余溶液转至100mL鸡心瓶中，40℃水浴下旋转蒸干，用1.0 mL甲醇溶解残渣。

2.鸡肝基质：

称取均质处理的鸡肝样品2g于50mL离心管中，加入 D15-金刚烷胺内标溶液（加标浓度20ppb，鸡肝基质空白则不需要加内标），加1%乙酸乙腈溶液10mL，漩涡2min，3000r/min 离心5min，上清液转入另一50mL 离心管中，重复提取一次，合并两次上清液。在合并的上清液中加无水硫酸钠3g、正己烷10mL，涡旋1min，3000r/min离心5min，弃去正己烷层，剩余溶液转至100mL鸡心瓶中，40℃水浴下旋转蒸干，用1.0mL甲醇溶解残渣。

二、小柱操作

SBEQ-CA2450  CNWBOND PSA 乙二胺基-N-丙基 SPE小柱 50mg， 1mL/100 pcs

净化：将溶解液直接匀速通过小柱，呈滴状流入试管中。

浓缩：量取滤液0.5 mL于离心管中，40℃氮气吹干，加入50%乙腈水溶液0.5 mL，涡旋30s，10000 r/min离心5 min，取上清液过0.22 μm针式滤器供上机测定

三、LCMS/MS测定条件

液相条件: 

色谱柱：Athena C18（2.1*50mm，1.8um）

流速：0.2 mL/min

柱温：40℃

进样量：1ul

流动相:  A: 0.1%甲酸水   B: 甲醇  

质谱参数:  

离子源：ESI

采集模式：正模式

扫描方式：MRM      

离子源温度：300℃

电压：4000V

金刚烷胺离子对：152_135（定性定量） 152_93（定性）

盐酸金刚烷胺-D15离子对：167_150（定性定量）

四、实验谱图

1.金刚烷胺标品图谱20ppb

2.猪肉基质加标谱图（20ppb）

3.猪肉基质空白谱图

4.鸡肝基质加标20ppb

 5.鸡肝基质空白

五、实验数据

采用基质配标标准溶液配制标准曲线，本次实验猪肉基质空白中检出金刚烷胺1.1ug/kg，鸡肝基质空白中检出金刚烷胺0.3ug/kg 。

六、实验耗材

硝基咪唑类药物（nitroimidazole,NMZs）是一类具有抗原虫感染和抗厌氧菌的硝基杂环类KJ药物，其具有kangjun和抗原虫作用。近年来作为饲料添加剂广泛应用于畜牧业生产中，同时也是一种生长促进剂，以促进畜禽的生长及改善饲料的转换率。由于这类化合物含有的硝基杂环类物质具有潜在致癌、致畸和致突变作用，因此欧美等发达国家已禁止在食源性动物中使用硝基咪唑类药物。我国也对硝基咪唑类药物进行了严格的限制，2020年生效实施的GB 31650-2019《食品安全国家标准 食品中兽药ZD残留限量》中仅规定了甲硝唑和地美硝唑两种物质允许作ZL使用，但不得在动物性食品中检出；同年农业农村部公告第250号，将洛硝达唑、替硝唑列入《食品动物中禁止使用的药品及其他化合物清单》中。

本文阐述了如何将硝基咪唑类化合物从样品基质中分离提取出来，并经过净化后，转化成液质联用仪可以检测的形式。以提取、净化为ZD，依据国标GB/T 21318-2007，为检测人员和相关领域研究人员提供一定的参考。

应用范围

猪肉/鸡肉/牛肉/猪肝/鸡肝/牛肝/猪肾/牛肾/鱼肉/奶粉/蜂蜜

方法原理

样品中残留的8种硝基咪唑、2种代谢物用甲醇-丙酮均质或超声波提取，经乙酸乙酯液液分配，以凝胶色谱（GPC）净化，再经固相萃取（SPE）净化，采用液相色谱/串联质谱确证，外标法定量测定。

前处理仪器

凝胶色谱仪（配有馏份收集浓缩器）；组织捣碎机；均质器；超声波发生器；旋转蒸发器；高速离心机；氮吹仪；固相萃取装置；具塞锥形瓶（250 mL）；分液漏斗（250 mL）；浓缩瓶（50 mL、250 mL）。

检测仪器：LC-MS/MS+ESI源

01提取

肌肉组织、脏器组织样品及水产品准确称取约20 g样品（精确至0.1 g）于250 mL具塞锥形瓶中，加入10 g硅藻土（80目～120目）与样品充分混匀，再依次加入5 mL饱和氯化钠水溶液和70 mL甲醇-丙酮（3+1），高速均质提取3 min。将提取液移入离心管中，于10000 r/min离心2 min，将上层提取液移入250 mL浓缩瓶中。残渣每次再用50 mL甲醇-丙酮（3+1）重复提取两次，合并提取液。

蜂蜜、乳及乳制品样品准确称取约20 g样品（精确至0.1 g）于250 mL具塞锥形瓶中，加入10 mL饱和氯化钠水溶液和70 mL甲醇-丙酮（3+1），超声波提取30 min。移入离心管中，于10000 r/min离心2 min，将上层提取液移入250 mL浓缩瓶中。残渣每次再用50 mL甲醇-丙酮（3+1）重复提取两次，合并提取液。

02液液分配

将提取液于40 ℃水浴中旋转浓缩至只剩水相，并转移至250 mL分液漏斗中，加入50 mL饱和氯化钠水溶液和25 mL乙酸乙酯，振摇3 min，静置分层，收集乙酸乙酯相。水相再用20 mL乙酸乙酯重复提取两次，合并乙酸乙酯相。经无水硫酸钠柱脱水，收集于250 mL浓缩瓶中，于40 ℃水浴中旋转浓缩至近干，加入5 mL乙酸乙酯-环己烷（1+1）溶解残渣，并用0.45 μm滤膜过滤，待净化。

03净化

凝胶色谱（GPC）净化凝胶色谱净化条件如下：净化柱：700 mm×25 mm，Bio Bcads S X3，或相当者；流动相：乙酸乙酯-环己烷（1+1）；流速：4.7 mL/min；样品定量环：5.0 mL；预淋洗体积：50 mL；洗脱总体积：210 mL；开始弃去体积：90 mL；收集体积：90 mL；ZH弃去体积：30 mL。

04凝胶色谱净化步骤如下

将5 mL待净化液按照凝胶色谱净化条件进行净化，合并馏份收集器中的收集液于250 mL浓缩瓶中，于40 ℃水浴中旋转浓缩至近干，加入5 mL甲醇以溶解残渣，待净化。

05固相萃取（SPE）净化

使用前用5 mL甲醇预淋洗C18固相萃取柱（1 g，6 mL），将5 mL溶解液倾入C18固相萃取柱中，以1 mL/min的速度收集流出液，再用10 mL甲醇进行洗脱。收集全部洗脱液于50 mL浓缩瓶中，于40 ℃水浴中旋转浓缩至干。用甲醇溶解并定容至1.0 mL，经0.45 μm滤膜过滤后，供液质测定和确证。

国标解读及注意事项

1.硝基咪唑标准物质用甲醇配成1000 μg/mL的标准储备液，在0 ～4 ℃条件下避光保存，可使用12个月。2.如果有条件，建议凝胶色谱净化系统中配合使用紫外检测器，准确监测目标化合物及杂质的流出情况。

3.固相萃取净化过程中，C18柱作为净化柱使用，注意上样过程中就需要收集流出液，再和洗脱液进行合并。

4.国标方法中使用基质添加标准曲线，外标法进行回收率的校正。注意做肉类样品的基质添加标准曲线前，先进行洗涤，然后加标，再进行后续提取净化等流程。

5.建议使用硝基咪唑标准物质相对应的同位素内标，进行回收率的校正。

参考文献：GB/T 21318-2007 动物源食品中硝基咪唑残留量检验方法

图1 肌肉组织、脏器组织样品及水产品中硝基咪唑残留量测定的前处理流程图

图2 蜂蜜、乳及乳制品样品中硝基咪唑残留量测定的前处理流程图

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动物性食品中氮哌酮及代谢物残留量测定的前处理方法

氮哌酮的危害及检测目的

氮哌酮是一种丁酰苯类神经安定药，动物使用后可消除紧张感，使其活动力下降，对环境淡漠并长期处于安静状态。有助于降低因应激及创伤引起的死亡率，因此在长途运输中常常给猪等动物使用该药。氮哌醇是氮哌酮在动物体内的代谢产物，与原药氮哌酮的化学结构相近，是氮哌酮的残留标示物。通过食物链氮哌酮及其代谢产物氮哌醇会对人体产生直接的危害。为此我国农业农村部和国家市场监督管理总局2019年发布的GB 31650-2019《食品安全国家标准食品中兽药ZD残留限量》中明确规定了氮哌酮及其残留标示物氮哌醇在猪靶组织中的残留限量。

本文阐述了如何将氮哌酮及其代谢物从样品基质中分离提取出来，并经过净化后，转化成GX液相色谱可以检测的形式。以提取、净化为ZD，依据国标GB 29709-2013，为检测人员和相关领域研究人员提供一定的参考。

检测项目：氮哌酮、氮哌醇

应用范围：猪的肌肉、皮+脂、肝脏和肾脏

GX液相色谱法

方法原理：试样中残留的氮哌酮和氮哌醇用乙腈萃取，正己烷除脂，MCX柱净化，GX液相色谱测定，外标法定量。

前处理仪器：

分析天平（感量0.01 g 和0.00001 g）；冷冻高速离心机；氮吹仪；旋涡混合器；固相萃取装置；超声波清洗机；均质机；离心管；滤膜（0.2 μm）。

检测仪器：HPLC +PDA

样品的制备与保存

取新鲜或冷冻空白组织、供试组织，去除筋膜，绞碎，并使均质。

取均质后的供试样品，作为供试试料。

取均质后的空白样品，作为空白试料。

取均质后的空白样品，添加适宜浓度的标准工作液，作为空白添加试料。

试料于零下20 ℃ 以下保存。

前处理方法

1.提取

称取试样5 g±0.05 g，于离心管中，加乙腈10 mL，旋涡混合1 min，超声2 min，5000 r/min离心5 min，取上清液，残渣中加乙腈10 mL重复提取一次，合并两次上清液。于40 ℃水浴旋转蒸干。用2 %甲酸水溶液5 mL溶解残余物，加正己烷4 mL，混匀，5000 r/min离心5 min，弃正己烷层液，备用。

2.净化

MCX柱依次用甲醇3 mL、水3 mL和2 %甲酸水溶液3 mL活化，取备用液过柱，控制流速小于1 mL/min，用2 %甲酸水3 mL和甲醇3 mL淋洗，抽干，用5 %氨化甲醇4 mL洗脱。收集洗脱液，于40 ℃氮气吹干，用流动相（乙腈-乙酸铵溶液1+1）1.0 mL溶解残余物，旋涡混匀，供GX液相色谱法测定。

国标解读及注意事项

1.氮哌酮和氮哌醇标准物质用甲醇配成1 mg/mL的标准储备液，在零下20 ℃ 以下避光保存，有效期3 个月。

2.本方法使用乙腈两次提取目标化合物，正己烷除脂，阳离子交换柱富集净化，相当于5 g试料进行上机检测。

3.MCX柱净化方法为“酸上样，碱洗脱”。

4.氨水甲醇溶液现用现配，避免氨水挥发，影响洗脱效果；洗脱过程中洗脱溶剂少量多次加入，可以增加洗脱率。

5.固相萃取过程中需要控制流速，使溶液一滴一滴地流下，以保证离子交换的效果。

参考文献

GB 29709-2013 食品安全国家标准 动物性食品中氮哌酮及代谢物多残留的测定 GX液相色谱法

图1 猪组织中氮哌酮和氮哌醇残留量测定的前处理流程图

表1  氮哌酮和氮哌醇信息表

文章来源 坛墨质检（https://www.gbw-china.com/)

草甘膦，又称农达，是一种广谱灭生性除草剂，广泛应用于茶园、果园、玉米田间等农业生产中。随着草甘膦的广泛使用，其在茶叶、水果、玉米等植物源食品中残留量的检测越来越受到国内外的关注。
草甘膦（GLY）及其代谢物氨甲基膦酸（AMPA）均为小分子化合物，具有极性强、易溶于水、难溶于各种有机溶剂等特性，这给常规检测带来了极大的困难和挑战。
中检维康使用CLOVER草甘膦专用柱（货号：GLY3000）对茶叶中的草甘膦及其代谢物进行处理，使用UPLC-MS/MS测定，当草甘膦及其代谢物加标浓度为80 μg/kg，其回收率在70-100 %，RSD在5 %以内，符合测定标准。

准确称取经粉碎的茶叶样品1.0 g(精确至0.001g)于50mL离心管中，加100 μL 浓度为10 mg/L的1,2-C13N15草甘膦同位素内标溶液，加入10 mL水，涡旋混合20 min，超声振荡10 min，以4000 r/min离心8 min。

移取5 mL上清液至15 mL离心管中，加5 mL二氯甲烷，涡旋5 min，以4000 r/min离心4 min，取上清液2.5 mL过CLOVER®草甘膦专用柱（CLOVER®草甘膦专用柱使用前应依次用3 mL甲醇，3 mL水活化），弃去前端几滴滤液，收集后续滤液。

取上述滤液1mL衍生，依次加入1.0 mL 50g/L硼酸钠溶液，0.5 mL 10 g/L FMOC-Cl，涡旋混合2 min，40 ℃水浴衍生1 h，涡旋1 min，再以8000 r/min离心3 min，上清液过0.22 μm滤膜，上机检测。

       草甘膦(Glyphosate，Gly)是广泛使用的一类广谱非选择性除草剂，其在环境和生物体中富集并通过食品进入人体，会对人体健康造成危害。随着其在茶叶上的广泛使用，草甘膦及其主要代谢产物氨甲基膦酸残留问题也越来越受关注。

　　目前常用的检测方法为离子交换净化、七氟丁醇(HFB)和三氟乙酸酐(TFAA)衍生后GC-MS检测，或9-芴基甲基三氯甲 烷衍生后LC-MS/MS检测，这些方法通常存在操作时间长、需要衍生等问题，因此建立一种简便、快捷、有效的草甘膦及其代谢物残留的检测方法具有重要的意义。

       迪马科技在参考各种标准及文献的基础上，建立了SPE-UPLC-MS/MS法测定茶叶中草甘膦及其代谢物氨甲基膦酸的检测方法：采用水提取，ProElut GLY固相萃取专用柱净化样品，收集流出液，Dikma  色谱柱分离检测，该方法特点：

1)     前处理步骤少，提取液直接通过净化柱接收流出液即可；

2)     有机溶剂消耗量小，前处理过程中也无需使用酸碱试剂；

3)     仪器分析简单，样品无需衍生直接分析，可提高结果稳定性及减少实验成本；

4)     方法定量限0.1 mg/kg。

以下为详细解决方案，敬请参考！

茶叶中草甘膦及其代谢物的测定

——SPE-UPLC-MS/MS法

1、适用范围

        本方法适用于绿茶、花茶、铁观音、红茶和普洱茶中氨甲基膦酸和草甘膦的检测，定量限0.1mg/kg。

2、标准品配制

       单标标准储备液：准确称取各标准品，用水配制成1000 μg/mL的单标标准储备液。

       混标标准中间液：分别吸取各单标标准储备液，用水配制成1.0 μg/mL、10 μg/mL和50 μg/mL的混标标 准中间液。

3、提取

       取1 g茶叶于50 mL离心管中，准确加入10 mL水、10 mL二氯甲烷，振荡10 min，超声10 min，8000 rpm离心5 min，取5 mL上清液，待净化。

4、净化

       SPE柱： ProElut GLY 6 mL (Cat.#: 65938)

       (1)活  化：依次加入5 mL甲醇、5 mL水，弃去流出液；

       (2)上  样：将待净化液加入柱中，弃去前3 mL流出液，收集后2 mL流出液，混匀，滤液过0.22 μm尼龙滤膜，上机分析。

注：同方法制备基质匹配标准溶液。

5、色谱条件

       UPLC-MS/MS条件：

       5.1 UPLC 条件

       色谱柱：Dikma Polyamino HILIC, 150 × 2.0 mm, 5 μm (Cat.#：99302)

       流  速：0.2 mL/min   进样量：10 μL   柱  温：35 ℃

       流动相： A：乙腈   B：5 mM乙酸铵溶液，氨水调节至pH=11

       梯度设置：

5.2 质谱条件

       定性离子对、定量离子对、碰撞气能量及去簇电压见下表

6、添加回收结果及色谱图

       茶叶中氨甲基膦酸和草甘膦的LC-MS/MS检测添加回收结果：

7、相关产品信息

       茶叶中草甘膦及其代谢物的测定SPE-UPLC-MS/MS法相关产品信息：

激素类药物主要包括雄激素、雌激素、孕激素、皮质醇激素等。激素类药物的应用，能够较为有效地提高养殖业的经济效益，但同时激素的滥用对人体健康的危害也是不容忽视的。一些养殖户片面追求经济利益，从而过度使用激素类药物，导致饲养动物体内的激素严重超标，所生产的肉类食品中也有大量的激素残留。如果食用这样的肉类食品，也会造成人体自身激素紊乱，给人体健康造成很大威胁。

实验部分

应用范围：动物源性食品/猪肉/猪肝/鸡蛋/牛奶/牛肉/鸡肉/虾

检测方法：液相色谱-质谱/质谱法

方法原理：试样中的目标化合物经均质，酶解，用甲醇-水溶液提取，经固相萃取富集净化，液相色谱-质谱/质谱仪测定，内标法定量

前处理仪器：电子天平（感量0.0001 g和0.01 g）；组织匀浆机；涡旋混合器；恒温振荡器；超声清洗仪；离心机（10000 r/min）；固相萃取装置；氮吹仪；pH计；移液器。

检测仪器：LC-MS/MS+ESI源

实验制备

1.动物肌肉、肝脏、虾

从所取全部样品中取出有代表性样品约500g，剔除筋膜，虾去除头和壳。用组织捣碎机充分捣碎均匀，均分成两份，分别装入洁净容器中，密封，并标明标记，于-18 ℃以下冷冻存放。

2.牛奶

从所取全部样品中取出有代表性样品约500 g，充分摇匀，均分成两份，分别装入洁净容器中，密封，并标明标记，于0 ℃～4 ℃ 以下冷藏存放。

3.鸡蛋

从所取全部样品中取出有代表性样品约500 g，去壳后用组织捣碎机充分搅拌均匀，均分成两份，分别装入洁净容器中，密封，并标明标记，于0 ℃～4 ℃ 以下冷藏存放。

前处理方法

1.提取

称取5g试样（精确至0.01 g）于50mL具塞塑料离心管中，准确加入混合内标溶液（100μg/L）100μL和10mL乙酸-乙酸钠缓冲溶液，涡旋混匀，再加入β-葡萄糖醛酸酶/芳香基硫酸酯酶溶液100μL，于37℃±1 ℃振荡酶解12h。取出冷却至室温，加入25mL甲醇超声提取30min，0℃～4℃下10000r/min离心10min。将上清液转入洁净烧杯，加水100mL，混匀后待净化。

2.净化

分别用6mL二氯甲烷-甲醇（7+3），6mL甲醇，6mL水活化ENVI-Carb固相萃取柱（500mg，6 mL），将提取液以2mL/min～3mL/min的速度上样。将小柱减压抽干。再将用6mL二氯甲烷-甲醇（7+3）活化好的氨基固相萃取柱（500mg，6mL）串接在ENVI-Carb小柱下方。用6 mL二氯甲烷-甲醇（7+3）洗脱并收集洗脱液，取下ENVI-Carb小柱，再用2mL二氯甲烷-甲醇（7+3）洗氨基柱，合并洗脱液后在微弱的氮气流下吹干，用1 mL甲醇-水（1+1）溶解残渣，供仪器测定。

注意事项

1.激素类标准物质及内标用甲醇配成1.0 mg/mL标准储备液，在-18 ℃以下避光保存，可稳定使用12个月。

2.如果有条件，建议每种标准物质使用其对应的同位素内标进行校正。实在没有对应的同位素内标，选择与其化学性质最近似的同位素内标进行校正（参考国标方法）。

3.β-葡萄糖醛酸酶只能冷藏，不能冷冻保存，否则会失活。

4.由于上样液比较多，可以自制一种可控流速的大针筒，固定在ENVI-Carb小柱上面，一次加上全部提取液，提高净化富集效率。

5.由于检测项目比较多，在浓缩过程中需要微弱氮气缓缓吹至近干，控制温度不高于35 ℃。

6.国标方法中激素类标准物质比较多，需要根据检测的项目，制定不同的色谱方法。如果检测项目比较多，建议使用一根150 mm长的色谱柱进行分离。根据出峰时间，使用正负离子切换模式进行扫描，提高检测效率。

参考文献：

GB/T 21981-2008 动物源食品中激素多残留检测方法 液相色谱-质谱/质谱法

猪肉、猪肝、鸡蛋、牛奶、牛肉、鸡肉和虾中激素类药物残留量测定的前处理流程图

激素类药物信息表

金刚烷胺，是最zao用于YZ流感病毒的抗病du药。在20世纪90年代末，曾用于动物病毒的预防和ZL。但长期使用金刚烷胺会使动物体内产生一定的毒性，这些毒素ZZ会累积在人体内，从而危害人的身体健康。我国农业部 560 号公告明确规定抗病du药物为禁用兽药。金刚烷胺在动物性食品中残留量的检测是国家食品安全监督抽检中的一个重要检测项目。

安谱实验根据国标GB31660.5-2019《动物性食品中金刚烷胺残留量的测定 液相色谱 - 串联质谱法》，使用QuEChERS多功能针式滤器（SBEQ-CE01-PSA-50）将四步净化步骤整合简化为一步操作，提取液经过滤器直接过滤至进样瓶中即可上机检测，实现同时净化吸附和微孔滤膜过滤等多种作用功能，极为显著地减少样品净化处理步骤，使操作更为简单，大幅提高工作效率。实验结果回收率高，稳定性好，可完成国标应用检测。

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实验过程

样品基质

鸡肉、猪肝

前处理方法

基质均质后，称 2g（精确至 20mg）装入 50mL 带盖离心管中加入金刚烷胺 -D15 内标，加入 10mL 1% 乙酸乙腈，涡旋 2min，3000r/min 离心 5min，收集上清液，重复提取一次，合并两次上清液；上清液中加入无水硫酸钠 3g，正己烷 10mL，涡旋 1min，3000r/min 离心 5min，弃去正己烷层，剩余溶液氮吹干， 用 1.0mL 甲醇溶解残渣。

净化

甲醇提取液匀速通过 QuEChERS 多功能针式滤器，收集净化液。

浓缩复溶

用移液器吸取 0.5mL 净化后溶液于离心管中，40℃氮气吹干；加入 0.5mL 50% 乙腈水溶液，涡旋 30s，10000r/min 离心5min，取上清液上 LC-MS/MS 测试。

基质匹配标准溶液

取各自空白组织试料，除不加 D15- 金刚烷胺工作液外 , 均按照上述前处理方法制得空白基质溶液，准确量取金刚烷胺和D15- 金刚烷胺标准工作液适量，分别用空白基质溶液稀释，制成金刚烷胺浓度为 20ug/L，D15- 金刚烷胺浓度为 20ug/L 的基质匹配标准溶液，临用现配，供 LC-MS/MS 测定。

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色谱条件

色谱柱：Athena C18 2.1×50mm，1.8um （LAEQ-2105UA）

流动相：A：5mM 乙酸铵（含 0.1% 甲酸）水溶液；B：乙腈

流速：0.2ml/min

进样量：10uL

程序洗脱：0-0.5min，5%B；3min，95%B；3.5-5min，5%B

质谱条件（以 PerkinElmer 为例）：电喷雾离子源，正离子扫描，多反应离子监测，反吹干燥气60，质谱接口加热温度 320℃，雾化气220，ESI 喷雾电压4500V，辅助加热气温度 300℃。

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实验谱图

图1 鸡肉基质金刚烷胺标准曲线

图2 猪肝基质金刚烷胺标准曲线

图3 鸡肉基质 -CNW 净化后提取离子图

图4 鸡肉基质 - 某 A 品牌净化后提取离子图

图5 纯溶剂标准品提取离子图

图6 猪肝基质 -CNW 净化后提取离子图

图7 猪肝基质 - 某 A 品牌净化后提取离子图

图8 纯溶剂标准品提取离子图

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实验数据

表1. 鸡肉基质中金刚烷胺的回收率

表2. 猪肝基质中金刚烷胺的回收率

表3. 三种净化方法（鸡肉基质）的金刚烷胺回收率对比

注：对比 QuEChERS 多功能针式滤器与 QuEChERS，实验结果显示 QuEChERS 多功能针式滤器性能未改变，效果更好。

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实验结论

采用所开发的 SBEQ-CE01-PSA-50 小柱进行两种类型基质（鸡肉、猪肝）中的 0.01ug/g 金刚烷胺加标实验，样品间平行性良好，RSD值较小，基质适应性较好，杂质去除效果较好，除杂后基质效应小，优于某 A 品牌。加标回收率优于传统的 QuEChERS 和某 A 品牌净化方法。因此，QuEChERS 多功能针式滤器性能优异，可完成国标应用检测。

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实验耗材

10月27日，海关总署紧急下达输欧盟动物源性食品执行新残留限值标准的通知：

各直属海关:

根据欧 盟 (EU ) 2019/1871 法规要求,自 2022 年 11 月28 日起, 动物源性食品中氯霉素、 硝基呋喃类代谢物、孔雀石绿等药残的测定限值将执行新的标准. 根据《食品安全法》 的规定, 出口食品生产企业应当保证其出口食品符合进口国 (地区 ) 标准要求。
现就欧盟相关标准和要求通报如下:
一、自 2022 年 11 月28 日起，输欧盟动物源性食品需符合氯霉素测定限值 0.15ug/kg、硝基呋喃代谢物 (增加硝呋索尔代谢物, 共5种) 测定限值 0.5ug/kg、孔雀石绿和隐形孔雀石绿总量测定限值0.5ug/kg 的标准要求。
二、根据欧盟 2002/994/EC 法规要求, 输欧盟养殖水产品、剥壳和/或加工虾、小龙虾、肠衣、兔肉、禽肉制品、蛋及蛋制品、蜂产品等动物源性食品，通批批检测氯霉素和硝基呋喃类代谢物。养殖水产品还应批批检测孔雀石绿和结晶紫。

    ——海关总署（司）局函

此次，海关公函中紧急把硝呋索尔代谢物纳入了硝基呋喃代谢物中，共5种，并规定其测定限值为0.5μg/kg。

紧接着，10月31日，农业部、国家卫健委、国家市场总局联合紧急发布《水产品中硝呋索尔代谢物残留量的测定》征求意见稿，这也就意味着，未来硝呋索尔代谢物不但出口产品需要检测，国内相关水产品等也将加入检测行列。

为此，坛墨质检快速响应，推出硝呋索尔代谢物检测配套标准物质。

硝呋索尔及其代谢物性质

硝呋索尔(nifursol)，又称硝呋柳肼，是继呋喃唑酮、呋喃西林、呋喃它酮和呋喃妥因之后的文一种硝基呋喃类抗菌药物。其结构和性质与呋喃唑酮等其它硝基呋喃类药物相似，原药在动物组织中代谢快速，但其有毒代谢产物则在动物体内能与蛋白紧密结合，形成稳定的结合态残留物，可在体内存在相当长时间，具有一定的毒性。

硝呋索尔原药在动物体内的主要代谢产物为3.5-二硝基水杨酸肼(35-dinitrosalicylic acid hydrazideDNSA）和5-硝基-2-糠酸(5-nitro-2-furoicacid)，二者均可作为硝呋索尔的残留标志物。硝呋索尔及其代谢物的结构式如图所示。

标准物质产品推荐

（一）固标

（二）液体单标

（三）液体混标

氨丙啉的危害及检测目的

氨丙啉是一种抗球虫药，主要以盐酸盐形式存在，在世界范围内被广泛应用于FZ球虫病。由于该药GX、安全，不易引起球虫耐药性，在鸡、兔、犊牛、羔羊中均有应用。盐酸氨丙啉虽然毒性较低，但是由于不规范使用，抗球虫药长期、持续添加在饲料中，极容易造成药物在肉及蛋品中的残留现象，危害人体健康。为此我国农业农村部和国家市场监督管理总局2019年发布的GB 31650-2019《食品安全国家标准食品中兽药ZD残留限量》中明确规定了氨丙啉在动物靶组织中的残留限量。

本文阐述了如何将氨丙啉从样品基质中分离提取出来，并经过净化后，转化成液质联用仪可以检测的形式。以提取、净化为ZD，依据行标SN/T 4583-2016，为检测人员和相关领域研究人员提供一定的参考。

检测项目：氨丙啉

应用范围：鸡肉、鸡肝、鸡肾、鸡蛋、牛肉、牛肝、牛肾、牛脂肪和牛奶

液相色谱-质谱/质谱法

方法原理：试样中的氯丙啉用1 %三lyu乙酸-乙腈溶液（3+7）提取，经HLB固相萃取柱净化，用液相色谱-质谱/质谱测定，外标法定量。

前处理仪器：

分析天平（感量0.01 g 和0.1 mg）；均质器（15000 r/min）；离心机（5000 r/min）；涡旋振荡器；氮吹仪；具塞塑料离心管（50 mL），比色管（50 mL）。

检测仪器：LC-MS/MS+ESI源

#样品的制备、保存与要求#

1.肌肉、肝脏、肾脏、鸡蛋、脂肪

取样品中又代表性的可食部分约500 g，用粉碎机粉碎，装入洁净容器作为试样，密封并做好标识，于零下18 ℃ 冰箱内保存。

2.牛奶

从所取全部样品中取出有代表性样品500 mL，充分混匀，装入洁净容器中，密封，并标明标记，于4 ℃ 以下冷藏存放。

制样操作过程中应防止样品受到污染或发生残留物含量的变化。

前处理方法

1.提取

称取试样约5 g（精确到0.01 g ）于50 mL塑料离心管中，加入20 mL 1 %三lyu乙酸-乙腈溶液（3+7），15000 r/min均质提取1 min，5000 r/min离心5 min，上清液转移至50 mL比色管中，残渣再用20 mL三lyu乙酸-乙腈溶液重复提取一次，合并提取液于比色管中，定容至刻度，混匀。提取液经滤纸过滤后待净化。

2.净化

分取10 mL提取滤液，于45 ℃ 氮气吹至约3 mL，加入2 mL正己烷，涡旋振荡30 s，5000 r/min离心5 min，弃去正己烷层，下层溶液以小于2 mL/min流速过HLB柱（6 cc/500 mg，6 mL甲醇和6 mL水活化），3 mL水洗涤样品管后上柱，再用6 mL水淋洗小柱，抽干10 min，以6 mL甲醇洗脱并收集，洗脱液在45 ℃氮气吹干，用1.0 mL定容液（乙酸铵-乙腈溶液4+6）溶解，过0.2 μm滤膜后，供液相色谱-质谱/质谱分析。

国标解读及注意事项

1.盐酸氨丙啉标准物质先用水溶解，再用乙腈定容，配成溶液浓度以氯丙啉计为100 μg/mL的标准储备液。

2.本方法使用1 %三lyu乙酸-乙腈溶液提取目标化合物，正己烷除脂，HLB柱富集净化，稀释倍数=5，相当于1 g试料进行上机检测。

3.提取液先用氮吹方法浓缩，乙腈挥发后，剩余水相用正己烷除脂后，再过柱净化。

4.固相萃取过程中需要控制流速，使溶液一滴一滴地流下，以保证富集的效果。

5.本方法使用基质曲线进行定量分析，根据具体检测样品选取合适的基质制作空白样品基质液。

参考文献

SN/T 4583-2016 出口动物源食品中氨丙啉残留量的测定 液相色谱-质谱/质谱法

图1 动物源性食品中氨丙啉残留量测定的前处理流程图

氨丙啉信息表