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　　本生—ELISA试剂盒检测注意事项汇总

　　以下是本生技术小编总结：影响ELISA检测的关键因素，也是众多ELISA 用户在实验中经常遇到的问题及解决方案：

　　Q1：为什么所有试剂和检测样本要平衡至室温后再进行加样操作?

　　A1：温度是ELISA结合反应的重要影响因素。为了使所有样本在一致的温度下反应，实验前务必将所有试剂平衡至室温，包括检测样本。避免因温度的动力学反应差异而导致ELISA检测结果的不准确。

　　Q2：为什么标准曲线线性较差?

　　A2：按照推荐方式保存标准品;溶解标准品之前需短暂离心，彻底收集粉末;确保标准品完全溶解和混匀(大约10min)，然后再进行后续的系列稀释步骤，确保每一步都充分混匀且精确移液;显色的恰当终止;选择合适的数学拟合方程绘制标准曲线。

　　Q3：ELISA实验为什么必须设置复孔?

　　A3：为获得更准确的实验结果，强烈建议标准品及样本进行复孔检测。

　　因为复孔检测可以：

　　★计算平均值，确保实验结果更准确;

　　★解决实验中误操作造成的跳孔现象;

　　★计算CV值，对实验的操作和试剂盒的精密度进行评估。

　　Q4：为什么实验过程中孵育、洗涤需要振荡?如何振荡?

　　A4：振荡孵育使反应更充分，振荡洗涤使背景更干净。建议使用酶标专用96孔微孔板振荡器。

　　孵育过程振荡，可以加快、加强抗原抗体间的相互碰撞接触，使得反应过程更加完全，OD值通常会比未振荡孵育的结果要高;洗涤过程振荡，可以使洗板更干净，在很大程度上能降低背景值，同时可以提高试剂盒检测的灵敏度。

　　具体操作请参见说明书或致电劲马生物

　　Q5：何时终止ELISA反应?

　　A5：ELISA实验最终需要酶催化底物显色反应来完成，在最合适的时间终止反应是ELISA实验成功的重要因素。在HRP-TMB酶反应系统中，当最高浓度标准品颜色不再变深，倒数2-3个浓度标准品颜色开始有浅蓝色时，便需要终止反应;或者也可以根据最高浓度标准品孔在620nm的OD值来决定，OD620=0.9-0.95之间时即可终止。

　　Q6：为什么酶标仪读数时必须选用双波长?

　　A6：首先，酶标仪使用前务必预热10-15min，使测读结果更稳定。其次，ELISA实验采用双波长测定吸光度，可以排除单波长检测时的测定干扰(标本的浓度，干扰色等)。一般采用波长作为参照波长，在参照波长下，检测物的吸光值最小，检测波长和参照波长的吸光值之差可以消除非特异性吸收;因此，双波长测定，可最大限度的消除指纹、杂质及不透光的物质对酶标仪读数带来的误差，以保证实验数据的准确度。

　　本生ELISA检测 本生一直视质量控制为企业的生命，追求企业竞争力的不断提升。公司在经营中始终秉承：遵纪守法，严于律己，宽仁以待，敢于承担的企业精神作为标准，以过硬的质量和优良的服务来维护和拓展市场，较大限度的满足客户的需求。与客户的共赢，是我们的发展目标。本生!您信任的合作伙伴。我们愿与您真诚合作，共创美好的未来。

　　ELISA试剂盒操作注意事项您知道吗?

　　ELISA试剂盒的操作注意事项：

　　1.试剂盒从冷藏环境中取出应在室温平衡15-30分钟后方可使用，酶标包被板开封后如未用完，板条应装入密封袋中保存。

　　2.浓洗涤液可能会有结晶析出，稀释时可在水浴中加温助溶，洗涤时不影响结果。

　　3.各步加样均应使用加样器，并经常校对其准确性，以避免试验误差。一次加样时间控制在5分钟内，如标本数量多，推荐使用排枪加样。

　　4.请每次测定的同时做标准曲线，做复孔。如标本中待测物质含量过高(样本OD值大于标准品孔第一孔的OD值)，请先用样品稀释液稀释一定倍数(n倍)后再测定，计算时请乘以总稀释倍数(×n×5)。

　　5.封板膜只限一次性使用，以避免交叉污染。

　　6.底物请避光保存。

　　7.严格按照说明书的操作进行，试验结果判定必须以酶标仪读数为准.

　　8.所有样品，洗涤液和各种废弃物都应按传染物处理。

　　9.本试剂不同批号组分不得混用。

　　10. 如与英文说明书有异，以英文说明书为准。

　　ELISA试剂盒--注意事项：

　　◆标本宜在新鲜时检测。如有细菌污染，菌体中可能含有内源性HRP,也会产生假阳性反应。保存过久可发生聚合在ELISA中可使本底加深。

　　◆冻结标本溶解后，蛋白质局部浓缩，分布不均，应充分混匀宜轻缓，避免气泡，可上下颠倒混合，不要在混匀器上强烈震荡。

　　◆浑浊或有沉淀的标本应先离心或过滤，澄清后再检测。

　　◆反复冻融会使蛋白效价降低，所以代测样本如需保存作多次检测，宜少量分装冰存。

　　ELISA实验标准曲线平直，一般有以下原因：标准曲线制备是否不当，洗孔不净，吸孔不充分，读数不准确或是吸量误差。查找原因，即可找到相应解决方案。

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　　大鼠Elisa试剂盒操作注意事项与步骤

　　大鼠Elisa试剂盒注意事项:

　　1. 大鼠Elisa试剂盒冻结与寄存：-20℃取出后主张放入2～8℃冰箱中冻结约，每隔一段时间悄悄摇晃均匀，不可直接放入温度较高处冻结，防止因温度改变太大，形成蛋白质凝聚而出现沉积，血清的质量下降。若短期无法用完一瓶，主张无菌分装,再放回冷冻，防止反复冻融。4℃长时间保存后血清中的变性脂蛋白及纤维蛋白，形成絮状物质变差。

　　2. 大鼠Elisa试剂盒是否灭活：加热可灭huoxue清中补体系统，在极少数情况下(培育ES细胞，滑润肌细胞时)主张灭活，在培育其余细胞时不主张灭huoxue清。血清灭活十分简单产生沉积，如必须灭活请按56℃，30 min，轻微摇晃准则操作，灭活温度高、时间长、摇晃不均都简单产生沉积。

　　3. 大鼠Elisa试剂盒培育基：无血清培育基在结果重复性、细胞体外分化方面有优势，可是，血清仍然是培育液中最根本的添加物，尤其是在原代培育或细胞成长状况不良时，常常会先使用有血清的培育液进行培育，待细胞成长旺盛后再换成无血清培育液。

　　大鼠Elisa试剂盒操作过程 ：

　　1.用盖片镊人Elisa试剂盒将盖玻片自75%乙醇中取出，用无菌丝绸布擦拭洁净，不要用纱布;

　　2.将盖玻片悄悄放入6孔培育板(每孔一片)或培育皿中(每个平皿可放置2-3片);

　　3.在间隔紫外灯直射范围内20-30 厘米处照射2-3小时;

　　4.将通过计数的细胞悬浮液移入培育板中，使盖玻片彻底浸在培育液中;

　　5.将人Elisa试剂盒培育板在5% CO2水浴孵箱中37℃孵育2-3天，当贴壁细胞成长至覆盖培育板底部2/3面积时，将培育板取出，用盖片镊悄悄取出盖玻片，用蒸馏水漂洗后即可进行快速固定以及免疫细胞化学检测。

　　大鼠Elisa试剂盒操作注意事项与步骤先和大家介绍到这，如果想要了解更多Elisa试剂盒的信息，可以关注天津本生，本生给生物医药客户提供生物实验室检测试剂及耗材，欢迎广大客户来询。