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在任何药物研发进程中，实验方法的设计和优化对新药研发的成功性而言至关重要。我们需要考虑的因素包括：选择Z合适的检测技术，读取模式，和实验模型（生物化学，细胞或动物）。通常，这些因素会影响数据质量，生物相关性以及ZL的可预测性，Z终将影响整个临床前药物开发工作的成败。

方法技术的选择

diyi步是确立解决实验问题的技术，例如激活，YZ或调控靶标、阐明MOA（作用机制）、确定受体 - 配体或蛋白质 - 蛋白质的相互作用、鉴定和定量疾病特异性生物标志物或血浆中的生物标志物成分。

样本基质的兼容性

生物标志物测定旨在检测或定量生物学中的靶标样本(例如，复杂基质）中的含量，这种负责基质涵盖范围有：细胞培养中的分泌蛋白，细胞裂解液，组织提取物，唾液，尿液，血清，血浆，血液的上清液，或其他液体（例如，CSF，BALF）。分析技术可能并非总是如此。某些实验方法在某些基质中存在干扰而不适用。例如，在血清，血浆或血液中的血红蛋白表现出广泛的可见光谱吸光度，即在350和600nm之间。检测方法中，依赖于这些波长的激发或发射将容易发生干扰。基于洗涤的检测方法可以避免由于过多复杂基质引起的干扰，因为干扰物质在洗涤过程中被冲走。为了确定基质的相容性，在合适的稀释液中的加标回收和标准曲线是传统的验证方法。

同时，在复杂体系中的抗体选择也是非常重要的，靶标蛋白可能被修饰或者酶切，影响抗原识别位点，因此，加入蛋白酶YZ剂也是有必要的。

实验效果 ：灵敏度和动态范围

 一个实验的灵敏度决定了其在动态范围内的对其靶点的检测的“分辨率”，同时预警了不同批次批次之间的Z低检测范围的差异性。灵敏度同时也依赖于检测样本。血清中的检测难度高于细胞水平。同时“珍贵样品”如有限的细胞或者组织会决定测试的容许体积等。方法技术也会影响检测灵敏度，如发光和荧光的模式比吸收光的模式的灵敏度要好。

动态范围定义了检测下限和上限。例如下图所示，不同的检测技术对于肿瘤坏死因子TNF的检测动态范围达到了数量级的差异。因此，当样品含量超过了其实验方法的动态范围，其浓度，动力学参数，活性，结合力将不准确。因此，需要预先滴定检测窗口以免达到饱和。

下图展示了不同实验技术对于不同的亲和力的适用范围：

特异性

特异性对于确保筛选靶向的靶点或表型非常重要。对于免疫分析，需要考虑针对靶向分析物特异性的抗体，特别是对于靶向蛋白质的部分修饰新表位变化,结合/未结合或活性/非活性状态。此外，还需要考虑物种和靶点的交叉反应性。

稳定性和准确性

尽管信号强度和和性噪比（S/B）通常被用来评估一个实验的质量，可重复性和准确性也是非常重要的。Z’是一个非常好的评判标准。例如，相对而言，高Z’而低信噪比的实验方法好于低Z’高性噪比的实验方法。与此同时，实验发法应当具有高重复性，定量实验应该有标准品做参照。设置好对照，好的标品，抗体，阳性化合物对于建立可靠的实验是非常重要的。

试剂和其他耗材

对于免疫实验来说，高灵敏度和搞特异性的抗体非常重要，同时还有对应的酶或重组蛋白。通常，所有的实验成分，例如细胞、蛋白、酶、辅因子、底物、激动剂，拮抗剂等都需要进行浓度滴定以确定Z优浓度。该过程能够确保稳定的动力学研究以及防止过饱和浓度而产生的试剂浪费。（如下图）

细胞模型

在选择细胞模型时，应考虑使用原代细胞与重组/永生化细胞系的优缺点，以及研究内源性与重组表达的靶蛋白。同时需要评估目标蛋白的表达水平，因为过多或过少的表达会影响灵敏度和分析质量。细胞传代和培养条件也会影响实验质量。

微孔板的选择

正确选择微孔板可以减少交叉效应、降低背景、降低信号吸收或放大信号强度。下表显示了基于检测方法的微孔板选择矩阵。

众所周知，药物研发花费巨大，耗时长。优化已知影响数据质量、生物相关性和ZL可预测性的实验因素Z终推动整个临床前药物开发工作的成功。选择Z合适的分析技术、读取模式和实验模型以及优化实验方案为成功和经济有效的药物开发奠定基础。

我们珀金埃尔默能够提供多种实验方法开发的解决方案。例如，我们拥有的均相的Alpha技术以及TRFRET技术，时间分辨defia技术，化学发光技术，细胞增殖和毒性试剂盒，各类GPCR以及动物模型的探针细胞株，微孔板等试剂耗材，能够助力您新药研发的各个环节。

珀金埃尔默能够提供多种实验方法开发的解决方案，欢迎大家关注“珀金埃尔默生命科学”微信公众号了解更多解决方案，期待您的垂询！

关于珀金埃尔默：

珀金埃尔默致力于为创建更健康的世界而持续创新。我们为诊断、生命科学、食品及应用市场推出独特的解决方案，助力科学家、研究人员和临床医生解决Z棘手的科学和YL难题。凭借深厚的市场了解和技术专长，我们助力客户更早地获得更准确的洞见。在，我们拥有12500名专业技术人员，服务于150多个国家，时刻专注于帮助客户打造更健康的家庭，改善人类生活质量。2018年，珀金埃尔默年营收达到约28亿美元，为标准普尔500指数中的一员，纽交所上市代号1-877-PKI-NYSE。

了解更多有关珀金埃尔默的信息，请访问www.perkinelmer.com.cn。

当前，COVID-19疫情已在全世界范围蔓延，国内形势逐渐转好但也绝不能松懈，全民复工复产推动经济运转是自救也是对其他国家的支持。特别是YL和制药行业，在疫情开始阶段就投入研发和生产，加速药物筛选、临床诊断和疫苗研发仍然是药企复工后的重中之重，也是今后长期持久的工作。从各地ZL方案的报道来看，不仅仅考虑对新冠肺炎的治LX果，更考虑到患者治愈后的生活质量，用药较SARS时期更为谨慎。这也提示，经过此次“战疫”，对于药效、作用机制和副作用的研究要求更为明确，国家可能对新药审批和监管更为严格。

疫情之下，珀金埃尔默积极行动，基于在药物研发领域积累的经验和对法规的理解，我们从药物高通量筛选(HTS)的层面出发，为药企提供设备、软件和服务全流程方案。

利器加速研发成果转化

01 利用类病毒颗粒报告基因系统进行药物筛选

EBOV trVLP类病毒颗粒报告基因系统可以很好的模拟病毒生命周期，可用于高通量非靶点(target-free)药物筛选，通过EnVision检测报告基因荧光素酶和底物结合释放的化学发光信号来评价化合物的抗病毒活性；同时研究化合物是如何影响病毒进入细胞、复制以及分泌。^[1]

p1细胞检测药物对病毒进入、复制和转录的YZ作用。p1细胞给药后的细胞上清被转移至p2细胞，用以检测病毒组装和分泌。

02 病毒空斑检测

病毒空斑检测是临床前和临床研究中评价抗病毒 药物和疫苗效果的一种通用方法。利用荧光免疫染色和EnSight多功能微孔板检测对96孔板中的RSV（呼吸道合胞病毒）侵染HEp-2细胞产生的空斑成像，通过Kaleido分析软件自动识别病毒空斑并计数，检测RSV滴度，以及抗RSV中和抗体滴度。^[2][3]

病毒空斑自动计数。A. 细胞明场成像和免疫荧光成像识别到的病毒空斑。B. 软件自动识别的空斑，紫色表示溶斑空洞ZX，相应的噬斑显示为红色；非裂解空斑以蓝绿色表示。算法可同时识别裂解(lytic)和非裂解(non-lytic)两种病毒空斑并自动计数。

03 细胞活力和细胞毒性检测

细胞活力或毒性检测是临床前评价药物安全性的重要方法。 ATPlite 1step检测系统将ATP代谢活性作为细胞活力的检测指标，通过Victor Nivo化学发光检测模式对ATP水平定量，当细胞的ATP浓度下降，表示细胞处于凋亡或坏死状态。这种快速灵敏的方法也用于检测化合物诱导的细胞毒效应。^[4]

04 细胞因子风暴监测

在新冠肺炎ZL过程中发现，有些急重症病人在免疫系统被激发后，过量细胞因子释放会导致细胞因子风暴，危机病人生命。通过多色AlphaPlex技术可以同时检测细胞因子IL6和IL8的含量，从而开发提升LX或YZ细胞因子风暴产生的方案，帮助患者度过危险期。检测细胞因子释放也是评价治LX果及安全性的重要指标。^[5]

扫平合规之路

将一种新药或ZL方法推向市场，是一个繁琐而复杂的过程——必须遵守FDA 21 CFR Part 11或EU Annex 11指南。使用我们针对珀金埃尔默多模式读板仪的增强安全软件，遵守法规就简单多了。该软件提供了所有兼容的工具，包括：

高级用户管理

审计追踪

电子签名

导出文件认证

全流程验证和确认

在多模式微孔板检测系统的使用寿命周期中，会执行多次确认测试。这些测试可以确保仪器达到Z佳性能。珀金埃尔默执行这些确认测试，并为您提供证书，作为GxP合规的证明。

制药和生物技术公司，包括临床研究机构，需要定义明确的SOPs、可靠的仪器、兼容的软件、经过验证的检测方法等，以确保一切都处于高水平运行。将我们的产品和服务与您的SOPs结合起来，成为一个完整的合规性解决方案。因此您可以专注于真正重要的事情——您的科学研究。

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参考文献

1. Lee N, Shum D, König A, et al. High-throughput drug screening using the Ebola virus transcription-and replication-competent virus-like particle system[J]. Antiviral research, 2018, 158: 226-237.

2. Wen Z, Citron M, Bett A J, et al. Development and application of a higher throughput RSV plaque assay by immunofluorescent imaging[J]. Journal of virological methods, 2019, 263: 88-95.

3. 快速GX判断病毒活性，何惧“疫”军突起https://mp.weixin.qq.com/s/vEPswHUqS1juaRgmXS4HBQ

4. Kuzikov M, Kanke R, ScreeningPort F I M E. Measuring Cell Proliferation and Cytotoxicity using the ATPlite 1step System and the VICTOR Nivo Multimode Plate Reader[J].

5. Ruby P, Groves K. Simultaneous Detection of IL-6 and IL-8 Secretion by Cell Lines using AlphaPlex Technology.