全部评论(1条)
-
- 花朵朵的哆哆 2017-05-01 00:00:00
- 本品是一种传统的细胞组织快速裂解液.使用本品裂解得到的蛋白样品可以用于常规的 Western、IP 等.主要成分为50mM Tris (pH7.4)，150mM NaCl，1% NP-40，0.1% SDS. 使用本品裂解得到的蛋白样品，可以用BCA 蛋白浓度测定试剂盒测定蛋白浓度.由于含有较高浓度的去垢剂，不能用Bradford 法测定由本裂解液裂解得到样品的蛋白浓度. 保存条件：4℃ 制备细胞裂解产物： 1、800g 4℃离心5 分钟，收集细胞，估计细胞离心后的体积(PCV，106 cells ≈ 20ul PCV， 107 cells ≈ 100 ul PCV) 2、每50~100ul PCV 加入5 倍体积的蛋白裂解液（250~500ul），冰浴中放置10 分钟，且每隔5 分钟在漩涡混合仪震荡30 秒； 3、12000g 4℃离心10 分钟，将上清转移到新的离心管中，即得细胞总蛋白产物； 4、假如所得蛋白产物较为粘稠，可95℃加热5 分钟，然后迅速冰浴5 分钟，12000g 4℃离心 10 分钟，将上清转移到新的离心管中，即得细胞总蛋白产物. 制备组织裂解产物： 1、取50-100mg 组织在冰上剪成碎片，用预冷的PBS 洗涤2 次，离心弃去PBS； 2、加入0.5-1ml 预冷的蛋白裂解液； 3、4℃用玻璃匀浆器匀浆20-40 次，直到95%的细胞被破碎，然后在冰浴中放置10 分钟，且每隔5 分钟在漩涡混合仪震荡30 秒； 4、12000g 4℃离心10 分钟，将上清转移到新的离心管中，即得组织总蛋白产物； 5、假如所得蛋白产物较为粘稠，可95℃加热5 分钟，然后迅速冰浴5 分钟，12000g 4℃离心 10 分钟，将上清转移到新的离心管中，即得组织总蛋白产物. 6、20%的甘油保存于-70℃或-20℃.
-
赞(5)
回复(0)
热门问答
- 蛋白定量 bca 需要裂解细胞吗
2017-04-30 12:44:07
247
1
- elisa之前要做BCA总蛋白定量吗
2018-11-24 01:16:10
293
0
- BCA蛋白定量和 Bradford法蛋白定量有哪些区别
2017-11-22 09:47:17
414
1
- 如何用酶标仪进行bca蛋白定量
2017-06-03 12:54:21
592
1
- 需要细胞裂解液来破裂细胞，释放DNA吗
2018-01-20 15:45:21
255
1
- 蛋白定量试剂盒适用于所有细胞吗
2016-05-08 00:15:35
338
1
- BCA蛋白定量试剂盒现在都选择哪家的啊？
2011-08-17 04:42:18
398
3
- 为什么在做western之前都要做一遍BCA蛋白定量
2017-11-09 12:18:52
246
1
- 用碧云天的蛋白裂解液提细胞蛋白及bca测浓度时要不要稀释
2018-12-09 13:16:28
344
0
- 急急急急！BCA蛋白定量试剂盒 推荐一下 哪个品牌的好？
2018-12-04 04:57:15
399
0
- 如何用triton-X100 裂解细胞
2017-01-17 18:59:33
389
1
- 如何测评细胞裂解程度
2017-04-27 23:31:33
424
1
- 裂解细胞释放出基因组DNA，使细胞聚集
- 看到一篇文献，说在细胞传代培养中，如果使用的胰酶或其他反应条件太剧烈会使细胞裂解，裂解的细胞会释放出基因组DNA，使细胞聚集。为什么释放的DNA会使细胞聚集？？求大神回答。Inadd... 看到一篇文献，说在细胞传代培养中，如果使用的胰酶或其他反应条件太剧烈会使细胞裂解，裂解的细胞会释放出基因组DNA，使细胞聚集。 为什么释放的DNA会使细胞聚集？？求大神回答。 In addition， lysed cells release genomic DNA， which causes viable cells to clump， making the surviving cells harder to re-plate， and necessitating the addition of DNase. 展开
2015-01-03 22:09:01
435
1
- 细胞蛋白提取需要超声粉碎细胞吗
2016-07-13 10:28:45
507
1
- 细胞裂解缓冲液的主要成分——TRIS-HCL、EDTA
裂解是指细胞分裂或破裂的一种状态，裂解缓冲液是一种有助于打开细胞的溶液，它可以在一些实验分析需要提取细胞内容物时进行使用，例如科学家在从细胞中提取DNA或蛋白质进行分析时就必须使用裂解缓冲液来辅助完成。细胞裂解缓冲液种类有很多，其中较常见的一种是TRIS—HCL缓冲液。
TRIS—HCL可以保持细胞裂解缓冲液的PH值zui佳状态，所以常用它作为裂解缓冲液的主要成分。裂解缓冲液有助于打开细胞，可以对细胞内的物质进行筛选，例如盐、清洁剂、螯合剂和抑zhi剂，以及一些碱性化学品。它不仅可以区分筛选甚至还可以去除这些物质。
裂解液除了生物缓冲剂之外，还包括一种螯合剂和抑zhi剂，例如乙二胺四乙酸（EDTA），因为这种化学物质与带有两个正电荷的金属离子（例如镁和钙）结合，可以使它们不能用于其他反应。许多 DNA 酶（咀嚼 DNA 的蛋白质）和蛋白酶（将其他蛋白质切碎的蛋白质）需要镁离子才能发挥作用，因此通过剥夺这些关键成分，EDTA 有助于降低蛋白酶或 DNA 酶的活性水平。
德晟为专业生产生物缓冲剂和EDTA的厂家，现在生产的生物缓冲剂类产品有TRIS、TRIS-HCL、 HEPES、 TAPS 、MOPS、 CAPS、 BICINE、 EPPS、 PEP等一系列生物缓冲液，目前成立已有十多年，拥有十分丰富的研发生产经验与产品知识，可为客户提供大量技术支持与售后保障。如有需要欢迎随时联系我们！
2021-08-23 16:59:04
883
0
- 磷酸酶YZ剂只在裂解细胞的瞬间起作用吗
2017-03-26 16:01:21
290
1
- 红细胞裂解为什么需要轻轻上下颠倒
2018-12-02 03:20:44
253
0
- 什么情况下需要检查甲胎蛋白定量
2018-12-08 14:42:34
352
0
- 基因组DNA提取中细胞裂解液怎么配制
2016-08-01 16:19:46
657
2
- 基因组DNA提取中细胞裂解液怎么配制
2018-12-08 11:55:06
314
0
10月突出贡献榜
推荐主页
最新话题
沪公网安备 31011502008050号
参与评论
登录后参与评论