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- 花朵朵的哆哆 2017-05-01 00:00:00
- 本品是一种传统的细胞组织快速裂解液.使用本品裂解得到的蛋白样品可以用于常规的 Western、IP 等.主要成分为50mM Tris (pH7.4),150mM NaCl,1% NP-40,0.1% SDS. 使用本品裂解得到的蛋白样品,可以用BCA 蛋白浓度测定试剂盒测定蛋白浓度.由于含有较高浓度的去垢剂,不能用Bradford 法测定由本裂解液裂解得到样品的蛋白浓度. 保存条件:4℃ 制备细胞裂解产物: 1、800g 4℃离心5 分钟,收集细胞,估计细胞离心后的体积(PCV,106 cells ≈ 20ul PCV, 107 cells ≈ 100 ul PCV) 2、每50~100ul PCV 加入5 倍体积的蛋白裂解液(250~500ul),冰浴中放置10 分钟,且每隔5 分钟在漩涡混合仪震荡30 秒; 3、12000g 4℃离心10 分钟,将上清转移到新的离心管中,即得细胞总蛋白产物; 4、假如所得蛋白产物较为粘稠,可95℃加热5 分钟,然后迅速冰浴5 分钟,12000g 4℃离心 10 分钟,将上清转移到新的离心管中,即得细胞总蛋白产物. 制备组织裂解产物: 1、取50-100mg 组织在冰上剪成碎片,用预冷的PBS 洗涤2 次,离心弃去PBS; 2、加入0.5-1ml 预冷的蛋白裂解液; 3、4℃用玻璃匀浆器匀浆20-40 次,直到95%的细胞被破碎,然后在冰浴中放置10 分钟,且每隔5 分钟在漩涡混合仪震荡30 秒; 4、12000g 4℃离心10 分钟,将上清转移到新的离心管中,即得组织总蛋白产物; 5、假如所得蛋白产物较为粘稠,可95℃加热5 分钟,然后迅速冰浴5 分钟,12000g 4℃离心 10 分钟,将上清转移到新的离心管中,即得组织总蛋白产物. 6、20%的甘油保存于-70℃或-20℃.
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裂解是指细胞分裂或破裂的一种状态,裂解缓冲液是一种有助于打开细胞的溶液,它可以在一些实验分析需要提取细胞内容物时进行使用,例如科学家在从细胞中提取DNA或蛋白质进行分析时就必须使用裂解缓冲液来辅助完成。细胞裂解缓冲液种类有很多,其中较常见的一种是TRIS—HCL缓冲液。
TRIS—HCL可以保持细胞裂解缓冲液的PH值zui佳状态,所以常用它作为裂解缓冲液的主要成分。裂解缓冲液有助于打开细胞,可以对细胞内的物质进行筛选,例如盐、清洁剂、螯合剂和抑zhi剂,以及一些碱性化学品。它不仅可以区分筛选甚至还可以去除这些物质。
裂解液除了生物缓冲剂之外,还包括一种螯合剂和抑zhi剂,例如乙二胺四乙酸(EDTA),因为这种化学物质与带有两个正电荷的金属离子(例如镁和钙)结合,可以使它们不能用于其他反应。许多 DNA 酶(咀嚼 DNA 的蛋白质)和蛋白酶(将其他蛋白质切碎的蛋白质)需要镁离子才能发挥作用,因此通过剥夺这些关键成分,EDTA 有助于降低蛋白酶或 DNA 酶的活性水平。
德晟为专业生产生物缓冲剂和EDTA的厂家,现在生产的生物缓冲剂类产品有TRIS、TRIS-HCL、 HEPES、 TAPS 、MOPS、 CAPS、 BICINE、 EPPS、 PEP等一系列生物缓冲液,目前成立已有十多年,拥有十分丰富的研发生产经验与产品知识,可为客户提供大量技术支持与售后保障。如有需要欢迎随时联系我们!
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