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  xianfo19910312 2014-10-07 00:00:00

  乳酸菌饮料中乳酸菌的微生物学检验 1 主题内容与适用范围 本标准规定了乳酸菌饮料中乳酸菌检验的技术要求。 本标准适用于以鲜乳、乳粉或辅以大豆等为原料，经乳酸菌发酵加工制成的具有相应风味的活性乳酸菌饮料。 2 引用标准 GB 4789.28 食品卫生微生物学检验 染色法、培养基和试剂 3 术语 乳酸菌：一群能分解葡萄糖或乳糖产生乳酸，需氧和兼性厌氧，多数无动力，过氧化氢酶阴性，革兰氏阳性的无芽胞杆菌和球菌。 乳酸菌菌落总数：检样在一定条件下培养后，所得1mL检样中所含乳酸菌菌落的总数。 4 设备和材料 4.1 温箱：36±1℃。 4.2 冰箱：0～4℃。 4.3 恒温水浴：46±1℃。 4.4 电炉：可调式。 4.5 吸管：容量为1，10和25mL。 4.6 广口瓶或三角瓶：容量为500mL。 4.7 平皿：直径为9cm。 4.8 试管：18×180mm。 4.9 显微镜。 5 培养基和试剂 5.1 改良TJA培养基(改良番茄汁琼脂培养基)。 5.2 改良MC培养基(Modified Chalmers培养基)。 5.3 0.1%美兰牛乳培养基。 5.4 6.5%氯化钠肉汤。 5.5 pH9.6葡萄糖肉汤。 5.6 40%胆汁肉汤。 5.7 淀粉水解培养基。 5.8 精氨酸水解培养基。 5.9 乳酸杆菌糖发酵管。 5.10 七叶苷培养基。 5.11 革兰氏染色液：按GB 4789.28规定执行。 5.12 3%过氧化氢溶液：按GB 4789.28规定执行。 5.13 蛋白胨水、靛基质试剂：按GB 4789.28规定执行。 5.14 明胶培养基：按GB 4789.28规定执行。 5.15 硝酸盐培养基、硝酸盐试剂：按GB 4789.28规定执行。 5.16 生理盐水：定量分装于三角瓶和试剂管内灭菌。 6 乳酸菌菌落总数的测定 6.1 检验程序 乳酸菌菌落总数检验程序如下： （略） 6.2 操作步骤 6.2.1 以无菌操作将经过充分摇匀的检样25mL(或25g)放入含有225mL灭菌生理盐水的灭菌广口瓶内作成1∶10的均匀稀释液。 6.2.2 用1mL灭菌吸管吸取1∶10稀释液1mL，沿管壁徐徐注入含有9mL灭菌生理盐水的试管内(注意吸管不要触及管内稀释液)。 6.2.3 另取1mL灭菌吸管，按上述操作顺序，作10倍递增稀释液，如此每递增一次，即换用1支1mL灭菌吸管。 6.2.4 选择2～3个以上适宜稀释度，分别在作10倍递增稀释的同时，即以吸取该稀释度的吸管移1mL稀释液于灭菌平皿内，每个稀释度作两个平皿。 6.2.5 稀释液移入平皿后，应及时将冷至50℃的乳酸菌计数培养基(改良TJA或改良MC)注入平皿约15mL，并转动平皿使混合均匀。同时将乳酸菌计数培养基倾入加有1mL稀释液检样用的灭菌生理盐水的灭菌平皿内作空白对照，以上整个操作自培养物加入培养皿开始至接种结束须在20min内完成。 6.2.6 待琼脂凝固后，翻转平板，置36±1℃温箱内培养72±3h取出，观察乳酸菌菌落特征(见表1)，选取菌落数在30～300之间的平板进行计数。计算后，随机挑取5个菌落数进行革兰氏染色，显微镜检查并做过氧化氢酶试验。革兰氏阳性，过氧化氢酶阴性，无芽胞的球菌或杆菌可定为乳酸菌。根据证实为乳酸菌菌落计算出该皿内的乳酸菌数，然后乘其稀释倍数即得每毫升样品中乳酸菌数。例如，检样10－4的稀释液在改良TJA琼脂平板上，生成的可疑菌落为35个，取5个鉴定，证实为乳酸菌的是4个，则1mL检样中乳酸菌数为： 6.3 乳酸菌在改良TJA和改良MC培养基上菌落生长形态特征见表1。 表1 乳酸菌在不同培养基上菌落特征 （表略） 7 乳酸菌的鉴定 对上述分离到的乳酸菌需进行菌种鉴定时，则作以下试验。 7.1 菌种制备：自平板上挑取菌落，接种于改良TJA或改良MC琼脂斜面，于36±1℃，24～48h培养，刮取菌苔，分别进行下列试验。 7.2 乳酸杆菌鉴定试验：极少见还原硝酸盐，不液化明胶，不产生靛基质和硫化氢。 7.3 常见乳杆菌属内种的碳水化合物反应，见表2。 7.4 产乳酸的链球菌的鉴别试验，见表3。 表2 常见乳杆菌属内种的碳水化合物反应 （表略） 表3 乳酸的链球菌的鉴别表 （表略） 参考资料： http://www.hopebiol.com/asphtml/refere85.htm

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