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        色谱法是一种分离混合物中各组分的分析技术。色谱柱是色谱中使用的仪器的一部分。使用柱的五种色谱方法是气相色谱（GC），液相色谱（LC），离子交换色谱（IEC），尺寸排阻色谱（SEC）和手性色谱。色谱的基本原理可以应用于所有五种方法，今天我们分享其中两种方法——气相色谱柱和GX液相色谱柱。

        气相色谱柱

        在气相色谱中，流动相是气体。气相色谱柱的长度通常在1至100米之间。气相色谱法（GC）：液相固定相结合或吸附到毛细管柱的表面上，或结合到柱内填充的固体载体上。匹配分析物和固定相的极性两者具有相似的极性，固定相的厚度在0.1到8 µm之间，而厚度越厚，分析物的挥发性就越大。

        液相色谱柱

        GX液相色谱（HPLC）是液相色谱的一种。液相色谱柱共有三种基本类型：液-液，液-固和离子交换。液-液色谱柱不那么受欢迎，因为它们的稳定性有限且不方便。在液-固色谱柱中，固定相为固体，分析物吸收到固定相上，从而分析混合物的成分。通常，HPLC在分析柱之前有一个保护柱，以保护并延长分析柱的使用寿命。保护柱的作用是去除色谱柱上不可逆的颗粒物、污染物和分子等。

        最常见的HPLC色谱柱由不锈钢制成，也可以由厚玻璃，聚合物（例如聚醚乙酮），不锈钢和玻璃的组合或不锈钢和聚合物的组合制成。采用不锈钢材质的好处有很多，比如不锈钢相较于玻璃这种材质，更加的耐腐蚀，耐高压，耐磨损，使用寿命更长，这样也能很好的降低使用成本。典型的HPLC分析柱长3至25 cm，直径1至5 mm。与GC色谱柱不同，这些色谱柱通常是直的。填充柱的颗粒的典型直径在3至5 µm之间。当色谱柱内部堆积的颗粒直径减小时，液相色谱柱的效率将会提高。

        峰或峰展宽会导致色谱柱效率降低。理想的情况将是尖锐的峰被解决。物质在色谱柱中停留的时间越长，将导致峰变宽。加长色谱柱是改善色谱柱中不同物质分离的一种方法。恒谱生色谱柱高流速，低背压，可累加柱效，高柱效、分离度佳，平衡时间短，缩短分析时间，节约溶剂。恒谱生色谱柱管有多种规格尺寸，比如4.6*50、4.6*100、4.6*150、4.6*250等，0.1μ、0.4μ的光洁度可选。

         色谱柱通常需要保持恒温，以保持效率。塔板高度和理论塔板数决定了色谱柱的效率。提GX率将是增加板的数量并减小板的高度。

        板数可以通过以下公式确定：

        ñ=大号/ ħ（1）(1)N=L/H

       其中L是列的长度，H是每个板的高度。

        深圳市恒谱生科学仪器有限公司是致力于研发制造高质量色谱耗材的高科技生产厂家，我们在无气泡高净化能力的溶剂滤头、UHPLC超高压在线过滤器、较少死体积色谱保护柱、液相色谱柱、鬼峰捕集柱、0.1μ高光内表粗糙度柱管等领域具有多年的生产经验和较强大的制造能力。欢迎前来咨询了解！

1.1.在RP-HPLC应用之初，峰拖尾就是Z常见的峰形问题（拖尾峰是RP-HPLC自出现以来Z普遍的峰形问题）。

大多数峰拖尾是由于柱内硅胶颗粒表面上的酸性或离子化硅烷醇基团之间相互作用而导致的。

低纯度硅胶（通常称为“A型”或酸性硅胶）具有高含量的酸性硅烷醇（-Si-OH）基团，其富含的金属杂质（特别是铁和铝）可提供阳离子交换位点，进一步促使这些基团电离成-Si-O-。

这些材料的pKa在pH4-5区域中，这意味着在pH>6时，大部分硅烷醇基团会被电离（已离子化）。

通过提高纯度并降低硅胶的酸度可获得更高纯度的硅胶颗粒（“B型”），并且自引入（其出现）以来，这些硅胶填料的纯度已经得到了改善（有所提高）。

高纯度硅胶的pKa> 8，因此对于大多数色谱柱，在2 <pH <8的稳定范围内仅有微量的硅烷醇被电离。
碱性化合物极易受到硅醇拖尾（影响而导致拖尾），并且由于大多数样品分子含有碱性氮官能团，所以没有多少（很少有）化合物可以完全对硅醇交互作用免疫（不受硅醇基的影响）。

图1显示了硅醇拖尾的情况。甲苯是一种中性化合物，不会产生硅醇拖尾现象，但图1中剩余（其他）的分析物为强碱性药物。

流动相pH值是6，这是影响分离的另一个因素，它会使纯度较低的硅胶色谱柱出现硅烷醇离子化现象（对于该分析更大的挑战在于流动相pH=6，这一条件下低纯度硅胶色谱柱的硅醇基已离子化）。

低纯度硅胶（“A型”硅胶）（图1a）会与碱发生强烈的相互作用，致使分析物不会从柱上洗脱下来（以至不能从色谱柱中洗脱这些分析物）。

早期的B型材料（图1b）显着改善了峰形，尽管它们均出现严重拖尾现象，但样品中的所有峰形均可见（可以看到样品中所有分析物出峰）。

通过进一步改善（提高）硅胶纯度（图1c），可使峰拖尾降低至可接受的水平。

只要在RP-HPLC中使用含硅烷醇的硅胶，就不可能消除峰拖尾现象。

虽然使用高纯度硅胶色谱柱是改善硅烷醇拖尾的Z佳办法，但仍存在其它解决拖尾现象的技术（技术可以减少拖尾）。

近年来，多采用将三乙胺（TEA）（一种小（低）分子量碱）加入到流动相（例如25mM）中的方法改善峰拖尾。

TEA是酸性硅烷醇基团的有力竞争者，但对于当今的高纯度硅胶，几乎无需或很少使用TEA。

图1：

图1. 硅胶纯度和峰拖尾(a) 低-、(b) 中-、和(c) 高-纯度硅胶。
色谱柱：250x4.6mm, 5m；

流动相：80:20 MeOH/25mM KH2PO4(pH 6.0)；
流量：1.0 mL/min；

成分：1, 去甲痳黄碱；2, 去甲替林；3, 甲苯；4, 丙咪嗪；5, 阿米替林。

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这可能会导致色谱柱连接不良，进而由于向系统引入了额外的柱体积（死体积）表现出非预期的峰拖尾。

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