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脑立体定位手术是一种用于微创操作大脑的方法，通过脑图谱和三维坐标系可以准确地定位大脑内部的小目标，并对其执行一些操作，例如消融（切除），活检，病变，注射，刺激，植入等。

//神经科学家面临的难题

在20世纪以前，神经外科医生在进行脑部手术时面临着一个重要问题，脑部病变的区域若位置较深，需要先将大脑皮层切开，手术创伤面积大，可能损伤重要功能区域，并且往往不能精确找到目标位点。

//DY台脑立体定位设备问世

1908年，英国两位科学家Victor Horsley和Robert H. Clarke首先发明了立体定位的方法（图1），这种定位的方法成功运用了笛卡尔坐标系统，即通过与三个平面的关系来定义空间中的一个点，每个平面均与另两个垂直，并且所有的平面可相交于一个公共点（图2）。

图片来源于《Textbook of Stereotactic and Functional Neurosurgery》

人类头骨和脑之间的空间关系高度可变，因此很难将Horsley-Clarke仪器用于人脑上，然而，通过脑部X射线照相术，可以使用大脑内部的参考点，而不是颅骨表面标志。人类的DY台立体定向设备使用松果体和门罗孔作为参考点。后来，其他结构，如前连合和后连合，成为最常用的脑内参考点。

在1947年至1949年之间，两名美国神经外科医生Ernest A. Spiegel和Henry T. Wycis，以及瑞典神经外科医生Lars Leksell使用这种方法开发了DY台用于人体脑部手术的立体定位设备。1976年，多伦多大学和多伦多综合医院共同开发了一种使用计算机辅助成像的系统，以帮助使目标的位置更加精确。随着定位方法的不断发展，目前采用计算机断层扫描、磁共振成像和立体定向定位等方式结合来引导手术，定位手术也越来越JZ。

//瑞沃德推出首台脑立体定位仪获科研专家大力支持

瑞沃德成立之初，就致力于动物脑立体定位仪的研发，2004年便推出了DY台标准型脑立体定位仪（图3），其精度达到100μm，后经过不断的改良，精度达到10μm（图4）同时用户在数显屏上可直接读取坐标，使用更加方便GX。

作为公司早期开发的产品之一，瑞沃德脑立体定位仪的质量已经达到国外同类产品水平，并获得ZG科学院昆明动物研究所徐林老师的大力支持。在购买和使用瑞沃德首台脑立体定位仪的过程中，徐林老师为公司产品的优化提供了很多宝贵的建议。

在推出首台脑立体定位仪之后，瑞沃德陆续推出了一系列不同款式的定位仪，如轻便型、滑轨型、电磁兼容型及大动物型，满足各类动物脑立体定位手术的需求（图5），受到更多用户的高度肯定。2007年，轻便型脑立体定位仪上市，适配器直接固定至底座上，不受经典的“U”型支架的束缚，动物头部操作空间更大；2008年，推出滑轨型脑立体定位仪，AP方向（Y轴）设计为滑轨，前后位移距离200mm，满足了啮齿类动物脊髓手术操作的需求；2009年相继推出了MRI型和大动物型脑立体定位仪，MRI型满足了电磁环境下动物脑立体定位需求，大动物型定位仪可实现大动物如猪、狗、猴等大动物脑部的定位。

//坚守匠心精神 打造极 致产品

在行业内，脑立体定位仪普遍存在着操作臂旋转手感偏重、操作臂松紧不一致、长时间使用后产生回旋（gap）的问题。而我们没有止步不前，秉持工匠精神，彻底解决了产品操作臂回旋的问题，也改善了丝杆手感偏重问题，同时，修复产品操作臂松紧不一致的情况，进一步提升了产品的精度。

2020年，又经过不断的技术突破，瑞沃德全新推出了两款脑立体定位仪，全自动脑立体定位仪（图6）和旋转型数显脑立体定位仪（图7）。全自动脑立体定位仪通过电机驱动三维操作臂的运行，精度可高达1μm，对于较小核团的定位更加JZ；软件内置脑图谱，可实时观察探针相对于脑图谱的位置，可更加JZ直观地进行脑立体定位手术；三大自动化程序（自动开颅、组织移除及多位点注射程序）大大减少了人为操作的误差及损伤。

旋转型数显脑立体定位仪专为GXJZ调节颅骨水平而设计，旋转适配器可以将颅骨左右摆动±30°，上下摆动±10°，通过旋转即可调节颅骨水平，其配件水平校准器用来指示颅骨两点的高度差（精度0.01mm），ZX放大镜帮助将动物的Bregma点定位至旋转适配器旋转轴的交点，该点在调节颅骨水平时坐标不变，因此无需重复定Bregma点，节省大量调平的时间。

目前，瑞沃德定位仪已经助力海内外80多个国家和地区的科研人员发表文献2000+篇，其中包含Nature、Cell、Science等多篇高分文献。

一直以来，瑞沃德始终坚持以客户需求为导向，秉承为“生命品质的提升贡献智慧和力量”的发展理念，以脑立体定位仪为起点，同ZG神经科学事业一起成长，紧随前沿科学技术，不断加强研发投入，实现产品创新、技术创新、服务创新，至今已构成完整的神经科学解决方案，涵盖动物手术造模，行为学检测与评估，动物活体成像，神经信号检测与调控，细胞分子检测等多个方向，全面助力ZG神经科学的发展。未来，瑞沃德也将持续用匠心精神为客户提供更加优质的解决方案和服务。

答题有奖

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      恶臭是各种气味（异味）的总称，大气、水、废弃物中的异味通过空气介质，作用于人的嗅觉思维而被感知；表征它不仅要靠分析数据，还要通过人们的感知思维进行分析和判断。根据国内外有关论述，可将恶臭定义为：凡是能损害人类生活环境、产生令人难以忍受的气味或使人产生不愉快感觉的气体通称恶臭。 

  恶臭物质的来源和种类

恶臭造成的影响

对社会的影响：恶化环境引发投诉、浪费土地资源、破坏生态环境
对经济的影响：降低工作效率、减少区域投资、减少人流量和购买力、影响旅游区经济效益
对居民的影响：心情不悦，情绪失控，健康伤害

恶臭监测面对的困难

 恶臭监测得力助手

♦ 便携/车载式PEN型恶臭监测仪

 在线/便携OLFOSENSE型恶臭监测系统

 ♦在线/便携多组分气体监测仪

监测过程

       凡在细胞培养环境中混入对细胞生长以及生存有害的成分以及造成细胞不纯的异物都应视为污染。

       一般情况下，细胞污染根据污染源的不同，可分为物理污染、化学污染和生物污染。

物理污染

       物理污染是细胞培养过程中Z容易被实验人员忽视的一种污染，往往是由一些放射性物质、辐射、或者是温度和其他物理环境的变化引发的。

       这些物理性的变化会改变细胞培养体系中的一些生化成分，进而影响细胞的生长，导致细胞生长受YZ甚至死亡，或者细胞的代谢发生变化。

       通过合理设计细胞房布局和规范实验操作可以大大降低物理污染的概率。

       一些会引发机械震动的设备如涡旋振动仪、离心机等，建议不要放在二氧化碳培养箱附近。常用试剂按照存放要求（4℃或者-20℃的温度条件下，某些特殊试剂有避光的要求）置于固定的位置，并且避免周围有同位素或者其他放射性物质的存在。

       操作上，培养箱在使用过程中，尽量避免频繁开关门以免造成二氧化碳浓度和温度的长时间或者大幅度的波动。处理细胞（如进行传代操作）时，也不宜长时间让细胞处于室温状态，影响其生长。同时，用于细胞培养的培养基、缓冲液、胎牛血清等，一般情况下需保证温度在37℃左右时再用于细胞，以免温度过低损伤细胞。

化学污染

       化学污染往往存在于培养环境的各种介质中，造成细胞培养过程中常见的污染之一。

       培养介质中的杂质、水、试剂、耗材、以及常用的玻璃器皿等都可能造成化学污染。

       在细胞培养过程Z常使用到的水（包括蒸馏水、双蒸水、超纯水等），或多或少都会存在一些杂质。即使是去除了金属离子、内毒素等的超纯水，也会随着放置时间纯净度会下降，在实验室中尽量需要现配现用。另外，大部分自行配制的试剂溶液，依据性质不同需要通过过滤或者高温灭菌的方式除去其中的杂质。

       在细胞培养过程中，牛血清是必不可少的一个天然添加物。但由于血液物质的成分复杂性，导致每一批次的血清制品都会有略微的差别。尽可能的使用同一批次的血清产品，是保证减小化学化境变化的前提。

       一些常用的玻璃器皿，清洗不到位（建议多层级清洗后再用蒸馏水润洗）也会导致一些清洗剂的残留，进而影响其盛放试剂的纯度。

生物污染

       生物污染是细胞培养新手Z容易遇到的一种污染情况。通常情况下科研人员普遍认知的污染是细菌污染，其实生物污染还包含真菌、病毒、支原体、酵母等其他微生物以及不同细胞之间的交叉污染。

酵母污染

（图源：UNC Lineberger Comprehensive Cancer Center）

       实验室常见的细菌通常是大肠杆菌、葡萄球菌等。细菌污染比较容易察觉，细菌的快速增殖会产生大量的酸性代谢物质，导致培养基迅速变黄，并有肉眼可见的浑浊现象。在细胞培养过程中，如无特殊要求，在培养液中加入一定浓度的抗生素是有助于抵御细菌污染的。

细菌污染

（图源：UNC Lineberger Comprehensive Cancer Center）

       相较而下，真菌的生长就会缓慢许多，其对细胞培养体系的影响也相对较慢。一般情况下，实验室常见的产生污染的真菌多为白色念珠菌、酵母菌、黑霉菌等。这些菌株在污染后期往往会形成白色或者是黄色的肉眼可见的漂浮物，在高倍显微镜下也可以看到明显的菌丝。

真菌污染

（图源：UNC Lineberger Comprehensive Cancer Center）

       而对于病毒和支原体这种污染情况，则更难在污染初期被研究人员察觉，并且会在潜移默化中对细胞的生长增殖产生一定的危害与影响。

支原体污染

（图源：Contamination of Tissue Cultures by Mycoplasmas）

       另外，细胞污染也是一种生物污染，如在多个细胞系培养的过程中，某细胞混入了另一种细胞的培养体系，导致不纯。这种情况通常是实验操作人员进行同时对多种细胞传代或者处理时未更换移液枪枪头或是共用移液管等造成的。严格标准化的操作流程可以避免这种情况的发生。

       总之，生物污染的发生和化学污染类似，通常是多因素的。通常情况下，保持实验人员个人的卫生与正确的操作方式、管理好细胞房的布局与良好的通风体系、严格控制所用关键试剂与耗材的来源与品质，是降低生物污染的先要。如在某些疯牛病疫区产出的胎牛血清，其血源有很大风险携带疯牛病毒、口蹄疫病毒等影响细胞生长的病毒。同时，某些品质不好的血清还会带来黑胶虫污染的困扰。选择海关允许合法进口的并且有严格质检的牛血清产品，就能从根源上杜绝胎牛血清带来污染的可能性。

       瑞沃德AlphaCell特级胎牛血清，其血源来自新西兰和澳大利亚的天然纯净牧场内严格编码的牧牛。采用世界ling先的心脏穿刺技术采集原料血，通过低温离心、多次过滤，并于超洁净车间进行无菌灌装后，再冷链运输至国内，全程严格监管，有效杜绝污染。

近年来组织透明化方法发展得如火如荼，目前组织透明化方法有油性，基于水凝胶和水性的组织透明化方法。其中油性组织透明化方法主要有BABB, 3DISCO, uDISCO，FDISCO和 PEGASOS等，基于水凝胶的透明化方法有CLARITY和SHIELD，水性组织透明化方法有CLearT/CLearT2,SeeDB, FRUIT, Scale和CUBIC等方法。乱花渐欲迷人眼，面对种类如此繁多的透明化方法，我们又该如何选择呢？那么就让我们一起来看看每种透明化方法有什么优缺点吧！

1. 油性组织透明化方法

油性组织透明化技术主要是应用含有高折射率介质的光学透明剂取代组织中水分和脂质来平衡组织折射率，使组织达到光学透明。油性组织透明化方法具有较强的透明化效果，但是组织中的荧光蛋白容易被破坏，信号保存度低。
BABB透明化方法采用梯度浓度的乙醇对生物样本进行脱水，随后用BABB试剂匹配组织的折射率。该方法是一种快速且透明性好的生物组织透明化方法，能够充分的透明胚胎和幼鼠的脑，但是乙醇脱水会导致内源性荧光蛋白淬灭，因而限制了该方法在含转基因荧光蛋白的组织样品中使用。为了解决这一问题，采用四氢呋喃代替乙醇脱水，同时应用二苄醚（DBE）替代BABB提高透明效率，开发出了基于四氢呋喃和DBE的新型透明化方法3DISCO。3DISCO能够快速透明多种器官组织，包括小鼠大脑，肺脏，肿瘤及人类胚胎等，并有效延长了荧光蛋白的表达时间。虽然3DISCO能够保护内源性荧光蛋白，但是DBE的降解产物如过氧化物或醛类物质，会对荧光蛋白产生有害干扰，使荧光蛋白信号仅能维持几天。为了更有效的保存内源性荧光蛋白，一种基于二苯醚（DPE）的透明化技术uDISCO,可以GX透明啮齿类动物及临床人类标本，有效保存荧光蛋白信号长达数月，但是对于绿色荧光蛋白表达水平较低的样品，该方法保存荧光蛋白信号的能力并不理想。a-uDISCO是在uDISCO的基础上发展出来的，通过调整PH值从而提高了样本的信号强度和稳定性。但是uDISCO和a-uDISCO对色素含量较高及硬组织的透明效果欠佳。为了提高透明效果，一种基于聚乙二醇(PEG)的新型全组织透明技术PEGASOS被开发，该方法脱钙，脱色，脱水，脱脂等优化处理，首次实现了对动物软、硬组织的同时透明化。虽然PEGASOS具有较好的透明化效果，也适用于生物体不同类型的组织。然而此类方法也存在透明试剂毒性较大，易溶解物镜结构中的粘合剂、操作步骤繁琐，组织脱水收缩等不足之处。
油性组织透明化方法能够快速GX透明多种样本组织，但是油性试剂透明会导致样本皱缩，对组织结构和蛋白具有潜在的破坏性，且所使用试剂具有一定的毒性和腐蚀性，限制了油性透明化方法的广泛应用。

2. 水性组织透明化方法

由于油性透明化存在的诸多缺点和局限性导致水性透明化方法应运而生。水性透明化与油性透明化方法的较大的区别在于选择的生化试剂是否有强亲水性。由于组织中荧光蛋白分子上带有亲水基团，与油性溶剂相比亲水溶剂更有利于荧光蛋白信号的保存。更适用于自带荧光的组织样本的透明化。亲水性试剂透明主要包括：单纯浸泡透明和高水化脱脂透明。

浸泡型透明化技术是将样品浸泡在高折射率溶液中利用渗透压使组织逐渐透明化，该方法不去除脂质，利用高折射率溶液替换组织内外的液体，以平衡折射率，浸泡型透明化方法常适用于较小样本的透明化处理。ClearT是基于甲酰胺的浸泡型透明化方法，该方法透明速度快，成像效果好，但会使组织略微膨胀，且会使样本荧光信号淬灭。PEG可以稳定蛋白质构象，继而发展了可保留荧光蛋白的ClearT2的透明化技术，但该方法透明度比clearT低，透明化能力受限。SeeDB技术以果糖和硫代甘油为主要成分。能在几天内将样本透明化，且体积变化小，并可以与亲脂性染料兼容。但该方法因果糖黏度大导致在组织内的渗透性较低。由于SeeDB黏度极高，在SeeDB基础上衍生了FRUIT透明化方法，该方法选择尿素作为试剂中另一成分，降低了果糖黏度，大大提高试剂流动性和渗透性，加速了试剂在组织中的扩散速率。虽然浸泡型透明化操作比较简单方便，但浸泡型透明化方法不能去除脂质，因此通过该方法处理的样本透明度有限。

去除样本的脂质可以显著提高透明化的效率和质量，胺基醇类和去垢剂类物质如SDS、Triton X-100可以有效去除脂类物质。水化法通过在透明化过程中去除脂质后，利用水化作用降低样本折射率进而实现组织透明化。由于尿素具有很强的水化能力，Scale透明化技术就是基于尿素水化作用的一种透明化方法，该方法可保留荧光信号，但该方法操作时间较长，且易导致组织破碎。CUBIC在Scale技术之上添加了胺基醇，可以清除血红素使组织脱色，提高透明化水平。UbasM也是一种基于尿素，葡甲胺和糖类的透明化方法，透明速度快，荧光信号保护较好且膜脂完整的一种透明化方法，可对厘米尺度的样品进行透明和三维成像。

3. 水凝胶组织透明化方法

去垢剂可以GX的去除样本中的脂类物质，但是高浓度的去垢剂处理样本可能会使样本发生形变。通过将样本包埋在水凝胶中，使水凝胶与样本中的蛋白质和核酸分子形成共价连接便可固定和保护细胞结构，再将样本置于透明化试剂中即可避免样本发生这种形变。CLARITY透明化方法利用凝胶包埋样本，并利用电场力去除样本的脂质从而使样本快速透明。SHIELD透明化方法通过环氧化合物P3PE固定组织实现蛋白的保护，之后使用SDS进行被动或主动除脂。

油性透明化方法透明的样本透明度高，速度快，能适用于多种组织和器官。但是油性方法所使用的试剂大多毒性较强，并且容易淬灭内源性荧光蛋白的信号，不能和细胞膜上亲脂染料相兼容，样本会有明显收缩，组织或器官内部精确三维结构丢失。水性透明化方法虽然可以部分解决荧光蛋白易淬灭的问题，但是也存在透明时间长，透明能力低的缺点。水凝胶透明化方法操作过程复杂，且需要一定的设备。

面对种类如此繁多的透明化方法，我们该如何进行选择呢？

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