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如何提取和研究血液DNA,RNA与蛋白

屁股桃小仙女 2017-06-16 03:37:14 478  浏览
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  • a520131400701 2017-06-17 00:00:00
    如何选择Z佳的全血DNA、RNA提取方法? 从全血中提取DNA和RNA应该说是Z基本的工作了,提取的DNA和RNA质量的好坏直接影响了下游的实验和分析,可供选择的方法非常多,乱花渐欲迷人眼,如何选择Z适合的方法,成了很多人实验开始前Z难以抉择的事情。我们从两个方面,层层剥茧,分析Z佳的实验方法。 1、 全血的采集保存和DNA的提取 I. 用含抗凝剂的采血管进行采血,抗凝剂一般有EDTA和肝素,EDTA更好一些,不会影响下游的反应,如果没有采血管,也可以自己添加抗凝剂EDTA,提前准备0.04M的EDTA溶液,每5ml的血液中加入0.4ml配好的EDTA溶液,颠倒混匀即可。保存于-20℃至-80℃,一般2-3年内均可以提取,保存时间越短,提取的质量越高,Z好在2个月内提取。 II. DNA提取方法的选择:全血提取试剂盒一般有离心柱和溶液型两种(比如Qiagen、Promega、Bioteke;摒弃酚氯仿手提的方法,时间长毒性大),原理及步骤基本相同。虽然各公司推出了N多型号,让人不知如何去选择,但从原理和操作步骤看,基本就是离心柱和溶液型两种。一般来说,离心柱(DP1801)的提取纯度高一些,但是处理量小(0.1-1ml)、得率略低;溶液型(DP2101或DP2201)的提取量大(1-10ml)得率也高于离心柱。医院的血液标本一般在2ml以上,一般选择溶液型的方法提取.在说到国产和进口差别的时候,很多人以为进口一定比国产的好,我们觉得没有Z好,只有更好!在不断的进行试验优化之后,全血基因组DNA提取试剂盒DP2101或DP2201开创了第三代技术,不需要蛋白酶K消化,进口的都是要借助蛋白酶K的啊!DP2101或DP2201减少了蛋白酶K现配现用的麻烦和消化的时间,而且提取量和稳定性更好。 III. 非抗凝血(凝固血)能否提取?答案是肯定的,而且一点都不麻烦,提取效果和抗凝血没有差别!在你找遍了进口的所有品牌都找不到后,回过头来您才发现原来他就在身边,百泰克的凝固血基因组DNA提取试剂盒已经有很多忠实的用户。 2、 全血RNA如何提取 I. 全血RNA提取过程哪些是RNA降解的因素? 全血中RNA酶是非常丰富的,RNA在没有保护的状态下很容易降解!哪些是状态RNA不受保护呢,比如红细胞裂解液裂解红细胞的过程,红细胞裂解液是低浓度的平衡盐溶液,没有YZRNase的成份,这时候RNA不受保护;DNA酶消化的时候RNA也不受保护,这个时候也没有YZRNase的成份。 II. 什么样的提取方法更好? 我们在选择方法的时候要倾向于对RNA全程有保护的方法!一般的方法都是先用红细胞裂解液裂解红细胞,然后从白细胞提取核酸,还要经过DNA酶的消化去除DNA,这种并不是Z好的方法,过程中有很多RNA降解的因素。所以直接裂解法是Z好的方法,将采集的血液迅速加入3倍体积的裂解液RLS——RP4001血液(液体样本)总RNA快速提取试剂盒(离心柱型)的裂解液,迅速颠倒混匀。裂解液RLS含有强烈的蛋白变性剂,能迅速变性蛋白,是RNase变性,不能对RNA降解。裂解后的混合液还可以用来运输,以避免RNA降解,这个方法成为博奥生物制作表达谱芯片RNA运输和提取

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高氯酸提取DNA和RNA
有一篇文献中使用高氯酸同时提取DNA和RNA,具体步骤如下:取2mL0.5% 组织匀浆液,加入 1mL0.6mol/L冷高氯酸,冰上放置10min后500g离心10min, 弃上清,沉淀物用2mL0.2mol/L高氯酸洗涤两次,两次洗涤后都以500g离心l0min,弃上清,将沉淀物溶解于2mL0.3mol/L... 有一篇文献中使用高氯酸同时提取DNA和RNA,具体步骤如下:取2mL0.5% 组织匀浆液,加入 1mL0.6mol/L冷高氯酸,冰上放置10min后500g离心10min, 弃上清,沉淀物用2mL0.2mol/L高氯酸洗涤两次,两次洗涤后都以500g离心l0min,弃上清,将沉淀物溶解于2mL0.3mol/L的KOH,37℃条件下培养60min,然后加入1mL1.2mol/L高氯酸,冰上放置10min,500g离心15min,收集上清液(I),沉淀物用2mL0.2mol/L高氯酸溶解后再离心,再收集上清液(II),集中上清液(I和II)用于RNA浓度的测定,沉淀物用于测定DNA的浓度。 不知各位有没有用过这种方法,高氯酸的作用是什么?请赐教! 展开
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DNA、RNA和蛋白质提取和纯化,如何提供全面保护?
  DNA、RNA和蛋白质分析是许多研究中的关键步骤,其中高质量的样品是实验里是很关键的一步。但是,以Z佳条件下提取DNA、RNA、蛋白质,并保证其原始状态的保存在日常实验中往往非常。
  比如,蛋白提取过程中,样本在研磨之前、研磨中和研磨后均面临多种被降解的危险。蛋白酶活性和热量是显着的危险因素,需要特别注意。
  众所周知,皮肤组织是很难处理的样本,大小鼠皮肤组织提取DNA、RNA是目前各高校实验室的一项难题。大鼠的后爪皮被认为比背部皮肤更厚,因此完全研磨这些组织是十分具有挑战性的。

  别怕,净信有款冷冻研磨仪完全能解决以上所提到的问题。

  它能将将任何来源(包括土壤、植物和动物的组织/器官、细菌、酵母、真菌、孢子、古生物标本等)原始DNA、RNA和蛋白质进行提取和纯化,低温研磨样品能够有效YZ核酸降解、保留蛋白质活性,减少样品的挥发,更完整保留样品成分含量。药物有效成分的异构体之间常常存在重大区别,低温研磨可预防分子因压力和受热而降解。对于高韧塑料、高强塑料、树脂等难研磨样品,低温研磨可大大提高研磨效果及效率。在国内很多高校和科研机构都获得不错的口碑!
  俗话说得好,要提高实验效率,装备得选好啊!

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  性能特点:
  1.温度可自定义调节:

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  2.样本处理通量高,研磨效果好:
  一次处理多达192个样品,1.15秒内处理量可同时处理64个样品,适用12位和24位的液氮冷冻适配器,研磨效果好,出料粒度5um
  3.操作简便,重复性稳定
  内置程序控制器,可对参数进行设置;可存储十组实验数据,根据不同实验样本,设置有动物心脏脾肺肾、骨骼、皮肤、毛发模式,相同研磨程序获得相同效果
  4.无交叉污染:
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  具备安全罩及安全锁,无需涉及液氮操作,安全性高;仪器运行过程中,噪音小于55dB,不会对其它实验或仪器产生干扰。
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