液质联用仪方法开发--旧的色谱柱有峰，同型号新的色谱柱不出峰是为啥？

峰形问题                                   
                                                                         

气相色谱仪在进样后检测信号没有变化，不出峰时该如何应对呢？

　　1、降低色谱柱恒温槽的温度，冷却色谱柱后，检查载气系统是否正常，载气是否进入仪器，以免损伤色谱柱或污染检测器。

       2、检测器火焰是否正常。如果检测器火焰不能点着或容易熄灭时，可以对点火线圈、点火极、气体的流量、TCD钨丝及钨丝电流设置等进行检查，以排除故障。  

       3、检查注射器是否存在问题，如堵塞等，并且需要对进样口和检测器的石墨垫圈是否漏气、色谱柱是否有断裂漏气等进行检测。

　　4、检查样品浓度、样品进样量是否正确，是否存在问题。

　　5、对色谱柱温度、进样器温度、检测器温度、量程设定等分析条件进行检查。

       6、确保仪器各部分正确连接及正常运行，如离子信号线与检测器、放大器电路板的连接，输出信号线与仪器、积分仪/工作站的连接等。

　　7、如果无法正常调零，需要对电路系统进行检查，以排除故障，如信号线、放大器电路板、输出信号线、积分仪等是否出现故障。

　　8、观察检测器出口是否畅通，这点也格外重要。

结合CN的极性选择性与增强的疏水性

ACE CN-ES液相色谱柱

• 用于UHPLC和HPLC分离的新型固定相技术
• 用于方法开发的替代极性选择性
• 高柱效2μm、3μm、5μm和10μm颗粒
• 超惰性，可获得Z佳性能和可重现性

ACE CN-ES液相色谱柱

目标分析物

• 极性和非极性分析物

• 具有双键和三键的分析物

• 疏水性不同的分析物

• 在传统CN键合相上保留不佳的极性分子

所推荐的分离

• 强极性、极性和非极性分析物的混合物

• 适用于NP和RP分离

• 传统CN键合相显示稳定性/寿命不佳的分离

• 典型C18色谱柱不能提供充分分离的应用

• 作为方法开发中的正交相

ACE CN-ES液相色谱柱可以提供替代选择性

样品：1）甲硝唑 2）苄醇 3）氢氯噻嗪 4）香草醛 5）对羟基苯甲酸甲酯 6）1,2-二硝基苯
流动相：A = 0.1%甲酸（溶于水中） B = 0.1%甲酸（溶于90:10甲醇/水中）
梯度：在5分钟内3 - B
色谱柱尺寸：50 x 2.1mm

流速：0.60ml/min
温度：40℃ 波长：254nm

为什么ACE CN-ES液相色谱柱可以提供替代选择性？
■ 将极性CN基团与延长的间隔区相结合，可以提供与C18色谱柱类似的保留
■ 与具有短链烷基间隔区（通常为C3/丙基）的传统CN键合相相比，延长间隔区技术可额外延长柱寿命

ACE CN-ES 可以提供与C18色谱柱相似的保留

中性化合物在RP条件下的分离

样品：1）尿嘧啶 2）邻苯二甲酸二甲酯 3）甲苯 4）联苯 5）菲

流动相：60:40 乙腈/水
色谱柱尺寸：150 x 4.6mm

流速：1.00ml/min

温度：22℃

波长：254nm

使用甲醇或乙腈的替代选择性

多模式相互作用对分离的优势

样品：1）1,3-二羟基苯 2）儿茶酚 3）氢氯噻嗪 4）氧烯洛尔 5）水杨酸 6）杨梅素 7）吡罗昔康 8）1,2-二硝基苯 9）托美汀 10）1-萘酚 11）胡椒碱 12）二氟尼柳
13）丙基苯 14）1,2,3-三氯苯

流动相：A = 0.1%甲酸（溶于水中） B = 0.1%甲酸（溶于乙腈中）

梯度：在10分钟内3 - B
色谱柱尺寸：100 x 2.1mm

流速：0.60ml/min

温度：40℃

波长：210nm

NSAIDs的快速梯度

样品：1）2-乙酰氨基酚 2）乙酰苯胺 3）水杨酰胺 4）阿司匹林 5）非那西丁 6）水杨酸
流动相：A = 0.1%甲酸（溶于水中） B = 0.1%甲酸（溶于甲醇中）
梯度：在3.75分钟内5 - 38% B，保持38% B直至第5分钟
色谱柱尺寸：50 x 2.1mm

流速：0.60ml/min

温度：40℃

波长：240nm

在UHPLC上利用增强的选择性

采用UHPLC分离类固醇

样品：1）可的松 2）皮质酮 3）11α-羟孕酮 4）可的松-12-乙酸酯 5）11-酮孕酮 6）β-雌二醇 7）17α-雌二醇 8）17α-乙炔基雌二醇 9）雌酮
流动相：A = 0.1%甲酸（溶于水中） B = 0.1%甲酸（溶于乙腈中）

梯度：在5分钟内25 – 52.5% B
色谱柱尺寸：50 x 2.1mm

流速：0.40ml/min

温度：40℃ 波长：260nm

ACE CN-ES与正相条件兼容

在NP条件下用取代芳族化合物进行的保留比较

样品：1）丁苯 2）苯甲酸甲酯 3）硝基苯

流动相：90:10庚烷/乙酸乙酯
色谱柱尺寸：150 x 4.6mm

流速：1.00ml/min

温度：22℃

波长：254nm

产品的可用性和规格

ACE和ACE Excel硅胶基质固定相几乎消除了硅醇基对色谱分离的不利影响，并且在为碱性化合物提供zhuo越峰形方面赢得了口碑。

峰拖尾可以降低分离度，降低灵敏度，甚至干扰准确度和精密度（图4）。

峰拖尾有许多潜在的原因，但分离碱性物质时的主要原因是硅胶固定相载体颗粒表面上的酸性硅醇基与分析物上的氨基之间的相互作用（图5）。

图 4：峰拖尾对分离度和灵敏度的影响

随着峰拖尾（Tf，拖尾因子）从1.0增加到2.0，分离度（Rs）从1.5下降到0.87。

由于峰宽增加以及峰面积保持不变，灵敏度（峰高）也随着峰拖尾的增加而下降。

ACE色谱柱采用具有极低硅醇活性的超惰性硅胶制成。

这种超纯硅胶采用ZL技术进行有效键合和彻底封尾。

导致这种硅胶基质的固定相几乎消除了硅醇基对色谱分离的不利影响。

ACE色谱柱的超惰性特性使其成为分离极性碱性化合物的理想选择。

当分离复杂碱性化合物时,与其他现代碱性去活色谱柱相比，ACE色谱柱总是能给出明显更好的峰形和柱效（图6）。

图 5：峰拖尾相互作用

硅胶固定相载体表面上的酸性硅醇基可形成与碱性化合物相互作用的离子交换位点。

这种离子交换的相互作用通常可以导致峰保留（二次保留），并当采用反相HPLC分离胺类化合物时引起峰拖尾。

一种几乎消除了硅醇基对色谱分离不利影响的硅胶基质固定相

图 6：峰拖尾比较

条件
色谱柱尺寸：50 x 2.1 mm
流动相：40％甲醇，60％水
流速：0.2 mL/min
温度：22ºC
样品：吡啶

报告了碱性化合物（吡啶）在各种常见C18色谱柱上的塔板数。

在10％峰高下测量塔板数，以使峰拖尾纳入在测量中。

ACE C18-PFP由于其超惰性性质而达到了Z高塔板数。

表2：