仪器网（yiqi.com）欢迎您！

术中光学相干断层扫描（OCT）辅助下Leber先天性黑矇（LCA）黄斑修复术

病例研究的内容

Leber先天性黑矇（LCA）是一组先天性视网膜营养不良，可导致早年出现重度视力损伤。患者通常表现为眼球震颤、瞳孔反应迟钝或近乎缺失、视力严重下降、畏光和高度远视[1]。眼部基因治 疗可极大改善这些患者的视力[2]。通过术中视网膜下注射AAV载体完成基因传递。

视网膜下眼部基因治 疗注射对准确度水平有较高要求。因此，术中光学相干断层扫描（OCT）是一项必不可少的工具。术中OCT可向眼科医生提供实时信息，支持气泡管理，并可用于确认预期的载体量是否到达视网膜下间隙。术中OCT还有助于预防并发症，例如载体注射期间术中形成的黄斑裂孔。

病例研究中值得期待的内容

学习要点

• 了解21岁视网膜变性及2型Leber先天性黑矇（LCA）患者的手术治 疗

• 发现视网膜下眼部基因治 疗注射的不同步骤

• 理解术中OCT在黄斑修复术中的作用

眼部基因治 疗病例描述

1例21岁西班牙裔女性，自出生以来视力不良，包括夜盲症、视野收缩、视力下降和色觉下降。患者注意到出现缓慢的进行性功能性退减。尽管已完成高中学业，但她的方向感日益恶化，并且由于视力限制无法独立生活和工作。

图1：图注：黄斑OCT和超宽视野眼底图像显示基线色素性视网膜病变和相对保留中央凹的感光器改变。图像由A博士提供

诊断与术前评估

双眼术前视力均为20/150。患者表现为典型弥散性视网膜变性，黄斑相对保留。基因检测显示双等位基因RPE65变异导致视网膜变性，并提示2型Leber先天性黑矇。鉴于可获得视网膜活细胞且考虑到眼部基因治 疗的潜在受益，对双眼进行了视网膜下注射治 疗。两次手术之间间隔两周。黄斑OCT和超宽视野眼底图像显示基线色素性视网膜病变和相对保留中央凹的感光器改变。

图2：进行黄斑扫描以记录注射前解剖结构，图像由A博士提供

扫码下载完整版【病例研究】（英文）

术中OCT提高视网膜下基因增强治 疗的手术安全性和治 疗准确性

基因增强治 疗是一种眼部基因转移方法，用于治 疗当功能蛋白不足表现为遗传病时的常染色体隐性或X性染色体连锁视网膜营养不良。这些基因缺陷引发特定视力障碍和/或视网膜变性。

近期，基因治 疗在视网膜营养不良中的应用引发了人们巨大的兴趣。视网膜下基因治 疗药物注射术的技术要求较高，具有一定难度。术中光学相干断层扫描（术中OCT）可提供实时信息并向外科医生提供反馈，包括对眼后段结构的渗透深度、注射液的分布和传播、载体回流以及术中黄斑中心凹的完整性。

扫码下载完整英文白皮书

您是否想要进一步了解视网膜下基因治 疗药物注射术治 疗视网膜营养不良？输入您的信息后可下载完整白皮书。

引言

基因疗法是一种疾病治 疗方法，没有通过药物或手术改变了患者的基因组成。基因治 疗是通过激活特定的基因，修复有缺陷的基因，或引入新的基因来帮助抵御疾病。

基因治 疗可以创建个性化的医疗护理，以及使用标准药物和手术方法无法治愈的疾病。因此，开发新的基因疗法是一个非常活跃的研究领域，特别是自 2001 年美国联邦政府首次批准资助研究人类胚胎干细胞以来。 

随着治愈衰弱性疾病的潜力和 FDA 的支持，基因治 疗的发展大幅加速，但要确保基因治 疗产品开发和制造的功效及可重复性仍然存在许多障碍，这需要新的分析方法来监测制剂配方和批次间的差异。测量基因治 疗的热稳定性，确定是否发生了RNA污染，或确定装载量和药物产品血清类型，这些都是需要准确表征和监测的重要细节。

如何加速基因治 疗开发

Nano DSC是一种简单而强大的工具，用于测量候选药物产品、配方和制造批次的相似性。它是一种用于测量溶液中生物材料的通用仪器，甚至可以处理极少量的蛋白质。这一优点是由于检测器的超高灵敏度，还可用于浓度低至2µg的蛋白质。毛细管样品池设计成可容纳300µL的微量体积。

即使在低浓度条件，DSC测量的灵敏度对于载体负载测量也很重要，因为只有少量的物质可渗入病毒或细胞中。这种能力可用于配方优化，以从衣壳中产生脂质纳米颗粒。

Nano DSC可用于测量完整的蛋白质折叠动力学，并在进行完整热力学表征的同时确定各种蛋白质的稳定性。这类型的测量也可以用于蛋白质与其他分子的结合和相互作用。

通常RNA和DNA是基因治 疗的靶点。治 疗方法可以针对某一特定的DNA区域进行疾病治 疗。Nano DSC足够灵敏，可以检测到来自双链RNA和其他物种的潜在污染。差示扫描量热法是一种强大的技术，用于质量控制或治 疗药物的释放控制，并能跟踪任何批次间的差异。

血清型表征在基因治 疗中非常重要，因为同一物种的不同血清类型在临床安全方面可能有很大的不同。Nano DSC对于同一物种不同血清型范围内的测量结果准确可靠。

会议概况

BIONNOVA 细胞与基因治 疗广州论坛将于 2023 年 2 月 21-22 日在广州举办，本次论坛就当前免疫细胞、干细胞、溶瘤病毒、基因编辑等研发路线上的进展和突破、创新疗法的注册申报和临床开发、细胞与基因治 疗生产工艺的技术突破、以及药物开发过程中的分析和质控等议题展开探讨。

会议时间：

2023 年 2 月 21 日 - 22 日

会议地点：

广州翡翠希尔顿酒店

会议日程：

安捷伦作为本次会议的参展商，细胞分析部门将携“基因与细胞治 疗创新性解决方案”，在A08展台期待大家的莅临。

对小鼠整个视网膜进行快速、清晰的高对比度成像，以研究内皮细胞、血管、小胶质细胞和星形胶质细胞之间的相互作用。

本文描述通过使用THUNDER Imager 3D Cell Culture和Large Volume Computational Clearing（LVCC）技术高效地研究小鼠视网膜中内皮细胞、血管、小胶质细胞和星形胶质细胞之间的相互作用。视网膜血管疾病一般是视力受损的主要原因。基因突变会导致人体视网膜血管发生改变，进而引发家族性渗出性玻璃体视网膜病变（FEVR）、诺里病、早产儿视网膜病变（ROP）或Coats病。

视网膜中内皮细胞、血管、小胶质细胞和星形胶质细胞之间的相互作用可使用小鼠视网膜模型来进行研究。通过整个视网膜制样和高分辨率荧光成像可观察视网膜血管网络和细胞相互作用的信息。

简介

视网膜血管疾病是导致视力受损和失明的主因[1]。大多数哺乳动物的视网膜由三层血管网络形成，其中包括两个视网膜内毛细血管床。在人体内，基因突变会引发家族性渗出性玻璃体视网膜病变（FEVR）、以及周边视网膜血管化不完整为特征的遗传性疾病、如诺里病、早产儿视网膜病变（ROP）或Coats病[1]。患有这些疾病的视网膜血管都有所改变。科学家利用小鼠视网膜模型来研究视网膜中内皮细胞、血管、小胶质细胞和星形胶质细胞间的相互作用。利用整个视网膜制片来展示视网膜血管[1]。固定并染色后，必须对整个视网膜进行高分辨率成像，以观察整个血管网络及单细胞相互作用。本文将展示如何使用THUNDER Imager 3D Cell Culture和Large Volume Computational Clearing（LVCC）高效地研究小鼠视网膜细胞间的相互作用[2，3]。

挑战

如何对整个视网膜进行快速成像，并获得清晰的高对比度3D成像结果，展示重要细节对研究视网膜至关重要。视网膜成像一般使用共聚焦显微镜进行扫描，但是这种方法要花费数小时才能采集到整个视网膜图像。而常规的宽场显微虽然成像速度快，检测灵敏度高，但是对厚标本的成像，如整个视网膜，通常会出现非焦平面干扰导致模糊，降低对比度[2，3]。

方法

使用THUNDER Imager 3D Cell Culture仪器对整个视网膜进行成像。使用抗CD31抗体标记视网膜内皮细胞（黄色），使用IsoB4标记视网膜血管和小胶质细胞（品红色），并使用抗GFAP抗体标记星形胶质细胞（青色）。观察整个视网膜时，采用3个荧光通道，用20x Plan Apo 0.8 NA（数值孔径）物镜和100个视野拼接、厚度为15-μm进行 Z轴堆栈成像。

结果

Large Volume Computational Clearing（LVCC）[2，3]方法可清晰展示视网膜内的内皮细胞、小胶质细胞和星形细胞间的相互作用（见图1）。一般情况下，通过宽场显微镜很难观察到视网膜中的这些细胞。通过THUNDER Imager 3D Cell Culture进行高速采集，可在几分钟时间内采集到大约24 GB的整个视网膜成像。采用LAS X Navigator软件中焦平面矫正的方法，可以保证视网膜样本每一个位置都处于最jia焦平面。

图1：使用THUNDER Imager 3D Cell Culture整个视网膜制片的最da化投影图像：A) 宽场原始数据和 B) LVCC结果。插图所示为单个内皮细胞（黄色， CD31抗体）、血管和小胶质细胞（品红色，IsoB4）和星形细胞（青色， GFAP抗体）的宽场视图。图片来源：Jiyeon Lee博士和Jeremy Burton博士，Roche Genentech，美国加利福尼亚州南旧金山。

结论

THUNDER Large Volume Computational Clearing（LVCC）[2，3]与传统宽场成像相比，对整个小鼠视网膜成像时会显著增强对比度，可以高效地研究内皮细胞、血管、小胶质细胞和星形细胞间的相互作用。

References：

1.H.J. Junge, S. Yang, J.B. Burton, K. Paes, X. Shu, D.M. French, M. Costa, D.S. Rice, W. Ye, TSPAN12 Regulates Retinal Vascular Development by Promoting Norrin- but Not Wnt-Induced FZD4/β-Catenin Signaling, Cell (2009) vol. 139, iss. 2, pp. 299-311, DOI: 10.1016/j.cell.2009.07.048.

2.J. Schumacher, L. Bertrand, THUNDER Technology Note: THUNDER Imagers: How Do They Really Work? Science Lab (2019) Leica Microsystems.

3.L. Felts, V. Kohli, J.M. Marr, J. Schumacher, O. Schlicker, An Introduction to Computational Clearing: A New Method to Remove Out-of-Focus Blur, Science Lab (2020) Leica Microsystems.

相关产品

THUNDER Imager 3D Live Cell 和 3D Cell Culture

第二期：

术中OCT提升您的手术体验：视网膜下注射基因治 疗

课程简介：

术中 OCT 在您的视网膜手术中发挥作用，实时揭示表面下隐藏的细节。位于俄亥俄州辛辛那提的辛辛那提眼科研究所和辛辛那提儿童医院的医学博士 Robert Sisk 将讨论他们如何在日常实践中使用配备 OCT 手术显微镜。通过将术中 OCT 整合到他们的实践中，Sisk 博士和 Davis 博士能够在复杂的手术过程中更有信心地进行手术，从而提升手术经验和患者的治疗 效果。

讲者：

Robert A. Sisk  博士

辛辛那提儿童医院眼科研究中心  美国

7月23日，世界卫生组织（WHO）宣布猴痘多国爆发构成“国际关注的突发公共卫生事件（PHEIC）”，这是WHO的特别预警。

WHO新闻稿中指出，对于猴痘是否构成PHEIC，IHR（国际卫生条例2005）突发事件委员会成员尚未达成共识。这一公共卫生事件具有复杂性和不确定性，在考虑了委员会意见以及符合《国际卫生条例》的其他因素后，WHO总干事确定猴痘多国爆发构成PHEIC。

截图来源：世界卫生组织官网

2022年4月之前，在非洲流行地区以外很少报告人感染猴痘病毒。WHO***新数据显示，今年以来WHO已收到近1.5万例猴痘病例报告，包括5例死亡病例，猴痘病例数量以及发生疫情的国家数量似乎在上升。目前，WHO对于猴痘疫情风险的评估为“中等风险”，但欧洲地区为“高风险”。

就在本周，医学期刊《新英格兰医学杂志》（NEJM）也发表了来自猴痘国际合作研究小组的16国病例系列报告，为高危人群和症状识别提供了重磅证据。该研究领衔机构之一，伦敦玛丽女王大学（Queen Mary University of London）新闻稿介绍这是“迄今***大规模的猴痘确诊病例研究”。

今天这篇文章里，药明康德内容团队将结合这些***新进展，介绍我们对于猴痘的认识。

图片来源：The Lancet Infectious Diseases, DOI: 10.1016/S1473-3099(03)00856-9

猴痘病毒并非新病毒，它早在上世纪70年代就在刚果民主共和国被发现。但此次疫情的出现显然对于健康提出了新的挑战。

猴痘病毒是天花病毒的“近亲”，它是一种人畜共患病毒。虽然称为猴痘病毒，它并不只存在于猴子中，已知许多动物物种（如松鼠、袋鼠、非人类灵长类动物等）可在自然环境中易感染猴痘病毒。WHO表示目前没有人畜共患病传播实例的书面证据。

猴痘可以通过接触体液、皮肤或黏膜表面（如口腔或咽喉）的损伤、呼吸道飞沫和受污染的物体传播。

WHO公布猴痘流行情况

WHO公布数据显示，2022年1月1日~2022年7月20日期间，WHO所有六个区域的72个国家共报告了14533例疑似病例和实验室确诊病例，包括5例死亡病例（尼日利亚3和中非共和国2例）。相比2022年5月初数据（47个国家报告的3040例病例）已明显增加。

许多既往没有报告过猴痘病例的国家正在发生传播。目前报告病例数***多的是欧洲区域和美洲区域。

目前报告的大多数猴痘病例为男性患者，其中大多数病例发生在自称为同性恋、双性恋的男性和其他男男性行为者（MSM）中，病例更多见于城市地区，病例聚集与社交/性行为网络相关。

西非和中非国家的病例数量也显著增加，病例中有更多的女性和儿童，与欧美的患者人口结构明显不同。

WHO对于猴痘病毒和疾病特点的***新判断

WHO声明中也介绍了猴痘病毒的病毒传播和疾病特点。

数学模型估计，猴痘病毒传播力指标基本再生数（R0）在MSM人群中的高于1，而在其他情况下低于1。

在非洲以外暴发的猴痘的临床表现不同于既往爆发病例的情况，通常是自限性的，皮疹病变局限于生殖器、会阴/肛周或口周区域，通常没有进一步扩散。

报告病例的平均潜伏期估计为7.6~9.2天（基于欧美多国监测数据）。病例间传播的平均连续间隔（serial interval）估计为9.8天（95%CI 5.9-21.4天，数据基于英国的17对病例接触者）。

在卫生工作者中报告了少数病例，相关调查正在进行中，但迄今尚未发现职业传播病例。

来自***新权威医学论文的证据

NEJM重磅：16国猴痘病例分析，部分症状易误诊

这项研究在当地时间7月21日在线发表于NEJM官网，旨在明确近期多国出现的猴痘病毒感染特点，为识别高危人群、改善未来的诊断、减少感染传播提供洞见。研究报告了2022年4月27日~6月24日期间在16个国家诊断出的528例感染。

截图来源：The New England Journal of Medicine

总体而言，98%的感染者是同性恋或双性恋男性，75%是白人，41%也是艾滋病毒（HIV）感染者。患者中位年龄为38岁。

性接触是***可能的传播途径。95%感染者推测是通过性活动感染的；在接受检测的377人中，有109人（29%）也报告了其他性传播感染。在分析***的32人中，有29人可检测到猴痘病毒DNA，这进一步支持了性传播的假设。

“需要强调的是，猴痘不是传统意义上的性传播感染，它可以通过任何形式的密切身体接触获得”。NEJM研究***作者、伦敦玛丽女王大学John Thornhill博士表示，“我们的研究表明，传播主要发生于男男性行为者，但不限于上述人群。”

在有明确接触史的23人中，猴痘病毒的中位潜伏期为7天（范围3~20天）。

从疾病表现来看，猴痘感染者出现多种皮肤病变和全身临床表现。

• 在这个病例系列中，95%的患者出现皮疹（64%患者病变<10处），73%有***生殖器病变，41%有黏膜病变（其中54人有单个生殖器病变）。

• 出现皮疹前的常见全身特征包括发热（62%）、嗜睡（41%）、肌痛（31%）和头痛（27%）；淋巴结肿大也很常见（56%）。

研究团队强调，当前回顾研究中，不少感染者所出现的症状，并不符合既往对于猴痘的医学定义，如口腔溃疡、***黏膜病变和单个病变。这些临床症状与性传播感染（STI）相似，容易导致误诊。

5%的患者接受了抗病毒治疗。药物包括cidofovir（原用于治疗艾滋病患者的巨细胞病毒感染）、tecovirimat（已获批用于天花治疗）和牛痘免疫球蛋白。

大多数病例是轻度和自限性的，没有发生死亡，70人（13%）需住院治疗。HIV感染与否没有影响入院概率。住院的原因包括疼痛管理（主要是严重的***直肠疼痛，21人）、软组织重复感染（18）、因咽炎而吞咽困难（5）、眼部病变（2）、急性肾损伤（2）、心肌炎（2）和感染控制（13）。入院患者中观察到罕见的严重并发症（心肌炎和会厌炎），因此研究团队建议仍需要进一步***研究猴痘临床表现和并发症。

《柳叶刀-感染病学》发表近年病例回顾研究

早在5月猴痘爆发初期，5月24日，《柳叶刀-感染病学》（The Lancet Infectious Diseases）就发表一项回顾性研究，详细描述了英国既往（2018年至2021年期间）7例猴痘确诊患者的临床特征。

截图来源：The Lancet Infectious Diseases

这项研究显示，尽管大数患者病情相对较轻，但是患者皮损消退后病毒DNA排毒时间至少为3周。

这篇研究也为两款抗病物用于猴痘的潜在治疗效果提供了洞见：3例确诊患者接受了brincidofovir治疗，均因肝酶升高而导致停药，尽管未有患者完成完整疗程，但是这部分患者***终均完全恢复；1例确诊患者接受tecovirimat治疗，未出现不良反应，且这例患者相较于其他6例患者排毒时间和患病持续时间更短。

推动大流行防范与应对

WHO总干事在7月23日的新闻发布会上表示，“疫情正在通过新的传播方式迅速蔓延到世界各地，我们仍然对此知之甚少”。宣布PHEIC的同时，也更进一步强调了大流行防范和应对。

核酸提取磁珠作为新冠病毒RNA提取的重要原料，是吉恩特生物自主研发生产的高分子材料，将均一的分子材料的粒径控制在合理的范围内，加入磁性，再引入配基，从而使分子材料具备磁响应性和生物吸附性能，在核酸提取的过程中可以得到良好的应用，尤其是GNT-108磁珠，更是对新冠病毒的RNA提取具有较高的特异性，提取结果可直接应用与下游定量检测。

最近一段时间，随着疾病诊疗的精 准化，各个版本新冠诊疗指南的出炉，淋巴细胞亚群、精细亚群和细胞因子等与免疫力监控高度相关的指标受到了高度关注。

在众多的免疫指标中，选择哪些监测指标，如何建立自建方案并验证，如何建立与疾病诊疗相关指标的Cutoff值，这些都是当下流式工作者们开展更多免疫指标时会遇到的一些难题。下面这篇文章对上面提到的几个问题做了详细的解答。

01.背景介绍

免疫检查点抑 制剂治 疗，特别是联合PD-1/CTLA-4 阻断，显著提高了转移性黑色素瘤患者的治 疗率和总生存率 。但同时，与免疫相关的不良反应，如肝炎和结肠炎，是免疫抑 制剂治 疗过程中常见的并发症，其严重的时候可以危及到生命 。在接受PD-1和CTLA-4的一些晚期黑色素瘤患者中，巨细胞病毒 (CMV)引起的特异性记忆 T 细胞反应会导致肝损伤，而有研究表明治 疗前血液中 CD4+ 效应记忆 T 细胞 (TEM) 的扩增能够可靠地预测肝炎；所以如果有一种方案可以监测效应记忆T细胞，从而预测不良反应的发生，其将具有很好的临床意义。

本文章作者开发并验证了一个10色流式细胞方案，用于可靠地量化外周血样本中的 CD4+ TEM细胞和其他 irAE 风险的生物标志物。与以前的方案相比，文章作者的新方案在测量CD4+ TEM细胞方面表现出色，并且在从CD4+ CD197+ CD45RA+ 幼稚T细胞（Naïve T）分辨CD4+ CD197+ CD45RA- 中 央记忆T细胞 (TCM) 方面表现出色。它还能够精确量化 CD14+单核细胞。

02.实验方案

CD4+ TEM细胞的标记为CD45+ CD3+ CD4+ CD8- CD45RA- CD197- 。单核细胞的相同标记为 CD45+CD14+，同时加上将 CD16，以对经典、中间和非经典单核细胞进行更精细的分类。有研究表明将 CD8+ T 细胞中的 CD279 (PD-1) 表达确定为黑色素瘤患者接受 PD-1/CTLA-4 治 疗后临床反应的标志物 ，因此加上 CD45+ CD3+ CD4- CD8+ CD279+ 。为了提高细胞类型定义的准确性，方案中还包括了一个谱系排除 (Lin) 通道（CD19、CD20、CD56 和 CD66b）来排除B 细胞、NK 细胞和粒细胞。因此，新panel包括 10 个参数：CD45、Lin、CD3、CD4、CD8、CD45RA、CD197 (CCR7)、CD279 (PD-1)、CD14 和 CD16，作者将该方案命名为“monocyte and T cell”，简称“MoT”。

该方案用Beckman Coulter的液体试剂进行验证，并在验证完成后，作者将该方案定制成干粉形式，由于干粉产品相比较液体试剂，不仅可室温保存，并且保存时间更久，同时还可以减少实验操作，样本间一致性也更高等优点，便于日常诊断工作并最 大限度地减少差异。

贝克曼库尔特公司不仅可以提供Duraclone干粉成品试剂，还可以提供客户定制CDS，可以根据客户需求，个性化组合定制干粉方案。相比较液体方案来说，定制化的干粉组合方案，不仅有液体单抗方案的自由组合的优点，而且还有干粉试剂的优点。

03.方案圈门策略

该方案用贝克曼库尔特公司的Navios 3激光10色仪器进行数据的采集，并使用Kaluza软件进行分析。

3.1  对CD45+ 白细胞进行圈门；

3.2  对CD3+ T 细胞和CD3- 细胞进行圈门；

3.3  对CD3-内的谱系阴性 (Lin-) 细胞进行圈门；对CD14+ 单核细胞进行圈门；对由 CD14 和 CD16 表达定义的单核细胞亚群进行圈门；

3.4  对CD3+ T 细胞内的CD4+ 和 CD8+ T细胞进行圈门；对CD4+ 记忆T细胞亚群进行圈门；圈门CD279+ CD8+ T细胞。

04.检测性能验证

文章作者将此方案与贝克曼库尔特公司的DURAClone IM T 细胞亚群管 和 DURAClone IM Basic管平行分析了来自 83 名患有II、III 或 IV期疾病的黑色素瘤患者的样本，其中II 期(n = 52)、III期(n = 11) 或IV期(n = 20)。除CD14+ 单核细胞外，其他参数均观察到方法之间的强相关性，CD14+ 单核细胞显示出中等相关性。

DURAClone IM Basic和DURAClone IM T是贝克曼库尔特公司的Duraclone IM全套抗体组合方案中的第1管与第3管。该产品的优点是干粉，保存的时间比液体更久；而且预混抗体也能节省实验时间，相比于自己混匀抗体后分装染色，样本间的一致性会更高。产品质量满足ISO 9001认证标准（ISO 9001-2008）。

文章作者之前确立了一个cutoff值≥16% CD4+ TEM 细胞作为 CMV Ig+ 患者检查点阻断相关肝炎的预测因子。因此在将患者分类为 CD4+ TEM ≥16% 或 CD4+ TEM <16% 时，DURAClone IM T 细胞亚群管和 MoT测试管结果在 81/83 例 (98%) 中一致。此外，E图显示在确定 CMV 血清学状态，并在治 疗开始后 12 周内评估免疫相关肝炎的发展。红色虚线表示 CD4+ TEM ≥ 16% 的cutoff值， 中值用黑线表示，MoT 方案在预测 16 名 IV 期黑色素瘤患者的肝炎方面表现良好。F图显示6 名 CMV IgG+ CD4+ TEM ≥16% 黑色素瘤患者中有 5 名正确预测了肝炎。

经过验证，文章作者用cutoff值≥16% CD4+ TEM 细胞作为 CMV Ig+ 患者检查点阻断相关肝炎的预测因子，相关的PPV=83%，NPV=80%。

另外，文章作者还从批内精密度、批间精密度、操作者间分析精度、样本稳定性、样本染色稳定性、年龄、性别和疾病相关偏倚、季节性等方面进行了验证，确保该方案结果是在可接受范围内的，由于篇幅的关系，就不一一列出来了，感兴趣的读者可以去原文查看，其详细的介绍了作者验证思路与结果。

使用增强现实荧光技术进行搭桥手术的病例研究

烟雾病是一种罕见的慢性闭塞性脑血管疾病，以颈内动脉末端进行性狭窄和脑底异常血管网为特征。烟雾病的手术治 疗选择有搭桥手术。在以下病例研究中，教授解释了增强现实荧光技术如何支持这一手术，并逐步详细描述了一名35岁患者的手术治 疗。

图像：增强现实荧光技术在烟雾病治 疗中的应用。图像由教授提供。

主要经验

• 了解烟雾病手术治 疗和搭桥手术的不同步骤：术前评估、术中过程和术后评估

• 深入了解增强现实荧光技术在烟雾病治 疗中的作用及其如何提高信心

• 发现烟雾病手术治 疗的临床图像和视频

烟雾病患者初次就诊和术前评估

该病例研究涉及1例35岁女性烟雾病患者，该患者出现了恶化的神经症状和体征。决定进行搭桥手术。

图1：脑部灌注MRI显示右侧大脑中动脉(MCA)区域灌注减少。图像由教授提供。

搭桥手术前，进行术前评估，包括导管血管造影和数字减影血管造影(DSA)。这可以更好地了解闭塞和狭窄。

烟雾病手术方式：烟雾病的治 疗方法是什么？

外科医生第 一步切开了浅表动脉。使用增强现实荧光技术能够评估通过动脉的血流。并检查潜在的出血和血栓形成。 

图2：烟雾病手术治 疗：浅表动脉解剖。图像由教授提供。

进行翼点开颅术，然后通过外侧裂进行蛛网膜下腔剥离。

吻合前，使用增强现实荧光技术评估通过供血动脉和M4分支的脑血流。行颞动脉吻合口搭桥。

图3：烟雾病手术治 疗：增强现实荧光技术可视化。图像由教授提供。

完成搭桥后，增强现实荧光技术有助于评估动脉的通畅性，并能观察无出血和血栓形成。术后评估显示无术后并发症或新的神经功能缺损迹象。 

增强现实荧光技术在烟雾病手术治 疗中的作用

图4：增强现实荧光技术可视化支持神经血管手术的每一步。

使用增强现实荧光技术在血管神经外科手术期间提供一个增强实时视图。神经外科医生不需要回忆，并尝试将黑白血流视频与自然解剖视图协调一致。清晰的轮廓、完整的深度感知和没有黑暗的边缘支持医生准确操作血管。

增强现实荧光技术的优势

使用增强现实荧光技术，可以：

• 在搭桥手术期间通过供体血管和受体血管对血流进行准确评估，帮助医生进行选择。

• 在吻合前确定是否存在血栓形成或血管狭窄，并在术中评估吻合的通畅性。

• 术中评估吻合血管的出血情况，包括扭结和部分梗阻。

因此，增强现实荧光技术可以为烟雾病治 疗和手术结果提供帮助，是未来神经外科操作和培训的基本工具。

注：本病例研究中医疗专业人员的陈述仅代表其个人观点和经验，并不代表其所属机构的观点。

西南大学材料与能源学院薛鹏副教授、康跃军教授团队在生物医学期刊Theranostics上发表文章——Facile engineering of silk fibroin capped AuPt bimetallic nanozyme responsive to tumor microenvironmental factors for enhanced nanocatalytic therapy。

作为高反应活性物质，活性氧（ROS）对于肿瘤细胞有很好的治 LX果。但是，肿瘤微环境（TME）会在一定程度上使得治 LX果大打折扣。

这篇文章报道了一种经过生物矿化形成的丝素蛋白（silk fibroin）包裹的AuPt纳米酶——AuPt@SF（APS）。一方面，APS可以促进葡萄糖分解产生H₂O₂，并消耗肿瘤细胞内的谷胱甘肽（GSH）；另一方面，APS可以将肿瘤细胞内的O₂和内源性H₂O₂分别转化为ROS——超氧自由基（•O₂^-）和羟基自由基（•OH）。这些具有细胞毒性的ROS可以对肿瘤的细胞膜、核酸以及线粒体造成不可逆的损伤，从而达到治愈肿瘤的目的。

其中，经Cy7.5标记的APS纳米酶在4T1肿瘤模型小鼠体内及各器官的的生物分布通过荧光成像进行了研究，荧光成像实验在VILBER多功能活体成像系统——Fusion FX7上完成。

VILBER Fusion FX7多功能成像系统

产品特点：

· 采用新一代深度制冷的CCD相机，暗电流0.0001e/p/s@-90℃, 制冷速度更快且寿命更长；

· F0.7超级镜头，大大提高了单位时间内的进光量，从而有效缩短曝光时间，尤其适用于Luc报告基因检测的生物发光成像；

· 荧光成像采用脉冲LED光源，7通道，激发强度比卤素灯更高。基于扫描方式，激发均一性≥99%；

· 全自动控制7位发射滤光片轮，搭载6个专用窄波滤光片，涵盖400~900nm，满足多种染料的检测需求；

· 配备小鼠专用恒温台兼容小鼠麻醉系统，最 大通量可达5只小鼠。

应用范围：

·小动物成像：基于生物发光或荧光的肿瘤发育、药物代谢、细胞迁移追踪、纳米材料研究等；

· 植物成像：LUC 或GFP、RFP等报告基因检测，转基因鉴定、基因互作、微生物侵染、植物发育、植物生物节律等；

· 化学发光 & 荧光Western blot，Northern blot或Southern blot；

· 免染胶，银染&考染蛋白胶，SSCP胶，培养皿（细胞或菌落），微孔板，蛋白芯片或其他基于荧光或化学发光的样品。