全部评论(6条)
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- 结婚难办 2016-09-03 00:00:00
- 好用,使用过后你就能清楚知道他的好处
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- 349微微一笑 2016-09-03 00:00:00
- 效果还是杠杠滴,不过还是看使用场合
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- gdfgsdgdsaf 2016-09-03 00:00:00
- 好不好用过就知道了。
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- 巨蟹库妮子 2016-09-03 00:00:00
- 还可以的 报牌速度快 准确率高
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- lsbb198801 2016-11-02 00:00:00
- 效果你来试了不就知道,效果还是可以的,
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- Wait那份忧伤 2016-11-02 00:00:00
- 可以,你要买吗?报牌挺快的,
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- qPCR效果好不好,这6个要素要知道~
实时荧光定量PCR:在PCR反应体系中加入荧光基团(探针或染料),利用荧光信号积累实时监测整个PCR反应过程,最后通过Cq或Ct值和标准曲线对起始模板进行绝对定量或相对定量分析。而评估荧光定量PCR反应效果好坏,可以从以下几个方面来评估:
1.扩增效率及相关系数
良好的PCR扩增是指数级的,理论上以100%的效率进行,但实际上并不是所有的PCR反应都表现出相同的高效率,所以需要验证实际的扩增效率E。当计算评估PCR扩增效率时,至少需要做3次平行重复,并至少做5个数量级倍数(5logs)连续梯度稀释模板浓度,得到线性方程Cq= -klgX0+b、扩增效率E=10(-1/k)-1。并且E在0.9-1.1之间,即扩增效率在90-110%,被认为此扩增接近理想情况;相关系数R2值大于0.98时,说明两个数值之间相关的可信度很好,可用来计算。
▲ 图1. 5个梯度稀释液的扩增曲线及标准曲线。
图源:Azure Cielo™实时荧光定量PCR系统
2.精确度(Precision)
指多个复孔Cq值之间的接近程度,且重复孔之间的标准偏差不大于0.2,说明实验的重复性较好。
▲ 图2. 96孔重复的扩增曲线,Cq Mean=19.1,CV=0.002
图源:Azure Cielo™实时荧光定量PCR系统
3. 重现性(Reproducibility)
指不同批次之间或不同实验室之间的结果变化,通常通过SD或者CV来评估。
▲ 图3. 4台独立的Azure Cielo™实时荧光定量PCR系统同时检测GAPDH,Cq Mean=20.11,SD= 0.002
4. 灵敏度(Sensitivity)
通常灵敏度表示为检测限(limit of detection, LOD),可通过梯度稀释样品来确定最低检测限。分析灵敏度是指一个样本可通过实验精确测量的最小拷贝数。
5. 准确度(Accuracy)
指测量值与真实值的接近程度。针对低拷贝样本,由于受采样概率的影响,可能会导致结果不准确。为了更可靠地检测低拷贝,可以增大平行实验的重复数,来统计显著性。
▲ 图4. 低拷贝样本采样概率符合泊松分布
图源:网络,侵删
6. 特异性(Specificity)
指qPCR实验中只可以检测到目的基因,引物特异性扩增靶序列,而不会扩增其他基因序列。可通过凝胶电泳检测扩增产物是否为单一条带,或通过qPCR反应,根据溶解曲线是否具有单峰来判断。
▲ 图5. 溶解曲线单峰
图源:Azure Cielo™实时荧光定量PCR系统
通过这六个方面就可以评估实时荧光定量PCR反应效果。你学会了吗?实验数据是好是坏快来自检吧。
Azure Cielo™实时荧光定量PCR系统
Azure Cielo™实时荧光定量PCR系统来自于美国Azure Biosystems公司,可为您提供3/6检测通道,根据实验需求灵活配置。这款产品采用高能LED作为光源系统,可保证光源强度高,光源一致性好;高品质的帕尔贴温度模块作为温控系统,升降温速率快,可设置12列跨度30°C的温度梯度;CMOS拍照+光纤信号传输作为检测系统,CMOS检测灵敏度高,光纤传输速度快,无光损失和噪音干扰,无需ROX校准。Azure Cielo™实时荧光定量PCR系统可为您的科学研究提供高精准度、高灵敏度和高可靠性的实验结果。
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溶解氧分析仪使用注意事项:
氧气通过周围的空气、空气流动和光合作用溶解于水中。工业溶氧仪是测量溶解在水溶液内的氧气的含量,可用来测量用来对氧含量会影响反应速度、流程效率或环境的流程进行监控如水产养殖、生物反应、环境测试(湖、溪、海洋)、水/废水处理、葡萄酒生产。
1、使用极谱式电极时,校正或测量前要预热至少15-30分钟。
2、为确保膜的电解液内没有气泡,ASI膜帽在设计上要求在装上膜头时要排除掉所有液腔内的空气。
3、膜表面上不能留有任何气泡,否则它会将气泡当作氧饱和样品进行读数。
即使使用的是带有自动温度补偿的仪表,也要在接近样品溶液的温度下校正电极。
电极应在空气中校正,以空气作为1**%的饱和溶解氧标准点。
由于电极对氧的消耗,探头表面氧的浓度会瞬间降低,因此测量时要对溶液进行搅拌,这很重要。如膜已破损则要进行更换。
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