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荧光检测器污染了怎么办？

细胞培养（cell culture）是指在体外模拟体内环境（无菌、适宜温度、酸碱度和一定营养条件等），使之生存、生长、繁殖并维持主要结构和功能的一种方法。随着生物工程的逐壮发展，细胞培养是生物工程和生命科学研究基本的实验技术。干细胞生物学及再生医学等的发展及其应用在很大程度上基于细胞培养技术的发展。真核细胞或原核细胞培养在受人工控制的状态下，进行大规模的克隆。细胞培养技术是细胞生物学研究方法中重要和常用技术，通过细胞培养既可以获得大量细胞，又可以借此研究细胞的信号转导、细胞的合成代谢、细胞的生长增殖等。

在进行细胞培养过程中，需要严格控制细胞培养的周围环境和配制合适的培养液。细胞培养中最困难的就是哺乳动物的细胞培养。研究一般需要在培养液中加热牛血清来为哺乳动物提供生长因子。根据培养细胞的不同分类，即贴壁细胞或者悬浮细胞，提供细胞的附着环境或者提供悬浮环境。更为重要的是，哺乳动物细胞培养需要一定的CO₂环境，来维持培养液的pH。因此针对细胞培养出现了能够控制细胞培养环境的CO₂培养箱。

CO₂培养箱的出现是一个跨时代的意义，通过严格控制箱体内CO₂的含量，即可保证培养液相对稳定的pH值，为细胞培养提供稳定的生长环境。众所周知，一般CO₂培养箱能提供的稳定的温度控制为37℃，来培养哺乳动物细胞如HePG、L-02、HBO等都是在37℃下进行培养。但是随之产生的问题，其他细胞如昆虫细胞(Sf9、Sf21)等需要比室温高一点或者接近的温度。如果采用低温生化培养箱，则会出现冷凝水的问题，且不能进行控制CO₂浓度，因此需要CO₂培养低温环境。

WIGGENS CO₂细胞培养箱，WCI 180能提供帕尔贴制冷套件，为培养箱提供低于室温5℃工作（zui低温度20℃）的环境，方便研究者能够进行更多种类细胞的培养。

做液相色谱的同学基本都会碰到分叉峰，

很多时候，

这都意味着硬件或者方法某些地方可能出现问题。

今天我们就一起看看导致峰分叉的原因，

以及如何解决这个问题。

首先，我们需要判断，

这到底是一个峰，还是两个峰?

a图主峰前面有一个肩峰，

这到底是峰形不好，

还是另外一个化合物没分开呢?

判断方法

降低该成分在样品中的浓度

b图是降低该成分浓度后，

进样后得到的色谱图。

如果这是一个峰，

那肩峰也应该响应变小，

但是这个例子里，

肩峰没有变小，

这应该是另外一个化合物。

这时候，我们就要考虑如何改变方法

将这两个东西分开。

如果所有峰的峰形都不好

一般来说，

一个样品都会出多个峰。

峰形不好，绝大多数时候

在每个峰上面都会出现。

比如像下面这样：

a图是所有峰都拖尾，

b图是所有峰都有肩峰，

也可以说峰分叉，

这种情况一般都是色谱柱头塌陷

或者柱头的筛板被堵导致的。

为什么会导致峰形问题呢？

请看下面的图

a图是正常的柱头，

b图是筛板被堵的柱头。

正常情况下，

所有样品分子都是均匀通过色谱柱，

形成一个对称的峰形。

堵塞的情况下，

有一部分样品分子进入色谱柱就会受到阻扰，

导致时间拖后，形成拖尾。

对于色谱柱塌陷的情况，

用同样的方法大家也不难理解。

只不过这时候，

是一些样品分子可能跑的比正常的快了一些。

如何解决这个问题呢？

1  反冲

柱出口放空，

冲20-30ml流动相。

虽然柱子上都有表明使用方向，

但是对于硅胶基质的色谱柱

基本都可以反冲。

将柱头污染物

如泵密封圈的碎屑，

样品中的污染等冲走，

就能解决问题。

当然，还是要提倡大家注意

样品上机之前的前处理

和及时更换磨损的泵密封圈。

有条件的还是用保护柱，

大不了就换保护柱，

也比换色谱柱强。

2  更换或清洗筛板

现在估计做这个事情的人不多，

但是谁有废柱子，

想练练也未尝不可。

我们一起看看一个实际的例子

根据之前说的，

可能是柱头堵了，

或者塌陷了。

但是进一步检查，

发现另有原因。

方法用的150 mm 4.6 mm, 5 um C18 柱子，

78% 乙腈，1.5ml/min，等度方法，

进样10ul，100%乙腈溶解的样品。

一般来说，

虽然10ul的纯乙腈不会引起峰形不好，

但是有时候样品溶剂的极性跟流动相差异较大时，

的确会引起峰形的问题。

我们怎么办呢？

01

从最容易的办法做起，

降低溶剂乙腈的比例，

降到50%看看。

从下图b，4min的峰可以看出，

没啥改观。

02

接下来反冲柱子，

结果如图c，

基本没变化。

算了，明天再说吧。

03

第二天来到实验室，

还能干嘛呢? 

更换筛板?

算了，直接换柱子吧！

结果如d，

噢，好很多噢。

之前柱子肯定有问题，扔了。

但是峰还是有点宽，

估计还是哪儿有问题。

手上忙，没时间管这个。

04

几天过后，

重新配了流动相，

一跑，好了，如图e。

虽然到底什么原因导致之前峰形的问题，

已经无从查找

（柱子扔了，旧流动相也没了），

但是也给我们提供了一个解决问题的步骤：

1

确定峰形问题

是所有峰都有问题，

还是就是某一个峰有问题。

如果所有峰都有问题，

基本都是色谱柱，

或者仪器管路连接的问题。

如果是某一个峰有问题，

那就要从方法上来考虑，

是否需要改变流动相比例，

pH值，色谱柱温度等等。

2

从最简单的做起

从不需要换什么东西的方法做起。

比如改变样品溶剂，

反冲色谱柱等等。

3

换东西

换保护柱，换色谱柱，

换流动相(新配)，

一步一步的换，

有助于找到问题的根本。

4

总结经验

问题解决后，

想想需不需要采取什么措施，

防止类似问题的发生，

比如说常换流动相啦，

及时更换密封圈啦，

记录进样次数

了解什么时候色谱柱就不行了啊之类的。

希望以上信息能够让各位同学

在碰到峰形不好的问题时，

有一些思路，

不至于手足无措。

也欢迎大家留言补充

上面没有提到的可能影响峰形的可能。

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