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- jiang1231997 2013-09-24 00:00:00
- 1.检验医学诊断试剂 作为检验医学实验室的诊断试剂,单克隆抗体以其特异性强、纯度高、均一性好等优点,广泛应用于酶联免疫吸附试验、放射免疫分析、免疫组化和流式细胞仪等技术。并且单克隆抗体的应用,很大程度上促进了商品化试剂盒的发展。目前,应用单克隆抗体制作的商品化试剂盒广泛应用于: ①病原微生物抗原、抗体的检测; ②肿瘤抗原的检测; ③免疫细胞及其亚群的的检测; ④激素测定; ⑤细胞因子的测定。 单克隆抗体对抗原的识别,与多克隆抗体有很大的不同。不同试剂盒因使用的单克隆抗体不同,识别抗原的位点不同,导致检测结果有一定差异。因此,标准化问题还需要进一步研究。 2.蛋白质的提纯 单克隆抗体是亲和层析中重要的配体。将单克隆抗体吸附在一个惰性的固相基质(如Speharose 2B、4B、6B等)上,并制备成层析柱。当样品流经层析柱时,待分离的抗原可与固相的单克隆抗体发生特异性结合,其余成分不能与之结合。将层析柱充分洗脱后,改变洗脱液的离子强度或pH,欲分离的抗原与抗体解离,收集洗脱液便可得到欲纯化的抗原。 3. 肿瘤的导向ZL和放射免疫显像技术 将针对某一肿瘤抗原的单克隆抗体与化疗药物或放疗物质连接,利用单克隆抗体的导向作用,将药物或放疗物质携带至靶器官,直接杀伤靶细胞,称为肿瘤导向ZL。另外,将放射性标记物与单克隆抗体连接,注入患者体内可进行放射免疫显像,协助肿瘤的诊断。目前单克隆抗体主要为鼠源性抗体,异种动物血清可引起人体过敏反应。因此,制备人-人单克隆抗体或人源化抗体更为重要,但此方面仍未取得明显进展。
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单克隆抗体是目前使用最为广泛的抗体类产品之一,相比多克隆抗体来说,其具备特异性强、纯度高、重复性好而且能够大批量供应的特点,使得其得到了广泛的使用。单克隆抗体的问世,可以说为免疫学领域带来了一场革命,也从根本上促进了众多领域科学的发展。那么,对于单克隆抗体的几种研发技术,大家了解多少呢?
1、杂交瘤技术。
通过将具备特异性的B细胞与骨-髓瘤细胞想融合所产生的杂交瘤细胞,这里细胞不仅能无限增殖,还可以产生特异性抗体;
2、酵母表面展示技术。
通过将外源靶蛋白基因与特定的载体基因融合后导入酵母细胞中,诱导表达后,使得其分泌出目的蛋白;
3、噬菌体展示技术。
通过将外源蛋白或多肽基因序列插入到噬菌体外壳结构的适当位置,使得目的随着子代噬菌体外壳的表达而表达;
4、转基因动物技术。
将受体动物的一段基因切除,在将目的基因导入到动物基因中,使得其遗传信息发生变化,并能稳定地遗传给后代;
5、纳米噬菌体文库构建。
也就是我们常说的纳米抗体制备技术,通过免疫驼类生物所产生的一种小分子抗体;
这几种研发方法各自的优缺点有哪些?
1、杂交瘤技术。
优点:技术相对成熟,前期获得抗体也非常的简单;
缺点:后续的人源化及分子改造过程相对来说要繁琐很多;
2、酵母表面展示技术。
优点:完备的真核细胞表达筛选技术;
缺点:成功案例较少,技术有待完善;
3、噬菌体展示技术。
优点:通过高通量筛选能获得更多全人源抗体;
缺点:前期建库费时且费力;
4、转基因动物技术。
优点:技术成熟,而且成功案例相对较多;
缺点:限制较多,且需要人源化,周期长,成本高;
5、纳米噬菌体文库构建。
优点:分子小、穿透性强、温度稳定性高;
缺点:后续的分子改造过程更为繁琐;
总的来说,现阶段的单克隆抗体制备方式相对来说都各具优缺点,适合不同的使用环境和需求。所以,我们在后期进行单克隆抗体制备的时候,需要结合自身的情况以及后期的发展来进行综合考虑,只有这样,才能在在控制成本的前提下选择合适的抗体产品。
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