多肽合成仪的检测方法
在1963年,美国洛克菲勒大学教授Bruce Merrifield 发明的多肽固相合成技术(SPPS)是多肽合成领域的一个重大突破,对化学,生化,医药,免疫和基因科学等学科和领域都起了巨大的促进作用。 他本人也因此项发明荣获1984诺贝尔化学奖。
合成肽技术(techniques for peptide synthesis)用化学手段将氨基酸依次定向地缩合成多肽或蛋白质的技术。大多数天然多肽和蛋白质都由a-氨基酸构成。氨基酸分子内可有3个化学活泼的基团即侧链、氨基及羧基,与α-碳原子共价连接。
检测方法
1. UV Monitor
在多肽合成仪中,如UV Monitor的在线检测耦合效果的装置通常是选配装置,客户对于多肽合成仪的选购应当按照实验的需要。多肽合成的每一部氨基酸偶联效果使操作者能够直观的看到,从而针对特定的序列调整合成设置,从而使得效果Z终达到Z佳。UV Monitor对于不熟悉多肽合成仪操作的用户来说具有相当重要的作用。
2.试剂检测
如果用户选购的多肽合成仪没有在线检测附件,也能够通过试剂检测方法做基本的耦合效果测定实验。固相多肽合成中,主要通过对树脂上游离氨基的检测来对连接效率进行判断。检测方法叫做Kaiser方法,若有游离氨基,则呈兰色,或红褐色(pro,ser,His)显示。Kaiser试剂包含(1)2% 0.001M KCN的吡啶溶配制中的吡啶需要经过茚三酮处理后,重蒸后再使用(2)80% 苯酚的乙醇溶液(3)6% 茚三酮的乙醇溶液。在检测的过程中将少量树脂取出,将A,B,C各加入2-3滴,100℃下加热1-2min,如果树脂呈现红褐色,兰色或者溶液有兰色,那么说明还有游离氨基存在,不然就表示完全连接。
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