多肽合成仪的分类
多肽固相合成技术的发明同时促进了多肽合成的自动化。世界上diyi台真正意义上的多肽合成仪出现在1980年代初期。虽然在各项功能方面有着明显的缺陷,但是它毕竟把人从实验室里解放出来,极大地提高了工作效率。
多肽合成仪的分类
随着多肽科学的发展,科学家也对合成仪提出了更高的要求,从而带动了多肽合成仪的发展。目前多肽合成仪品种繁多。从合成量上分,可分为微克级的,毫克级的,克级的和公斤级的;从功能上分,可分为研究型的,小试型的,中试型的,普通生产型的和GMP生产型的;从自动化程度上分,可分为全自动的,半自动的和手动的;从通道上分,可分为单通道的和多通道的;从技术角度上分,可分为diyi代的,第二代的,和第三代的。
diyi代多肽合成仪:
标志性特点是采用氮气鼓泡的搅拌原理来对反应物进行搅拌,即多肽合成仪上反应器是固定的,氮气从反应器的下方通过反应器到上部排出,在这一过程中产生的汽泡把固相和液相混合起来。
这样设计多肽合成仪的好处是结构简单,成本低,但各项功能方面有着明显的缺陷,目前采用氮气鼓泡方式的diyi代多肽合成仪已大部分退出了市场。
第二代多肽合成仪:
标志性特点是用不完全性的机械搅拌来取代氮气鼓泡,一般可分为接触式搅拌与非接触式搅拌两种。
接触式搅拌常见的搅拌方式是伸入反应器内部的螺旋桨由上部的电机带动进行快速旋转,使反应器内部的固液两相进行混合。但搅拌方式带来的不利因素如清洗障碍,合成量低,反应死角等也不容忽视,目前全世界共大多数多肽合成仪生产厂商放弃了接触式搅拌方法。
机械性非接触式搅拌的主要原理是反应器在直立下围绕原点作左右摆动,或者圆周运动。这种由反应器本身的运动而带动里面固液两相混合的方法克服了接触式搅拌带来的缺点,合成产量和纯度也明显好于用氮气鼓泡的diyi代合成仪。所以机械性非接触式搅拌成为了多肽合成仪的主流。但是由于这种搅拌方法不能真正消除反应死角,所以科学家们并没有满足而停下他们追求wan美的脚步。
第三代多肽合成仪:
其反应器转动方式有别于前两代的多肽合成仪,即反应器上方相对固定,而下方作圆周360度快速旋转,带动反应器里的固液两相从底部向上作螺旋运动,一直达到反应器的Z上方,真正做到了无死角。
无死角多肽合成仪的另一种方式是反应器在数控马达的带动下作上下180度的翻转运动。固相和液相在运动过程中不断从反应器的一端到达另一端再返回来。一般用这种仪器合成出来的肽纯度是Zgao的,且适合于扩大生产。
多肽合成仪的特点
多肽合成仪的特点:
多肽固相合成法是多肽合成化学的一个重大的突破。它的Zda特点是不必纯化中间产物,合成过程可以连续进行,从而为多肽合成的自动化奠定了基础。目前的多肽合成仪,基本都是用的固相合成原理。
多肽合成仪的合成过程:
基于Fmoc化学合成,先将所要合成的目标多肽的C-端氨基酸的羧基以共价键形式与一个不溶性的高分子树脂相连,然后以这一氨基酸的氨基作为多肽合成的起点,同期它的氨基酸的羧基(已经活化)作用形成肽键,不断重复这一过程,即可得到目标多肽。根据多肽的氨基酸组成不同,多肽后处理方式不同,纯化方式也有差异。
多肽合成仪的常用载体:
多肽分子量很小,免疫应答效果差,需要与载体偶连以提高免疫源性。载体大多数为高分量的蛋白质,常用的载体有KLH(铜蓝蛋白),BSA,OVA等。KLH为shou选。ELISA测定多肽抗体效价时,有些多肽直接包板有困难,需要与BSA等偶连后再包板。
合成多肽如何存储:
多肽是粉末状,一般为灰白色,组成不同,多肽粉末的颜色有差异。多肽一般需要避光保存。长期保存应保存在-20度,短期可以保存在4度。可以短时间室温运输。
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