大肠杆菌的分离方法
大肠杆菌是一种不同的原核生物,其无芽孢,能运动,周生鞭毛,大小0.5×1~3μm。其通常不致病,是人和动物肠道中的常居菌,在一定条件下可引起肠道外感染。下面就让小编为你介绍一下大肠杆菌的两种分离方法。
大肠杆菌有两种分离方法,分别是划线分离法以及涂布分离法。
在无菌操作台上用接种环取菌后在固体培养基的平板上连续划线。这种方法叫做划线分离法。
一、划线分离操作步骤
1.使用火焰灼烧接种环,直到烧红接种环为止。
2.在火焰旁将接种环冷却,并将棉塞打开。
3.将试管口通过火焰。
4.往菌液里伸入已经冷却的接种环获取菌液。
5.将试管口通过火焰,并将棉塞塞上。
6.使用左手将皿盖打开一条缝隙,使用右手往平板内迅速伸进去,划三到五条平行线,然后将皿盖盖上。千万要当心,不能将培养基划破如果滑坡了会导致划线不均匀,使得分离单菌落的目的难以达到。而且在划破的地方存留的单细胞不能产生规矩的菌落,菌落会沿着划破的地方生长,会产生一个条状的菌落。
7.使用火焰灼烧接种环,等到接种环冷却后,由diyi区域的尾部向第二区域划线。重复上述操作,往三、四、五区域内划线。需要留心的是不能将diyi区域和Z后一区域的划线相连。
8.倒置平板,然后放入培养箱中培养。
划线分离的注意事项
1.只能用接种环沾取一次菌液,却需要在培养基的不同地方连续划线多次。
2.划线不能将diyi区域和Z后一区域的划线相连。
3.在划线后,培养皿需要倒置培养12-24小时。
将培养的菌液稀释到一定的倍数,然后在固体培养基上加上一定量的稀释液,再在培养基平面上用玻璃刮刀涂布。这种方法叫做涂布分离法。
二、涂布分离操作步骤
1.取6支试管,分别注入9毫升水并进行灭菌,然后根据101-106顺序编号标记。
2.将移液管灭菌,使用移液管吸取1ml的培养液注入101试管里,使用手指轻压移液管的橡皮头,吹吸三次,让菌液和水充分混合均匀。
3.由标记101的试管中吸取1毫升稀释液,注入102试管里,再从102试管里吸取1毫升稀释液注入103试管里,以此类推,一直到Z后一支试管的稀释完成。
划线分离和涂布分离的优缺点
划线分离:方法简单,然而分开单菌落比较困难。
涂布分离:分开单菌落比较容易,但实验操作比较复杂。
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