大肠杆菌的一般的培养方法
大肠杆菌(Escherichia coli,E.coli) 革兰氏阴性短杆菌,大小0.5×1~3微米。周生鞭毛,能运动,无芽孢。能发酵多种糖类产酸、产气,是人和动物肠道中的正常栖居菌,婴儿出生后即随哺乳进入肠道,与人终身相伴,几乎占粪便干重的1/3。下面让小编为你介绍一下大肠杆菌的一般培养方法。
培养基准备:
使用牛肉膏蛋白胨培养基,组成成分:琼脂15~20g,Nacl5g,牛肉膏3g,蛋白胨10g,水1000mL,PH值7.4~7.6。
配置步骤:
1.称药品
计算实际用量,根据配方称取各种药品然后将它们放入大烧杯中,可以将牛肉膏放在小烧杯或表面皿中进行称量,用热水溶解后往大烧杯里倒入。也可以将牛肉膏放在称量纸上称量,之后放入热水中,使得牛肉膏与称量纸分离,然后立即将纸片取出,蛋白胨非常容易吸潮,所以称量时动作要快。
2.加热溶解
将低于所需要的水量加入到烧杯中,然后将在石棉网上放上烧杯,用小火加热,并且用玻棒搅拌,等到药品完全溶解后,再往烧杯内加水到所需要的水量。如果配制固体培养基,那么向已经溶解的药品中加入称好的琼脂,再加热融化,这个过程,需要持续搅拌,避免防琼脂糊底或溢出,Z后补充失掉的水分。
3.调pH
对培养基的pH进行检测,如果pH偏酸,那么可以滴加NaOHlmol/L,一边滴加一边搅拌,并且随时用pH试纸对的pH进行检测,一直到pH在所需pH范围为止。如果pH偏碱,那么就用1mol/LHCl进行调节,一般在加琼脂之前进行pH的调节,需要注意pH值不要调过头,避免因为回调而对培养基内各离子的浓度产生影响。
4.过滤
可以使用滤纸过滤液体培养,可以用4层纱布对固体培养基进行趁热过滤,对于观察培养有好处。然而如果是供一般使用的培养基,那么可以省略这一步。
5.分装
根据实验要求,能够通过试管或三角瓶内对配制的培养基进行分装,为了防止培养基沾在管口或瓶口上而导致污染,分装时可以使用漏斗。分装量:固体培养基大约是试管高度的l/5,在灭菌后制成斜面,往三角瓶内进行分装,容积不超过其的一半Z为恰当。半固体培养基占试管高度的1/3比较适合。灭菌后垂直待凝。
6.加棉塞
用普通棉花(非脱脂棉)制作的棉塞塞在试管口和三角瓶口上,要选择形状,大小和松紧度均合适的棉塞,为了起到避免杂菌侵入和有利通气的作用,棉塞四周要紧贴管壁,不留缝隙。棉塞总长约3/5要3/5塞入试管口或瓶口内,防止棉塞脱落。一些微生物需要更好的通气,那么需要使用8层纱布制成通气塞,有时候也能用试管帽或塑料塞代替棉塞。
7.包扎
为了避免灭菌时冷凝水沾湿棉塞,需要在加塞后用一层牛皮纸或双层报纸将三角瓶的棉塞外表面包住。如果养基分装于试管中,那么应该将5支或7支放在一起,再用牛皮纸将棉塞外包住,用绳扎好,然后将培养基名称,组别,日期用记号笔注明。
8.灭菌
在121.3℃湿热灭菌上述培养基20min,如果由于特殊情况不能及时灭菌,那么应该暂时存放在冰箱里。
9.无菌检查
在37℃温箱中培养24~48h灭菌的培养基,无菌生长立刻就能够使用,或者将其在冰箱或清洁的橱内贮存备用。
大肠杆菌的培养:
在37摄氏度条件下进行48到72小时的恒温培,由于不同的接种和具体培养条件不同,所以明显的菌落通常均是在2天以后才会长出。乳白色,圆形,菌落边缘整齐,表面光滑,表面和背面颜色一致是菌落的特征。
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