蛋白质的分离纯化的步骤
通常,对某一特定蛋白质的分离纯化的步骤包括前处理、粗分级、细分级三步,下面就让小编带你了解一下。
前处理:
对于某种蛋白质的分离纯化,首先需要通过溶解的状态从原来的组织或细胞中释放出蛋白质并且使原来的天然状态保持不变,从而使生物活性不丢失生。之后,按照不同的情况,选择适当的方法,破碎掉组织和细胞。可以使用电动捣碎机或匀浆机破碎或超声波对动物组织和细胞进行处理破碎。
如果所要的蛋白主要在如细胞核、染色体、核糖体或可溶性细胞质等某一细胞组分集中,那么可以通过差速离心的方法分开它们,对该细胞组分进行收集以作下步纯化的材料。如果所要蛋白是与细胞膜或膜质细胞器结合的,那么必须使用超声波或去污剂解聚膜结构,然后使用适当介质来提取。
粗分离
当获得蛋白质提取液(有时还杂有核酸、多糖之类)以后,选择合适的方法来分离所要的蛋白与其他杂蛋白。通常使用盐析、等电点沉淀和有机溶剂分级分离等方法来进行这一步的分离。这些方法不但操作简单,而且能够处理很多,既可以将大量的杂质除去,又可以使蛋白溶液浓缩。一些蛋白提取液体积比较打,使用沉淀或盐析法浓缩又不适用,那么进行浓缩的方法可以是超过滤、凝胶过滤、冷冻真空干燥或其他方法。
细分离
样品在进行粗分级分离以后,通常只有很小的体积,以及去除了绝大多数的杂蛋白大部分。通常使用包括凝胶过滤、离子交换层析、吸附层析以及亲和层析等层析法来进行进一步纯化。作为Z后的纯化步骤选择包括区带电泳、等电点聚焦等电泳法也很有必要。蛋白质分离纯化的Z后步骤结晶,结晶过程不能够使蛋白一定是均一得到确保,然而只有在溶液中某种蛋白在数量上占有优势时才能有结晶形成。
离子层析法
当被分离的蛋白质溶液流经离子交换层析柱时,会在离子交换剂上吸附带有与离子交换剂相反电荷的蛋白质,之后通过对pH进行改变等方法洗脱吸附的蛋白质。
有机溶剂提取
与水互溶的有机溶剂(如甲醇、乙醇)可以显著降低一些蛋白质在水中的溶解度,并且在一定的离子强度、温度以及PH值下,导致蛋白质沉淀的有机溶剂的浓度不一样,所以蛋白质的分离纯化能够通过对有机溶剂的浓度的控制来实现。在室温下,有机溶剂不但能够导致蛋白质的沉淀,而且会变性。所以,一般需要首先冷却,有机溶剂,之后为了避免局部浓度过高,不断搅拌并且将有机溶剂加入。能够在很大程度上解决蛋白质的变性问题。
全部评论(0条)
推荐阅读
-
- 蛋白质的分离纯化的步骤
- 通常,对某一特定蛋白质的分离纯化的步骤包括前处理、粗分级、细分级三步,下面就让小编带你了解一下。
-
- 蛋白质纯化的原则
- 蛋白质纯化系统用于蛋白质的分离纯化,蛋白质的分离纯化在生物化学研究应用中使用广泛,是一项重要的操作技术。 一个典型的真核细胞可以包含数以千计的不同蛋白质,一些含量十分丰富,一些仅含有几个拷贝。
-
- 蛋白质纯化方法-色谱法
- 蛋白纯化中最常用的一种方就是色谱法(chromatography),这种方法除了能够将大量的纯化蛋白质制备出来,还能够使蛋白质的生物学活性得以保持。
-
- 蛋白质纯化方法-亲和层析
- 蛋白质的分离纯化在生物化学研究应用中使用广泛,是一项重要的操作技术。 一个典型的真核细胞可以包含数以千计的不同蛋白质,一些含量十分丰富,一些仅含有几个拷贝。
-
- 蛋白质纯化方法-沉淀法
- 沉淀法又叫做溶解度法。通过各种物质的结构差异性来使溶液的某些性质得到改变,进而改变有效成分的溶解度,为其纯化生命大分子物质的基本原理。
-
- DNA提取过程中分离纯化方法
- 核酸提取仪核酸提取仪是应用配套的核酸提取试剂来使得样本核酸提取工作自动完成的仪器。其在环境微生物检测、食品安全检测、输血安全、法医学鉴定、疾病控制中心、生物学研究以及畜牧业等多种领域得到广泛地应用。
-
- 蛋白质纯化方法-电泳方法
- 蛋白质的分离纯化在生物化学研究应用中使用广泛,是一项重要的操作技术。 一个典型的真核细胞可以包含数以千计的不同蛋白质,一些含量十分丰富,一些仅含有几个拷贝。
-
- 蛋白质纯化方法-盐析方法
- 蛋白质的分离纯化在生物化学研究应用中使用广泛,是一项重要的操作技术。 一个典型的真核细胞可以包含数以千计的不同蛋白质,一些含量十分丰富,一些仅含有几个拷贝。
-
- 蛋白质纯化方法-聚焦层析
- 聚焦层析亦是一种柱层析,所以,和其他的层析相同,其亦是将缓冲交换剂作为固定相,将缓冲剂作为流动相。
-
- 蛋白质纯化方法-层析方法
- 蛋白质的分离纯化在生物化学研究应用中使用广泛,是一项重要的操作技术。 一个典型的真核细胞可以包含数以千计的不同蛋白质,一些含量十分丰富,一些仅含有几个拷贝。
-
- 核酸纯化技术及蛋白质的去除
- 核酸提取仪是应用配套的核酸提取试剂来使得样本核酸提取工作自动完成的仪器。其在、输血安全、法医学鉴定、疾病控制中心、临床疾病诊断、生物学研究等多种领域得到广泛地应用。
-
- 蛋白质纯化的主要方法及注意事项
- 蛋白质的分离纯化在生物化学研究应用中使用广泛,是一项重要的操作技术。 一个典型的真核细胞可以包含数以千计的不同蛋白质,一些含量十分丰富,一些仅含有几个拷贝。
-
- 蛋白质印迹优点、原理和步骤
- 免疫印迹又叫做蛋白质印迹,是通过抗原抗体的特异性结合来对复杂样品中的某种蛋白进行检测的方法。此方法是一种新的免疫生化技术,其是基于凝胶电泳和固相免疫测定技术发展出来的。
-
- 核酸提取过程介质纯化方法和不同类型核酸的分离
- 核酸提取仪是应用配套的核酸提取试剂来使得样本核酸提取工作自动完成的仪器。其在、输血安全、法医学鉴定、疾病控制中心、临床疾病诊断、生物学研究等多种领域得到广泛地应用。
-
- 毛细管电泳的分离模式
- 毛细管电泳: 将高压直流电场当作驱动力,将弹性石英毛细管当作分离通道,以样品中各组分的淌度(单位电场强度下的迁移速度)和分配行为的不同作为依据来分离各组分的方法。
-
- 大肠杆菌的分离方法
- 大肠杆菌是一种不同的原核生物,其无芽孢,能运动,周生鞭毛,大小0.5×1~3μm。其通常不致病,是人和动物肠道中的常居菌,在一定条件下可引起肠道外感染。
-
- 高盐沉淀蛋白质醇沉淀方法和同类核酸的分离
- 核酸提取仪是应用配套的核酸提取试剂来使得样本核酸提取工作自动完成的仪器。其在、输血安全、法医学鉴定、疾病控制中心、临床疾病诊断、生物学研究等多种领域得到广泛地应用。
-
- 微生物鉴定微生物的分离方法
- 在自然界中,微生物混杂在一起,如果想要得到所需要的菌种,必须从中分离出它们。在保存菌种时如果菌种不小心受到污染,也需要对菌种进行分纯。
-
- 影响毛细管电泳仪的分离因素
- 影响毛细管电泳仪的分离因素包括缓冲试剂的选择、缓冲体系pH、分离电压、温度、添加剂、进样。。下面具体了解一下影响毛细管电泳仪的分离的因素有哪些?
-
- 凝胶净化系统分离原理
- 凝胶净化系统是基于凝胶渗透色谱原理根据分子体积的大小来对复杂样品进行分离和分段收集,可以将样品中的大分子基质以及小分子干扰物质有效地去除,使得后续分析的灵敏度与准确性提高,使得分析仪器的使用寿命延长。
①本文由仪器网入驻的作者或注册的会员撰写并发布,观点仅代表作者本人,不代表仪器网立场。若内容侵犯到您的合法权益,请及时告诉,我们立即通知作者,并马上删除。
②凡本网注明"来源:仪器网"的所有作品,版权均属于仪器网,转载时须经本网同意,并请注明仪器网(www.yiqi.com)。
③本网转载并注明来源的作品,目的在于传递更多信息,并不代表本网赞同其观点或证实其内容的真实性,不承担此类作品侵权行为的直接责任及连带责任。其他媒体、网站或个人从本网转载时,必须保留本网注明的作品来源,并自负版权等法律责任。
④若本站内容侵犯到您的合法权益,请及时告诉,我们马上修改或删除。邮箱:hezou_yiqi
参与评论
登录后参与评论