合成多肽的方法
合成肽技术(techniques for peptide synthesis)用化学手段将氨基酸依次定向地缩合成多肽或蛋白质的技术。大多数天然多肽和蛋白质都由a-氨基酸构成。氨基酸分子内可有3个化学活泼的基团即侧链、氨基及羧基,与α-碳原子共价连接。
在1963年,美国洛克菲勒大学教授Bruce Merrifield 发明的多肽固相合成技术(SPPS)是多肽合成领域的一个重大突破,对化学,生化,医药,免疫和基因科学等学科和领域都起了巨大的促进作用。 他本人也因此项发明荣获1984诺贝尔化学奖。
目前化学合成肽有两类基本方法:
液相法
液相法指的是反应物在完全溶解状态下作均相缩合。因为每步缩合产物均能够通过结晶或洗涤过程将副产物去除,所以液相合成肽具有比较高的质量,然而操作繁琐,产率偏低以及耗费时间。1965年ZG科学家通过这种方法将结晶牛胰岛素合成了。液相法工艺依然被催产素(一个九肽)的工厂生产流程所采用。
固相法
其中的一个反应物取固相状态。反应产物由于共价而和树脂连接,从而能够通过过滤法将未反应物回收并洗涤除去,因此,操作非常简单,机械化和规范化非常方便。实际上,固相多肽合成仪得到了非常广泛的应用。树脂上不断积累副反应物,去除很困难是这种方法的缺点。并且副产物随着反应次数增多也就是目标肽变长积累的越多,Z终使得不能够从杂质中分离出主产物。因此,尽管迈利菲尔特(R.B.Merrifield)因为创立了这种方法而获得了诺贝尔化学奖,然而这种方法只能够在30肽左右的合成水平上使用。为了将这一缺点克服,有人利用液相法合成高纯度的小肽进行固相缩合,减少总的固相缩合次数,这就是固相片段缩合法。ZG利用该方法已经将蛇毒膜毒素和结晶胰岛高血糖素等大肽和蛋白质成功地合成了。除此之外,利用蛋白水解酶的逆反应也能够使得某些特定的肽键酶促合成。
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