DNA合成仪结构
用于和DNA或RNA结构类似的寡核苷酸合成的自动化仪器,即是DNA合成仪。通常用于固相合成法,每次在长的寡核苷酸链上接入一个核苷酸。加入每一个核苷酸均通过相同的化学反应和相应的嘌呤或嘧啶碱基衍生物作用。仪器不同,所用化学反应和操作细节也会随之发生变化。DNA合成的磷酸酰胺法得到了非常广泛的应用。
结构和性能
1、辅助真空
隔膜形成一个圆顶小空隙为适当运行阀块的关键。每次打开电磁阀时,在隔膜的螺线管一侧形成辅助真空,使一圆顶空隙形成在隔膜。
2、合成柱
起始在一次性的柱子中装有结合在载体(一般为CPG)上的核苷酸,不仅有柱体,而且还有2个固定过滤板和2个接头,由惰性材料制成所有的部件。
3、流路节流阀
小量的试剂长期在流路节流阀中结晶,会阻塞流路。
4、废液和排气
废气提高排气管往适当的排气装置导入,废液瓶能够在在低于仪器的附近工作台上或者合成仪附近的地板上放置。其是一个空立着的10L的聚苯乙烯容器,为大多数化学试剂输送的终点站。
5、电导池
一空隙隔开的两个电极组成了电导流动池,应用一小电压在空隙之间。其设计是为了对每个DNA合成循环内释放的DMT阳离子的总电导进行测定。
6、电池
DNA合成仪通常带有能够使用几年的锂电池。
7、控制器
软件、微处理机、显示屏幕、键板及相关的电子部件为控制器的主要部分,其对合成仪的所有活动进行指导和初始化。
8、试剂驱动系统
DNA 合成仪通常采用一定压力的惰性气体(氩气)或氮气及电磁阀组;来对液体试剂进行驱动,液体试剂也可以使用氦气来进行驱动。如果slider block滑块系统及精密蠕动泵为合成仪所采用,那么驱动系统也可以不采用气体。当采用气体及电磁阀来对液体试剂进行驱动的时候,首先必须将管路系统电磁阀前段,含试剂瓶组中压力加到规定气压,电磁阀手动或利用合成管理软件打开(通常数ms为打开时间数),就能够将液体试剂驱动所需的合成柱中。
9、试剂和碱基瓶组
碱基瓶组及试剂瓶组通常为DNA合成仪所具备。碱基瓶组通常至少为4个标准碱基(A/C/G/T),同时和多个特殊碱基瓶位搭配,在荧光标记等合成时使用。试剂瓶组通常至少为6个,包含洗脱乙腈(ACN)、氧化剂(OXI)、盖帽试剂B(capB)、盖帽试剂A(capA)、活化剂(act)和脱保护剂(Deb)。每种仪器通常均会多设置1-2个试剂瓶位,在合成特殊产物时使用。
10、压力管路及输送管路
通常而言,保持内外气体隔绝是DNA 合成仪的原则,所以不管碱基瓶还是试剂瓶都应当密封以便保持一定的压力。特氟龙导管,直径为1/16—1/8吋,是目前为止wei一采用的压力管路。每个瓶子均从瓶盖插塞通入一个输送管道和氩气压力管道。1—8号瓶其压力管道对于亚磷酰胺也作为排气管。输送管需要伸到瓶的底部,氩气管却要在液面以上。当正确设置打开阀门时,氩气对储液瓶上部空间加压,往输送管中推进液体,流到其目的地。
11、亚磷酰胺瓶排气
亚磷酰胺瓶除了加压外,都是用压力排气管排气的,在仪器中放入亚磷酰胺之前,需要将空气用氩气排尽,使其净化。净化是气体通过输送管输送,当瓶内进入气体时,经压力排气管排出空气。废液瓶的出口必须与大气相通。需要使排气管通到通风柜得以确保。如果阻塞排气管,那么会有反压产生,会YZ试剂和溶剂的输送。
12、输送电磁阀
两个试剂阀块(8碱基仪器有3个)及2个或4个柱阀块包含于试剂输送系统中。气体和化学试往柱子及出口流入通过阀块来进行控制。试剂和溶剂(不包括除亚磷酰胺和四唑)均同时往所有活化柱输送。当有多个活化柱时,通过对对流速的细微变化,来对每个柱子的输送次数自动调节来补偿。在废液口、DMT收集口,或DNA收集瓶中通过每一个5—端口柱阀块导入流出物,其也对除去或冲洗柱内和柱阀块内的试剂的氩气进行控制。
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