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微生物鉴定系统

2024-06-11 14:55:02

当前位置:仪器网> 知识百科>微生物鉴定系统

微生物鉴定系统

微生物鉴定系统是一种操作方便、快捷、自动化、标准化程度高的微生物自动分析仪器。适用于医院,疾病防疫,畜牧,食品等领域的微生物检验。微生物鉴定系统通过DNA测序对微生物进行物种鉴定(菌种鉴定)是比传统生化鉴定更先进的鉴定方法。DNA测序不依赖菌种本身特点,对所有菌种均可使用。比传统生化鉴定更加快速,准确。微生物物种鉴定包括细菌16srDNA鉴定和真菌26S/28SrDNA鉴定、真菌ITS鉴定。通过大量实验优化的通用引物适用于99%以上的微生物,鉴定成功率在95%以上。

最新微生物鉴定系统文章

微生物鉴定系统的工作原理
微生物鉴定系统近年来得到了快速发展,可快速准确地对临床数百种常见分离菌进行自动分析鉴定和药敏试验。目前微生物鉴定系统已在世界范围内临床实验室中广泛应用。[查看全部]

微生物鉴定系统的工作原理

微生物鉴定药敏分析仪原理

各种病原菌主要是真菌、肠球菌属、革兰氏阳性菌及革兰氏阴性菌等可以通过微生物鉴定和药敏分析仪器鉴定出来,而且该仪器还能够同时做抗jun药物敏感性试验从而对临床医生作出正确的病原学诊断并制定zhi疗方法有所帮助。


全自动微生物鉴定和药敏分析类仪器与自动化、微机化以及先进的微生物检验方法相结合,能够同时做细菌鉴定和药敏试验,可以在临床上对大多数细菌进行快速鉴定和药敏实验。


细菌鉴定原理:

使用传统的比色法和快速荧光法。不同的测试卡是以不同类别细菌的理化性质不同为依据设计的,每一张卡包含多项生化反应。因为细菌生长利用底物而引起的透光度变化或者细菌因分解底物造成PH值改变都能够使用仪器通过光电比色法来进行测定。在测试卡的小孔中加入酶底物,让它和细菌产生的酶相结合,这就是荧光法。仪器可以在较短的时间内对细菌结合不同生化底物所产生的发荧光的物质进行分析,细菌胞外酶是由读数器测定荧光强度来判定。使用荧光技术鉴定细菌的速度能够提高4- 8倍。两个小时以内能够得出鉴定报告。细菌鉴定有多种不同类型的实验底物。使用的测试卡和试剂与使用的仪器的品牌是互相对应的。显色底物和荧光底物都属于以酶为基础的反应底物。糖类底物和化合物底物都属于以微生物生长为基础的底物。糖类底物和化合物底物,还有混合底物属于以微生物生长为基础的底物其这些底物由于与各种细菌发生氧化、降解及水解反应,产生荧光物质或者颜色的变化,细菌的菌型通过显色和荧光强度的变化来鉴定。仪器会自动选择底物进行分析。


药敏试验方法:

药敏试验有比浊法和荧光测定法两种测定方法。以药敏试验的判读标准为依据。 每一种药物设计了多个稀释梯度,每一种抗生素可以用3- 8个测试孔来对Zdi抑jun浓度进行测定,将一定浓度的菌悬液加入到孔中。为了方便对不同细菌配置菌悬液的浓度进行测定,系统配有专用光电比浊仪。孔内微生物生长形成的小颗粒或聚集成的团块会导致浊度变化,各个测试孔的浊度变化是由仪器采用光电比浊法进行测定,每隔一定时间读取数据一次,读数器测得的吸光度值会有差异,从而使得待检菌在不同浓度药液及不同药物中的生长率能够被获取。在含有各种浓度的抗生素的反应卡中,加入待测细菌的菌悬液,经过一定时间孵育后使用光电比浊法对其透光率进行测定,获取其吸光度值,如果细菌生长,浊度就会增加,吸光度值就会增大,说明细菌不会被该孔内的抗生素所yi制,相反就表明该孔内的抗生素能够yi制细菌,该种抗生素对此菌的MIC值是指用Z小的药物浓度依然可以对细菌的反应孔进行yi制。使用荧光技术测定时,将荧光底物加入到肉汤中,大多数菌种的MIC值均可以在5小时内判读出来并且能够依据相应标准报告其药物敏感结果( S、I、R) 。MIC卡每种药物都有多个稀释度,仪器在每读取一次数值后会自动比较所测取的数据与存储在硬盘中的菌种资料库标准菌生物模型,然后经过电脑分析得出鉴定的结构,报告能够通过打印机打印出来。



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微生物鉴定系统的选购指南

微生物鉴定系统的选购指南

  微生物鉴定系统使细菌鉴定过程规范化和程序化,其在临床实验室有着重要应用,在感染性疾病的诊断和ZL过程中发挥着越来越重要的作用。

微生物鉴定系统的原理及性能

  微生物鉴定系统使细菌鉴定过程规范化和程序化,将细菌对底物的生化类型与已建立数据库类型相比较。反应准确性受接种物浓度、孵育条件和试验解释的影响。测试原理主要是利用物质产生pH变化,能释放色源或荧光源复合物的酶学反应,四氮唑标记碳水化合物代谢活性的产生、挥发或非挥发酸产生,或可见生长。

微生物鉴定系统的原理及性能.jpg

微生物鉴定系统的选择标准

  微生物鉴定系统通常十分昂贵,购买之前须咨询有关专家,考虑如下问题。需要考虑的问题包括:

  ①为什么需要一个新系统?新系统能否给实验室或医院带来效益?

  ②是否有能力维持该系统?资金足够吗?

  ③是否真正需要“快速”系统?早出报告能及时送到医生处并采取必要的诊疗措施?

  ④根据什么做Z后的决定?对系统还存在什么疑问?

  ⑤购买还是租用,以及试剂消耗量的偿还方式?

  上述诸点明确之后,便可寻找合适的微生物鉴定系统。通常在没有充分把握的情况下,Z好不要成为一种新产品的用户。向厂家索要尽可能详细的资料,看该系统能够鉴定细菌种类是否满足临床需要。了解和咨询过程中,须侧重了解如下诸方面的情况:

  ①系统总的质量如何?公司的售后服务如何?

  ②鉴定准确度如何?抗生素敏感试验准确度如何?(通过文献资料来证明)。

  ③试验准备和完成试验时间多长?完成试验时间及试验成本?质量控制时间和成本?

  ④试剂金保存期多长?贮存要求如何?贮存空间足够吗?

  ⑤本地区还有谁使用同样的系统?打印的报告单是否适用?系统所提供功能实用吗?

  ⑥系统能与我们实验室的计算机系统相互配合吗?系统是否与本实验室计算机兼容?

  ⑦系统可扩展吗?软件如何升级?免费吗?是否易受电压不稳定的影响?

  ⑧需要多长时间的技术培训?厂家可提供多长时间的技术培训?

  ⑨要多少空间?系统重多少?将引起我室工程结构问题吗?需要特殊电力供应吗?

  如果可能,走访一下规模相同的实验室用户,了解该系统的性能。询问他们是否喜欢?是否还会购买它?安装需要多长时问?经常出故障吗?技术服务如何?与使用者讨论服务能力和试验系统的可靠性。

  选择一个已完全被评估的系统,且它在鉴定你医院中常见和不常见细菌准确性超过90%,常见分离株鉴定准确性应不低于95%。应当注意,虽然营养要求更高的微生物已被列入制造商的数据库,但一些系统是不能准确鉴定。对于能做抗生素敏感试验的系统须考察抗生素敏感的准确度。因为抗生素种类繁多,抗生素一微生物相互作用很复杂,正在出现的新耐药机理问题,准确度的评价更须认真仔细。

微生物鉴定系统的选择标准.jpg

微生物鉴定系统的评价

  评价微生物鉴定系统,首先应从己发表文献中寻找diyi手证据。要特别注意其实验设计是否科学,详细考察文中的数据,看是否确实支持其结论。这很重要,不要只看摘要,否则可能会得出错误结论。在以“金标准”或另一系统作为参照标准评价某个系统时,要十分注意实验设计的严谨,否则也会得出错误结论。当介绍新产品时以其它商业产品为金标准可能是可接受的,但这种比较将不能揭示系统真实的准确性,因为所有商业产品都有一些弊端或弱点。

  由于鉴定系统给出的是定性结果,评价系统优劣的指标是准确度。确定准确度往往需要几百株微生物的试验,这对于小规模实验室是一项很困难的工作。对这类实验室,要求实验室人员按系统的要求操作,需达到文献中的准确度。新系统的准确度应该与“金标准”或参考方法的符合率在95%,不能低于90%。如果是以新系统取代原有系统,新系统的准确度必须高于原系统。

  较全面评价一个新系统,需包括以下内容:

  ①新系统与参考方法做平行试验(Z少50次),测定质控菌株,持续1周。两种方法的符合率在90%以上,不符合结果应由参考实验室判定。

  ②测定2~3种常见的已知菌株,小型实验室测50次,大型实验室测100次。

  ③选择12~15种微生物20~50株进行鉴定,其结果与参考方法相比较。

微生物鉴定系统的局限

  微生物鉴定系统准确性仅受现存数据库版本限制,如果版本可能过时了,实验室技术人员需向医生解释不能做某个分析要求或结果可能被推迟或甚至不准确的原因。因此数据库必须经常修正容纳新命名的菌种。

  当出现不常见生化谱或者出现不期望的药敏谱时,实验室操作手册必须规定候补方法来完成准确鉴定,否则分离株应送至参考实验室进行分析。另外还应注意制造商的信息交流和其它使用者遇到的潜在问题。

  总之,微生物鉴定的自动化可以缩短微生物鉴定时间,并可促进实验室内和实验室间的标准化,但是它的试剂消耗费用、一次性设备投入都很高,在某些情况下其结果还需用候补方法来确认,因此在选择系统时需从多方面进行全面的、详细的考察,同时应做较全面的评价,得出真实可靠的结论。今后仍将致力于发展更短分析时间的试验方法,使快速报告能在更短的时间内产生。

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微生物鉴定方法

微生物的分类和鉴定的现代方法

微生物是指个体小到难以用肉眼观察的所有微小生物的统称(有些微生物是肉眼可见的)。真菌、细菌、病毒和一些小型的原生生物、显微显微藻类等一大类生物都属于微生物。下面就让小编带你了解一下DNA碱基组成对微生物的分类和鉴定的原理。


DNA碱基的比较与进行核酸分子杂交和结构形态以及生理生化特性的比较不一样,其是直接比较不同微生物间基因组的差异,所以鉴定的结果的可信程度更加旳高。

DNA碱基组成

DNA碱基组成是所有生物的一个稳定的特征,所以即使个别基因发生突变,碱基组成也不会发生十分明显的变化。分类学上各种生物的DNA碱基组成特征是由G+C占全部碱基的克百分比来表示。由于所有生物GC%均有特定的范围,所以DNA碱基组成特征能够被用作微生物分类鉴定的指标。细菌的GC%在百分之二十五到百分之七十五之间,变化的范围Zda,所以DNA碱基组成特征对于细菌的分类鉴定更加的合适。对于表型特征很难分辨的细菌可以用GC%测定,GC%测定还能够对表型特征分类的合理性进行检验,能够从分子水平上对于物种的亲缘关系进行判断。


使用原则

G+C含量的比较在分类鉴定中主要用来否定。任何一种生物均有一定的碱基组成,如果生物之间的亲缘关系近,那么它们的G+C含量应该相似。如果不同生物之间有较大差别的G+C含量,就表面它们亲缘关系远。然而生物之间G+C含量相似却并不代表它们的亲缘关系近。同种的不同菌株G+C含量差别应该低于百分之4到5;同属不同种G+C含量差别应该再百分之10-15以下;G+C含量对于种、属、科的分类鉴定具有十分重大的意义,它已经被当做建立新的微生物分类单元的一项基本特征。如果两个菌株它们的形态以及生理生化特性十分的相似,若它们的G+C含量的差别在百分之5以上,那么它们肯定不是同一个种,如果它们的G+C含量的差别在百分之15以上,那么它们不仅不是同一个种而且不是同一个属。G+C含量对于疑难菌株鉴定、新种命名以及建立一个新的分类单位来说都是一个必不可少的重要鉴定指标。G+C含量作为建立新分类单元的基本特征和将G+C含量差别较大的种类从某一分类单元中排除是其分类学的意义。


核酸分子的杂交

生物之间亲缘关系的远近直接通过不同生物的DNA碱基的排列顺序的异同来反映,DNA碱基的排列顺序差异越小,那么它们的亲缘关系也就越近,反之,DNA碱基的排列顺序差异越大,那么它们的亲缘关系也就越远。

不同生物的DNA碱基的排列顺序的相似性能够通过核酸分子杂交间接比较

a、DNA-DNA杂交:亲缘关系相对较近的微生物之间的亲缘关系的比较。

b、DNA-rRNA杂交:亲缘关系相对较远的微生物之间的亲缘关系的比较

c、核酸探针:采用特异性探针,它的用途是细菌等的快速鉴定。





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微生物鉴定技术

微生物鉴定药敏分析仪结构

菌液接种和封口装置、读数器/恒温孵箱、电脑系统和测试卡等共同组组成了微生物鉴定药敏分析仪。


菌液接种和封口装置起将待测的样品注入测试卡中,然后封口的的作用。不同厂家的仪器采用的技术也各不相同。一些是配有真空加样器用于菌液接种,能够一次完成所有孔的接种。一些仪器采用热切割器进行接种和封口,下面接真空仓,试管中的菌悬液样品接加样管通过弯管与测试卡相连,菌悬液由于真空仓负压的作用被充入到测试卡的每一反应孔中,热切割器产生200℃以上的高温,将接种完菌液的测试卡齐孔在弯管处切断并封闭。重力自加样技术被一些仪器使用,这项技术接种均匀,能够确保没有气泡残留在反应孔中。在仪器内部都装有恒温孵箱和读卡器。通常孵育箱是转盘式结构,有用于放置测试卡的直立的原柱转盘。孵育箱恒温电路是由CPU控制,使得箱内温度保持恒定。在孵育箱内有光电读数器,每块测试卡的每一个孔由光路部分发出的单色光扫描。通过光电比色或比浊测定细菌因分解或利用底物导致的颜色或浊度的变化, 通过读数器将该变化的吸光度值变成电信号,再由电脑分析计算。细菌因分解或利用底物导致的颜色或浊度的变化通过光电比色或比浊来测定,该变化的吸光度值通过读数器读出来,再通过电脑进行分析计算。

发射红、蓝、绿等单色光的发光二极管或卤素灯加滤光片被用作仪器的光源。每隔一定的时间对每块测试卡的各个反应孔进行一次扫描。获取显色反应的吸光度值;荧光底物孔的反应是使用紫外线灯照射来检测。仪器不同,将吸光度信号和荧光信号转变成电信号的光电转换器件不同。光电三极管、光电倍增管及比较先进的电荷耦合器件CCD做光电转换器都属于光电转换器件。


每个反应孔的结果可以通过机内的CPU 自动记录和分析进行每次的判读。在存储器中存储的运算法则按照反应底物种类区分反应时间及判读次数。每个检测孔内微生物是否生成的判断依据是药敏试验通过定量分析浊度或颜色的变化。浊度变化的斜率通过仪器内的微机程序自动计算出来,并且将它和阳性对照孔斜率对比,然后再将ZdiYJ浓度值(MIC)分析计算出来。由于抗生素的种类不同和微生物的种属以及生长的等级不同,仪器的CPU采用的特殊运算法则也不同,微生物是否生长能够较为精确地判断出来。完成大多数药敏实验得出结果只需不到6小时,通常,含有MIC值和药物敏感性S、I、R结果的报告会在Z后一次判读结果后由打印机打印出来。


仪器都带有条码扫描器以便扫描测试卡上的条码,在机内的存储器中录入待测卡的各种信息。卡的功能能够被自动识别,鉴定和药敏能够被区分,能够根据设定的时间自动孵育和读数。


很多强大的软件包都会被安装在电脑系统上:

( 1) 菌种资料库

( 2) 流行病学/院内感染统计软件: 多种流行病学统计报告能够被提供

( 3) 药品管理软件:敏感结果能够通过条件抗生素报告得到,方便对

广谱抗生素的使用的控制,对合理用药进行指导,从而使得耐药菌株的产生变少。并且提供药敏实验结果的标准解释,对临床抗感染ZL进行正确的指导

( 4) 专家系统软件能够帮助解释和检测实验结果。

( 5) 中文报告系统软件。软件还带有数据统计程序, 能对各种统计学进行分析; 能够对不同的统计目的、范围、时间、菌种及药物等流行病学报告进行编辑。


微生物鉴定和药敏分析仪器的应用创造了快速、正确的细菌学报告的基础,是当代临床检验进步的标志之一,使得细菌检验水平获得了一个飞跃。



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微生物相关知识

微生物分类鉴定相关知识概述

微生物的命名

国际法规命名,也就是林奈创造的双名法。学名包括主要部分和次要部分,主要部分是属名加上种名,次要部分是Z初定名人加上后来定名人加上命名时间。次要部分通常可以省略。

属名:属名的首字母需要大写且斜体。属名通常由拉丁词或者拉丁化的其它文字所组成。它被用来表示该属的主要特征。属名有时候可以用人名或者地名来表示。属名在上下文重复出现的情况下,可以进行缩写。

种名:种名是拉丁语中的形容词,它用来表示微生物的次要特征。种名也能够使用人名或者地名来表示种名的首字母不需要大写,但需要斜体。

微生物分类的方法

经典分类法:采用双歧法整理实验结果

数值分类法:对100项以上的各种性状进行测定,用计算机对菌株进行相互比较,从而得到总的相似的值。通常认为同种微生物菌株之间的相似值不小于百分之八十。

遗传分类法:DNA杂交和G+C含量的测定


常用的微生物分类概念

种:亲源关系较近的微生物有机体的集合,它们在进化发育阶段有一定的共同的生理特征和结构形态。现代分类学规定种内菌株的DNA同源性不小于百分之七十、。

亚种:种的进一步细分,通常指的是某一明显的稳定的特征和模式下不同的种。

菌株:来源不同的同种微生物的纯培养,都可以被叫做菌株。

群:某些微生物的特征介于两种微生物之间,我们将这两种微生物和其中间类型统称为一个群。

变种:从自然界分离到的微生物纯种,如果与典型种之间存在某些特征的差别,而这些特征又是稳定遗传的,则可将这一纯种称为典型种的变种。


微生物常用的分类系统

细菌:伯杰式鉴定细菌学手册、细菌系统学手册

放线菌:ZG科学院微生物研究所编著的放线菌目分科、分属检索表

真菌:Ainsworth、Alexopoulos、Smith的分类系统


微生物分类的依据

形态特征:

个体形态:包括微生物的形状、大小、染色体反应等;群体形态:包括微生物的菌落特征、液体培养特点等。

生理生化特征:

指的是代谢产物、营养要求、细胞壁成分等的测定。

生态特征:

微生物间各种相互关系的利用。

遗传特征:

DNA同源性分析以及G+C的含量。

其它:

全细胞蛋白的分析、多位点酶的分析等。


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