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内标法是将一定重量的纯物质作为内标物加到一定量的被分析样品的混合物中，然后对含有内标物的样品进行分析，分别测定内标物和待测物的峰面积/峰高及相对校正因子，从而计算得到被测物在样品中含量的方法。面对成分复杂的基质样品，使用内标法处理和分析样品可在一定程度上使信号波动和定量损失得以矫正，减少进样量或仪器不稳定及样品歧视效应等变化导致的误差，从而提高分析结果的准确度和精密度。一般来说内标法包括两种：类似物内标法和同位素内标法。

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类似物内标法

类似物内标法所选用的内标通常与待测物具有相同的关键化学结构和官能团（如-COOH、-SO2、-NH2等），但在C-H部分又与待测物有差异。类似物内标是原样品中没有的高纯度标准物质，理化性质上与待测物相似。作为外来物，类似物内标在检测中可以与其它组分峰充分分离且不受杂峰干扰。同时在仪器分析过程中，待测物可能会产生损失。但由于内标物一般在上机前加入，与待测物仪器分析条件相同，损失的比例量也相同，所以类似物内标的添加可以在一定程度上消除仪器方面产生的偏差。

在实际应用中，类似物内标法又可分为两种，包括溶剂-类似物内标法和基质-类似物内标法。其中溶剂-类似物内标法是一种较为常见的定量方法，适用范围较广。而基质-类似物内标法主要与化学实验中普遍存在的基质效应有关。基质效应的存在使相同目标物含量的样品，产生的定量结果不一样，利用基质-类似物内标法是消除基质效应的有效手段，如在《中国药典》四部通则2341农药残留量测定法中，就采用了基质-类似物内标法。以药材及饮片（植物类）中禁用农药多残留测定法为例，操作时先制备空白基质溶液，然后加入混合对照品溶液，制备成基质混合对照溶液，在进行仪器分析前，在1mL基质混合对照溶液和1mL供试品溶液中各加入磷酸三苯酯内标溶液0.3 mL，混匀测试，按照内标标准曲线法计算。

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同位素内标法

同位素内标法多应用于质谱分析中，本质上同位素内标与待测物是同一个物质，只是其中的部分元素被同位素取代，如1H→2H、12C→13C等，理化性质基本不变。由于同位素内标一般在样品称样后加入的，可以认为其过程中的损失或者玷污程度与待测物是一致的。由于内标的添加量是已知的，因此，待测物在预处理过程中的回收率，可由已知的同位素内标的回收率来衡量，以此监控每个样品的提取效率。与类似物内标法相同，同位素内标法也包括溶剂-同位素内标法和基质-同位素内标法。

GB 31656水产品兽残检测相关系列标准中多项标准都选用了溶剂-同位素内标法进行定量分析，如《GB 31656.9-2021 水产品中二甲戊灵残留量的测定 液相色谱-串联质谱法》

应用二甲戊灵-D5作为内标。二甲戊灵-D5是二甲戊灵中5个氢原子被氘原子取代后，生成的氘代化合物。从性质上来讲，二甲戊灵-D5与二甲戊灵，仅在分子量上存在不同，其它性质差异不大，因此，在前处理中二甲戊灵和内标二甲戊灵-D5受到的影响程度趋于一致。仪器分析时，虽然二甲戊灵和二甲戊灵-D5保留时间接近，但依靠质谱检测器，可以区分不同分子量大小的离子，从而实现同位素内标和待测物的分离（图1）。由于同位素内标浓度是已知的，可以根据信号响应的比值准确计算出二甲戊灵的浓度。如此，实验方法中变数造成的分析结果偏差，就可以通过同位素内标的添加得到校正。

图1 二甲戊灵（282/212、282/194）、二甲戊灵-D5（287/213）标准溶液谱图

《GB 31656.4-2021水产中氯丙嗪残留量的测定 液相色谱-串联质谱法》中，使用基质-同位素内标法处理分析，并进行定量计算。此方法在样品提取时加入同位素内标以校正提取过程的损失，而标准曲线采用空白基质液配制，上机前加入内标以尽可能减少基质效应的影响。不同情况下盐酸氯丙嗪-D6添加时机的差异，可以保证内标与待测物/对照品的过程一致性。通过同位素内标和基质标准曲线双重手段共同校正，保障定量结果的准确性。

图2 GB 31656.4-2021中部分内容

综上所述，内标法包括类似物内标法和同位素内标法，每种内标方法又包括溶剂内标法和基质内标法。在实际应用中，可以根据具体情况选择适宜的内标方法进行定量分析。