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黄曲霉毒素B1的介绍

黄曲霉毒素B1是黄曲霉毒素一类结构相似的化合物中的一种，对人体及动物的肝脏组织有破坏作用。黄曲霉毒素B1具有强烈的致癌性，已被世界卫生组织（WHO）划定为I类致癌物，其毒性是的68倍，的10倍。黄曲霉毒素B1污染的食物主要有花生、玉米、稻谷、小麦、花生油等粮油食品，且以南方高温、高湿地区受污染情况Z为严重，其耐热性强，280℃才可裂解，故在一般烹调温度下难以破坏。由于其危害性强，在食物中较为常见，因此是国家质检总局规定的大部分食品必检项目之一。

有关黄曲霉毒素B1的食品安全限量规定

食品安全国家标准《GB2761—2017》规定黄曲霉毒素B1在花生、玉米及其制品中Zda限量为20 μg/kg，在稻谷、植物油脂中Zda限量为10 μg/kg，在小麦、豆类及酱油、醋等调味品中Zda限量为5 μg/kg。

逗点生物开发出使用免疫亲和柱法检测大米中黄曲霉毒素B1的含量，平均回收率在82.7%，为客户提供关于黄曲霉毒素B1检测有效的解决方案。

一、实验目的  

本研究利用免疫亲和柱法作为样品的前处理方法，HPLC作为分析方法，检测大米中黄曲霉毒素B1的含量。该方法可简化样品的前处理过程，节省有机溶剂的使用，操作简便。

二、实验目标物    

黄曲霉毒素B1(CAS:1162-65-8)

三、应用范围

本方法适用于大米中黄曲霉毒素B1检测HPLC检测及确证。

四、实验材料   

biocomma® Copure®黄曲霉毒素B1免疫亲和柱3 mL (Cat. No. COAFMB103)

五、实验方法

1、样品提取

称取5.0 g（极ng确到0.01 g）粉碎大米到50 mL离心管，加入20 mL70%甲醇水溶液，涡旋混匀，振荡10 min，4000 r/min下离心5 min，取上清液4 mL于另一50 mL离心管，加水21 mL，混匀待净化。

2、免疫亲和柱净化

(1)将10 mL注射器连接于免疫亲和柱上端；

(2)将待净化液样品液以1-2滴/秒的速度通过免疫亲和柱，弃掉流出的液体；

(3)20 mL水淋洗柱子，分两次淋洗，弃掉流出的液体；

(4)真空吹干柱子中残留水分；

(5)加入2*2 mL甲醇缓慢洗脱亲和柱，流速约为2-3秒/滴；

(6)50℃下氮吹至近干，待衍生。

3、衍生化反应

(1)加100 uL三氟乙酸，200 uL正己烷于待衍生样品液中，40℃水浴振荡15 min；

(2)50℃下氮吹至近干，加1 mL10%乙腈水溶液溶解，0.22 um滤膜过滤，供HPLC分析。

4、HPLC条件  

设   备：Waters Alliance 2695

色谱柱：Inertsustain C18  5um  4.6*250 mm

检测器：2475 荧光检测器

检测波长：激发波长: 360 nm /发射波长: 440 nm

流动相：乙腈：水=25:75

流速：0.6 mL/min   

进样体积 : 20 μL

六、实验结果

1、0.5 ug/kg大米中黄曲霉毒素B1的添加回收结果

表1  0.5 ug/kg大米中黄曲霉毒素的添加回收结果

2、添加水平为0.5 ug/kg大米中黄曲霉毒素B1的液相色谱图

图1  添加水平为0.5 ug/kg大米中黄曲霉毒素B1的液相色谱图 

结论：大米中黄曲霉毒素B1残留检测的平均回收率是82.7%，RSD是2.96%，满足标准要求。