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AUC数据采集建议

来源:贝克曼库尔特商贸(中国)有限公司      分类:商机 2022-11-22 20:28:18 187阅读次数

AUC沉降速率法(AUC-sedimentation velocity, AUC-SV) 通过超速离心将样品沉降至样品池底部,在此过程中扫描样品分布状态,通过分析其随时间的变化过程,通过拉姆方程求解,获得不同组分的沉降性质(见图1)。相信大家在数据采集方面可能存在一些困扰:我到底要采集多少条数据?我该设置如何数据采集频率?相关建议如下:


1、采集的数据条数


Sedfit分析软件数据处理量在1-200条之前,若数据条数超过150条,数据分析时间会明显拉长,特别是在勾选多个选项进行Fit时尤为明显。为了使Fit速度更快,可将resolution设置为50进行“Fit”,待拟合完成后,可将resolution设置为200,进行“Run”,可以大大缩短数据分析时间。Sedfit进行数据分析的关键点在于均匀导入沉降过程中的有效数据(从弯液面到管底),若导入的数据绝大部分是沉底的数据并不是Z 佳的选择。例如,某样品沉降仅需3h,若收集12h数据数据,然后将所有数据均匀导入,则含有四份之三的数据为沉降到底部的无效数据,这一点需要额外注意!目前对部分测试结果研究发现,仅需均匀导入30条数据即可得到稳定的分析结果,即便如此,我们还是建议遵循均匀导入至少70-150条数据进行拟合,可以兼顾计算效率和数据稳定性。大家可以根据实际的情况进一步进行测试和方法验证。


2、数据采集频率


若样品沉降需要3h38min,收集90条数据,一个检测波长,同时采集7个样品,那么数据的采集频率为145S较为合适(见图3)。7个样品、一个波长,即便频率设置为20S, 其真实完成的扫描间隔也约为145S(见图2)。若需要重复检测某个固定的样品(如单抗,AAV等),为了保证数据收集和导入分析的一致性,可以固定采集频率,则无论检测一个样品还是若干个样品,其数据的采集条数都相同,该做法可以保证在不同样品个数情况下,数据分析导入的条数和间隔的一致性。单个波长、扫描数据条数90条、扫描频率20S,采集不同个数的Cell,时间间隔如下(图4-10)。




图1:拉姆方程(上)和数据扫描示例(下)


图2:7个Cell、单个波长、扫描数据条数90条,扫描频率20S


图3:7个Cell、单个波长、扫描数据条数90条,扫描频率145S


图4:1个Cell、单个波长、扫描数据条数90条,扫描频率20S


图5:2个Cell、单个波长、扫描数据条数90条,扫描频率20S


图6:3个Cell、单个波长、扫描数据条数90条,扫描频率20S


图7:4个Cell、单个波长、扫描数据条数90条,扫描频率20S


图8:5个Cell、单个波长、扫描数据条数90条,扫描频率20S


图9:6个Cell、单个波长、扫描数据条数90条,扫描频率20S


图10:7个Cell、单个波长、扫描数据条数90条,扫描频率20S

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作者简介: 贝克曼库尔特公司对颗粒特性的研究始于上世纪的四十年代。从发明电子感应区技术(库...[详细]
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