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合成着色剂的介绍

合成着色剂又称合成色素，常以苯、甲苯、萘等化工产品为原料，经过磺化、偶合、缩合、偶氮化等一系列有机反应制备而成。合成着色剂由于成本低廉、色泽鲜艳，着色力强，色调多样，故被广泛应用；但它有一定的毒性（包括毒性、致泻性和致癌性），过多食用会危害人体健康。因此，国家对合成着色剂的使用严格控制了范围和Zda限量值。

果蔬汁类饮料中合成着色剂的安全限量

国家食品安全标准《GB2760-2014食品安全国家标准 食品中食品添加剂使用标准》规定果蔬汁类饮料中苋菜红允许量不得超过0.25 g/kg，赤藓红和胭脂红允许量不得超过0.05 g/kg，日落黄、柠檬黄和诱惑红允许量不得超过0.1 g/kg。

一、实验目的

本研究利用固相萃取法作为样品的前处理方法，HPLC法作为分析方法，检测果汁饮料中合成色素的含量，同时比较了不同材质的滤膜对合成色素回收率的影响。该方法可简化样品的前处理过程，节省有机溶剂的使用，操作简便。

二、实验目标物

赤藓红（CAS:568-63-8），苋菜红（CAS:915-67-3），胭脂红（CAS:2611-82-7），诱惑红（CAS:2611-82-7），日落黄（CAS:2783-94-0），柠檬黄（CAS:1934-21-0）。

三、应用范围

本方法适用于饮料中合成着色剂的HPLC检测及确证。

四、参考标准

《GB 5009.35-2016食品安全国家标准食品中合成着色剂的测定》。

五、实验材料

biocomma® Copure® 聚酰胺固相萃取柱500 mg/6 mL (Cat. No. COPACR66)，0.45 μm亲水聚四氟乙烯（PTFE）针式过滤器(Cat. No.SF130-45-PTFE-HL)。

六、实验步骤

1、样品提取

称取试样1.0 g(极ng确至0.001 g)于50 mL离心管中，加入6 mL 去离子水，涡旋30 s，超声振荡提取15 min，4000 r/min离心5 min，取上清液。剩余残渣再加入6 mL去离子水，重复操作一次。合并两次上清液。用20%柠檬酸溶液调节溶液pH=3~4，待上样。

2、SPE柱净化

(1)活化：净化前用5 mL甲醇、5 mL去离子水活化。

(2)上样和洗脱：将提取液以1 mL/min的速度过柱，弃去滤液，用5 mL淋洗液（甲醇：甲酸：水=4:2:4）淋洗，弃去淋洗液，将小柱抽干，再用6 mL 10%氨化甲醇溶液洗脱并收集洗脱液。

(3)重新溶解：45℃缓慢氮吹至近干，加2 mL 混合流动相（A:B=1:1）溶解。涡旋混合1 min，过0.45 μm亲水PTFE滤膜，待上机测试。

3、HPLC条件

设备：Waters Alliance 2695

色谱柱：InerSustain®-C18 (4.6X250 mm,5 μm)

检测器：Waters 2487双波长检测器   

检测波长：254 nm

流动相：A：乙腈   B：0.1%甲酸水溶液

洗脱方式：梯度洗脱

表1 梯度洗脱条件

流速：1 mL/min

进样体积：10 μL

七、实验结果

1、4.0 mg/kg 果蔬汁饮料基质中合成着色剂的添加回收结果

表2  4.0 mg/kg果蔬汁饮料基质中合成着色剂的添加回收结果

2、添加水平为4.0 mg/kg果蔬汁类饮料基质中合成着色剂检测的液相色谱图

图1 添加水平为4.0 mg/kg果蔬汁类饮料基质中合成着色剂检测色谱图

3、样品过亲水PTFE、疏水PTFE、亲水PES和尼龙4种滤膜回收率比较分析

表3  样品过亲水PTFE、疏水PTFE、亲水PES和尼龙4种滤膜回收率分析

结论：逗点生物开发出使用固相萃取法检测果汁饮料中合成色素的含量，同时比较了不同材质的滤膜对合成色素回收率的影响，其中柠檬黄平均回收率102.4%，RSD 1.0%，苋菜红平均回收率100.1%，RSD 3.6%，胭脂红平均回收率104.5%，RSD 4.6%，日落黄平均回收率99.8%，RSD 7.3%，诱惑红平均回收率105.9%，RSD 3.3%，赤藓红平均回收率98.1%，RSD 8.4%，同时亲水系PTFE滤膜对合成色素的回收率结果影响Z小，效果**。