ELISA体外诊断试剂生产技术指导原则

ELISA试剂盒各组分的生产
诊断试剂盒主要组分的生产包括包被反应板、标记物制备、各种溶液的配置、冻干、分包装等步骤；并通过产品的半成品检验和成品检验两个质控过程来完成。
(一)固相载体的制备（因不同产品使用的包被载体有很大区别，在此以标准96孔微孔反应板为例进行描述）
1．包被板的准备
准备经检验合格的包被板，记录批号、数目、状态标识。
质控项目：尺寸，外观，包装。
2．包被液的配制
配制包被缓冲液，加入包被的抗体或抗原到工作浓度，混合均匀，即成所需的包被液，工作浓度的包被液应在规定时间内使用。
质控项目：包被缓冲液配方，pH值，包被物成份。
3．包被板的包被
包被液按工艺要求加入包被板。记录所包被的包被板数量。
质控项目：包被体积，温度，时间，过程监控。
4．洗板工作液的配制（按各单位工艺要求，可以不洗板）
按配方配制洗板工作液。
质控项目：洗板工作液配方，pH值。
5．封闭液的配制
按配方配制封闭液。
质控项目：封闭液配方，pH值。
6．洗板和封闭
包被完成后，抽去孔内包被液，用洗板工作液洗板后（按各单位工艺要求，可以不洗板），加入封闭液。
质控项目：封闭体积，温度，时间，过程监控。
质检项目：封闭前检验包被均一性。
7．抽干
封闭后的反应板，抽干孔内液体。
质控项目：过程监控。
8．干燥
反应板应按工艺的要求进行干燥。
质控项目：温度，湿度，时间，过程监控等。
9．密封包装
将干燥后的反应板用铝箔袋密封包装，内放干燥剂（按各单位工艺要求，可以不放）。
质控项目：密封性能，标示及效期等。
10．反应板（半成品）检验
对装袋密封后的反应板进行抽样检验，外观、板内变异、板间变异。
(二)滴配过程
1．酶结合物的制备（根据各产品实际情况，该步骤可不进行）
采用常规过碘酸钠乙二醇法将相关的抗体（或抗原）标记辣根过氧化物酶（或其他酶），酶标记后的抗体（或抗原）应加入适当的保护剂保存于低温。
质控项目：标记方法，过程控制。
2．酶结合物的鉴定
(1)功能性实验
将酶结合物用酶稀释液稀释后，用于产品的滴配，其结果应符合相关试剂盒的质量标准。
(2)稳定性
将酶结合物用酶稀释液稀释，进行2-8℃，及热稳定性实验，滴配结果应符合相关试剂盒的质量标准。
3．酶结合物稀释液
按酶结合物稀释液的配方配制，存放在2-8℃保存，并于规定时间内使用。
质控项目：酶结合物稀释液配方，pH值。
4．酶结合物工作浓度的滴配
取酶结合物，用酶结合物稀释液稀释到不同的浓度，用已制备好的反应板进行滴配。测定系列标准品及相应的质控品，确定使体系达到Zyou的酶结合物工作浓度。
5．酶结合物工作液配制
将所需量酶结合物和酶结合物稀释液按滴配浓度混合均匀。
质检项目：分装前检验，用配套的反应板进行检验，外观、灵敏度、质控品测定值、定量产品应作校准品线性检测。
6．酶结合物工作液的分装
按工艺要求分装酶结合物工作液。
质控项目：分装前确认试剂名称、批号、数量，分装量，封装后密封性。
7．酶结合物工作液（半成品）检验
对分装后的酶结合物工作液进行抽样检验，外观、分装量、灵敏度、ELISA试剂盒校准品剂量-反应曲线线性、质控品测定值。
(三)校准品、阴阳性对照或质控品的制备
1．稀释液
按稀释液的配方配制，存放在2?8℃或-20℃保存，并于有效期内使用。
质控项目：稀释液配方，pH值。
2．校准品、阴阳性对照或质控品的配制
校准品、阴阳性对照或质控品的配制要具有溯源性，可参照国家标准品、WHO标准品或其他级别的标准物质进行配制。
质检项目：分装前检验，准确性、剂量－反应曲线线性（定量产品）、质控品测定值。
3．校准品、阴阳性对照或质控品的分装
按工艺要求分装校准品、阴阳性对照或质控品。
质控项目：分装前确认试剂名称、批号、数量，分装量。
4．校准品、阴阳性对照或质控品（半成品）检验
对分装后的校准品、阴阳性对照或质控品进行抽样检验，外观、分装量、准确性、剂量－反应曲线线性（定量产品）、质控品测定值。
(四)化学发光底物的制备
1．底物缓冲液
按底物缓冲液的配方配制，存放在2-8℃保存，并于有效期内使用。
质控项目：底物缓冲液配方，pH值。
2．化学发光底物（氧化剂和发光剂）的配制
分别按氧化剂和发光剂的配方在底物缓冲液中加入相应的氧化剂和发光剂
质控项目：氧化剂和发光剂配方。
质检项目：分装前检验，本底、发光强度。
3．化学发光底物（氧化剂和发光剂）的分装
按工艺要求分装化学发光底物（氧化剂和发光剂）。
质控项目：分装前确认试剂名称、批号、数量，分装量，封装后密封性。
4．化学发光底物（半成品）检验
对分装后的化学发光底物进行抽样检验，外观、分装量、本底、灵敏度、发光强度。
（五）铕标记物的制备
针对不同的标记生物原料，确定不同的标记制备工艺，包括铕-DTTA与标记生物原料的比例，标记温度和标记时间、标记得率的计算标准等。在实际操作过程中要求严格按照SOP进行操作
（六）冻干
各种冻干品都需建立各自的冻干工艺，冻干品外观应该呈现疏松的粉末状固体，具有一定的形状，复溶完全、迅速，呈澄清透明液体。
（七）分装、灯检和贴签
分装量用减重称量法进行测量，把质量换算成体积后进行分装量的控制。灯检是目测检查各组分的色泽、分装量以及是否混浊、有杂质等。
（八）包装
根据ELISA试剂盒包装SOP要求及说明书的要求，以流水线操作形式进行包装。包装时应严格检查品名、批号、装量，认真核对各物料数量，并在关盒前进行复核。

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