人脐静脉内皮细胞（HUVEC）的细胞培养实验

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【导读】1.细胞培养实验中将15-20cm长的新生儿脐带放入无菌的PBS溶液中储存。（注：4℃下最多贮存24小时，室温下不超过6小时，否则废弃）2.用一个钝头的针头扎入脐带静脉管中，用无菌...

1.细胞培养实验中将15-20cm长的新生儿脐带放入无菌的PBS溶液中储存。（注：4℃下Z多贮存24小时，室温下不超过6小时，否则废弃）

2.用一个钝头的针头扎入脐带静脉管中，用无菌的PBS溶液冲洗3-5次，将污血冲洗干净为止。

3.用手术钳夹紧脐带下端，加入15ml的胶原酶（1mg/ml）室温下消化15-20分钟，并不时上下摇动脐带。

4.消化完后，将下端手术钳松开，消化液流入一个50ml无菌离心管中，用无菌的PBS溶液冲洗脐带2-3次。

5.将收集液离心（2000转/分）3分钟。

6.倒去上清，加入10mlM199培养基（加入10U/ml的bFGF），用弯管吹散细胞，将所有液体转入一个用明胶包被好的培养瓶中，37℃培养。（注：每个培养瓶中加入3-4ml无菌的1%的明胶溶液，摇匀使得明胶溶液完全铺满瓶底，放入37℃孵育，Z少2小时，用前将明胶溶液倒了即可，明胶包被有利于细胞贴壁。）

7.细胞培养实验培养24小时后，倒掉培养基，并用无菌的PBS溶液清洗2-3次，洗掉红细胞和死细胞，加入10ml新鲜的M199培养基。

8.以后每2天换一次培养基（每次换掉2/3的培养基）。

9.一般培养5-7天，细胞可长满至80-90%单层，这时可以传代。

10.倒掉细胞培养实验中的培养基，用无菌的PBS溶液清洗2-3次，加入2-3ml消化液（0.25%胰酶+0.1%EDTA）消化细胞，在显微镜下观察，一旦细胞变圆，即加入2-3倍的有血清的DMEM培养基终止反应。

11.用弯管将细胞吹打下来，并将所消化的细胞转移到一个50ml无菌离心管中，2000转/分，离心3分钟。

12.倒掉上清，加入10ml新鲜培基，一般一瓶细胞可传代3-4瓶，以后照此传代培养。

13.一般传代2-3代（培养了20天左右）用于做各种实验效果Z好。

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2004-09-18 09:23:03

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