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- 【导读】 猪肺炎支原体(MP)酶联免疫分析(ELISA)试剂盒实验说明l本试剂盒仅供科研使用。l本试剂盒用于体外定性检测猪血清、血浆、组织、细胞上清及相关液体样本中猪肺炎支原体(M...
猪肺炎支原体(MP)酶联免疫分析(ELISA)试剂盒实验说明
l本试剂盒仅供科研使用。
l本试剂盒用于体外定性检测猪血清、血浆、组织、细胞上清及相关液体样本中猪肺炎支原体(MP)水平。
l有效期:6个月
l保存条件:2-8℃
实验原理:
本试剂盒采用双抗体夹心酶联免疫法(ELISA)测定标本中猪肺炎支原体(MP)。用纯化的猪肺炎支原体(MP)抗体包被微孔板,制成固相抗体,可与样品中猪肺炎支原体(MP)相结合,经洗涤除去未结合的抗原和其他成分后再与HRP标记的猪肺炎支原体(MP)抗体结合,形成抗体-抗原-酶标抗体复合物,经过彻底洗涤后加底物TMB显色。TMB在HRP酶的催化下转化成蓝色,并在酸的作用下转化成Z终的黄色。用酶标仪在450nm波长下测定吸光度(OD值),与CUTOFF值相比较,从而判定标本中猪肺炎支原体(MP)的存在与否。
猪肺炎支原体(MP)酶联免疫分析(ELISA)试剂盒组成:
试剂盒组成48孔配置96孔配置保存
说明书1份1份R.T.
封板膜2片(48)2片(96)R.T.
密封袋1个1个R.T.
酶标包被板1×481×962-8℃保存
阴性对照0.5ml×1瓶0.5ml×1瓶2-8℃保存
阳性对照0.5ml×1瓶0.5ml×1瓶2-8℃保存
酶标试剂3ml×1瓶6ml×1瓶2-8℃保存
样品稀释液3ml×1瓶6ml×1瓶2-8℃保存
显色剂A液3ml×1瓶6ml×1瓶2-8℃保存
显色剂B液3ml×1瓶6ml×1瓶2-8℃保存
终止液3ml×1瓶6ml×1瓶2-8℃保存
浓缩洗涤液(20ml×20倍)×1瓶(20ml×30倍)×1瓶2-8℃保存
猪肺炎支原体(MP)酶联免疫分析(ELISA)试剂盒样本处理及要求:
1.血清:室温血液自然凝固10-20分钟,离心20分钟左右(2000-3000转/分)。仔细收集上清,保存过程中如出现沉淀,应再次离心。
2.血浆:应根据标本的要求选择EDTA或柠檬酸钠作为抗凝剂,混合10-20分钟后,离心20分钟左右(2000-3000转/分)。仔细收集上清,保存过程中如有沉淀形成,应该再次离心。
3.尿液:用无菌管收集,离心20分钟左右(2000-3000转/分)。仔细收集上清,保存过程中如有沉淀形成,应再次离心。胸腹水、脑脊液参照实行。
4.细胞培养上清:检测分泌性的成份时,用无菌管收集。离心20分钟左右(2000-3000转/分)。仔细收集上清。检测细胞内的成份时,用PBS(PH7.2-7.4)稀释细胞悬液,细胞浓度达到100万/ml左右。通过反复冻融,以使细胞破坏并放出细胞内成份。离心20分钟左右(2000-3000转/分)。仔细收集上清。保存过程中如有沉淀形成,应再次离心。
5.组织标本:切割标本后,称取重量。加入一定量的PBS,PH7.4。用液氮迅速冷冻保存备用。标本融化后仍然保持2-8℃的温度。加入一定量的PBS(PH7.4),用手工或匀浆器将标本匀浆充分。离心20分钟左右(2000-3000转/分)。仔细收集上清。分装后一份待检测,其余冷冻备用。
6.标本采集后尽早进行提取,提取按相关文献进行,提取后应尽快进行实验。若不能马上进行试验,可将标本放于-20℃保存,但应避免反复冻融.
7.不能检测含NaN3的样品,因NaN3YZ辣根过氧化物酶的(HRP)活性。
猪肺炎支原体(MP)酶联免疫分析(ELISA)试剂盒操作步骤:
1.编号:将样品对应微孔按序编号,每板应设阴性对照2孔、阳性对照2孔、空白对照1孔(空白对照孔不加样品及酶标试剂,其余各步操作相同)
2.加样:分别在阴、阳性对照孔中加入阴性对照、阳性对照50μl。然后在待测样品孔先加样品稀释液40μl,然后再加待测样品10μl。加样将样品加于酶标板孔底部,尽量不触及孔壁,轻轻晃动混匀,
3.温育:用封板膜封板后置37℃温育30分钟。
4.配液:将30(48T的20倍)倍浓缩洗涤液加蒸馏水至600ml后备用
5.洗涤:小心揭掉封板膜,弃去液体,甩干,每孔加满洗涤液,静置30秒后弃去,如此重复5次,拍干。
6.加酶:每孔加入酶标试剂50μl,空白孔除外。
7.温育:操作同3。
8.洗涤:操作同5。
9.显色:每孔先加入显色剂A50μl,再加入显色剂B50μl,轻轻震荡混匀,37℃避光显色15分钟
10.终止:每孔加终止液50μl,终止反应(此时蓝色立转黄色)。
11.测定:以空白空调零,450nm波长依序测量各孔的吸光度(OD值)。测定应在加终止液后15分钟以内进行。
结果判定:
试验有效性:阳性对照孔平均值≥1.00;阴性对照平均值≤0.10
临界值(CUTOFF)计算:临界值=阴性对照孔平均值+0.15
阴性判定:样品OD值<临界值(CUTOFF)者为猪肺炎支原体(MP)阴性
阳性判定:样品OD值≥临界值(CUTOFF)者为猪肺炎支原体(MP)阳性
注意事项
1.操作严格按照猪肺炎支原体(MP)酶联免疫分析(ELISA)试剂盒说明书进行,本试剂不同批号组分不得混用。
2.试剂盒从冷藏环境中取出应在室温平衡15-30分钟后方可使用,酶标包被板开封后如未用完,板条应装入密封袋中保存。
3.浓洗涤液可能会有结晶析出,稀释时可在水浴中加温助溶,洗涤时不影响结果。
4.封板膜只限一次性使用,以避免交叉污染。
5.底物请避光保存。
6.试验结果判定必须以酶标仪读数为准,使用双波长检测时,参考波长为630nm
7.所有样品,洗涤液和各种废弃物都应按传染物处理。终止液为2M的硫酸,使用时必须注意安全。
保存条件及有效期
1.试剂盒保存:2-8℃。
2.有效期:6个月
- 2004-07-16 10:28:52
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