MicBio-II酶标板恒温振荡器在禽肉中氯霉素药残的快速检测使用

近年来，在对外出口畜禽食用产品时，对氯霉素残留的检测成为必不可少的检测指标。国外一般要求畜禽食用产品中氯霉素不得超过1ng／ml，这对检测手段的灵敏度提出了很高的要求。目前我国国内常用的检测氯霉素药残的方法是使用液相法或气相色谱法来对其进行检测，但这种检测方法对样品的处理比较复杂，对实验操作技术要求很高，不利于在基层生产单位推广应用。本实验根据酶联免疫吸附（ELIsA）借助于氯霉素残留快速检测试剂盒对鸡肉组织残留的氯霉素进行检测，处理简单，操作步骤简便，可以快速有效地测定出肉品中的氯霉素残留量，其对氯霉素检测的灵敏度可以达到
0．03ng／ml的水平。
1材料
1．1被检样品市场上随机抽取的鸡肉样品，共92份。
1．2快速检测试剂盒购自合肥艾本森科学仪器有限公司，美国Neogen公司生产，其组成为：（1）酶标板，氯霉素抗体包被；（2）氯霉素标准溶液；（3）酶标结合物；（4）酶标结合物稀释液；（5）底物溶液；（6）
反应终止液；（7）标样／试样稀释液；（8）清洗液。以上各试剂4"C保存，使用时回升至室温。MicBio-II酶标板恒温振荡器，ABSON公司生产，
2检测方法
2．1肉样的处理方法（1）从被检测的肉样中取5g样品放入研钵中研磨成肉浆，用量筒量取20mlPBS
缓冲液（pH7．2）倒入肉浆中，然后将其倒入5mI大离心管中。（2）将离心管在震荡器上剧烈震荡1min，使PBS缓冲液充分发挥作用。（3）在15℃的条件下以3000转／min，离心15min。（4）离心后取0．2ml上
层液用0．2ml标样／试样稀释液稀释。
2．2检测程序按照1：100稀释酶标结合物。用移液管移取100uL经过稀释的氯霉素标准液或样品到相应的微量滴定板孔中，每孔中再加入50uL经过稀释的酶标结合物。盖上塑料膜后，将酶标板放入MicBio-II酶标板恒温振荡器，温育120min。洗板3次：向每个孔中加入300uL清洗液，倒掉孔中的溶液，然后在纸巾上拍击酶标板，重复以上步骤3次（如果冲洗不完全会影响检测结果）。向反应孔中加入100uL底物溶液，进行显色反应。让反应在室温下暗处充分进行30min。到时间后向反应孔中加入100uL1M的硫酸（反应终止液），颜色由兰色变成黄色。充分混匀后，用酶标仪在450nm波长处检测吸光度（OD值）。颜色在30min内稳定。
3结果
根据酶标仪测定数据，将各样品吸光度与氯霉素标准溶液的吸光度对比，有20个样品氯霉素含量在低
于0．5ng／g，有28个肉样氯霉素含量在0．5～1．0ng／g之间，有l8个肉样氯霉素含量在1～5ng／g之间，有16个肉样氯霉素含量在5～10ng／g之间有，7个肉样氯霉素含量在10～50ng／g之间，有3个肉样的氯霉素含量大于50ng／g，被检92份鸡肉样品中47．83％的样品氯霉素含量超标（≥1ng/g）。
4讨论
氯霉素是一种广谱抗生索，具有较强的KJ杀菌作用，由于价格比较便宜且治LX果比较明显，过去在畜禽养殖中被广泛应用。但食品中氯霉素对人体的缝康会造成严重的影响，如再生障碍性贫血及粒状细胞缺乏症，新生儿、早产儿灰婴综合征等。因此，联合国粮农组织／世界卫生组织食品添加剂专家委员会建议禁止此药使用于食用动物，美国、加拿大以及欧共体各国已严格控制将其用于食用动物。由于历史的原因，目前我国应用含有氯霉素成分的药物仍不在少数。为了维护人体健康，扩大我国的肉制品外贸出口，彻底解决氯霉素在畜禽肉制品以及水产品中的残留问题，除用药、制定动物的停药期外，也需要加强检测研究。肉类产品巾微生物检测法，检出氯霉素的Zdi浓度为0．25～5．00ng／ml。气相或液相色谱的测定灵敏度虽能达到10ng／ml，但其对样品的处理比较复杂，对实验操作人员的要求很高，稳定性与重复性均比较差，不利于在基层生产单位推广应用。应用ELISA法检测氯霉素残留的灵敏度可达0．03ng／ml的水平，是常规方法的数百倍，而且操作简便，检测迅速。本方法不仅可用于各种肉制品中氯霉素残留的检测，而且可以用来检测牛奶、蜂蜜、奶粉等，且结果稳定，重复性好，值得推广应用。

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