免疫印迹

又称蛋白质印迹，它是根据抗原抗体的特异性结合检测复杂样品中的某种蛋白的方法。是在凝胶电泳和固相免疫测定技术基础上发展起来的一种新的免疫生化技术。由于具有SDS-PAGE的高分辨力和固相免疫测定的高特异性和敏感性，现已成为蛋白分析的一种常规技术。常用于鉴定某种蛋白，并能对蛋白进行定性和半定量分析。
言科生物根据多年的经验选用了目前市场上质量与口碑较好的试剂，为广大的客户提供优质的WB服务。费用：每张膜1000元，客户自己提供一抗，或者由我们公司代购，常规二抗免费提供，每张膜可以做6-8个样品（各种阴性对照和阳性对照计入样品数内），承诺实验周期为2周。

主要实验步骤如下：
1、蛋白质准备；
2、蛋白质定量；
3、变性聚丙烯酰胺不连续凝胶电泳（SDS-PAGE）：将准备好的样品液和预染蛋白marker分别上样，标准加进diyi个孔中，电泳分离蛋白。　
4、蛋白质转移到PVDF膜，按Bio-Rad蛋白转移装置说明组装滤纸凝胶纤维素夹层，30mA恒流条件下，4℃转移过夜。
5、westernblot膜的封闭和抗体孵育；
膜在5％脱脂奶粉溶液中室温孵育1小时以封闭膜上的非特异结合。
封闭过的膜加入一抗室温孵育1.5小时，抗原抗体结合。
加入HRP标记的二抗体以结合一抗，室温孵育膜1小时。加入HRP标记的GAPDH抗体可同时检测GAPDH含量。
6、westernblot结果检测：化学发光法检测，膜与化学发光底物孵育，经X胶片曝光显影。图片扫描保存为电脑文件，并用GIS1000分析软件将图片上每个特异条带灰度值的数字化；
7、westernblot数据分析：目的蛋白的灰度值除以内参GAPDF的灰度值以校正误差，所得结果代表某样品的目的蛋白相对含量；
8、提供实验报告，包括详细的实验方法及实验结果的相关数据。

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