还原糖含量的测定实验步骤 还原糖含量的测定实验步骤

还原糖含量的测定实验步骤

1．标准曲线的制作：
在一系列刻度试管中，分别加入200μg／mL标准葡萄糖0、0.1、0.2、0.3、0.4、0.5及0.6mL，再顺序加入蒸馏水2、1.9、1.8、1.7、1.6、1.5及1.4mL，配成浓度分别为0、10、20、30、40、50及60μg/mL的系列葡萄糖溶液。每试管加入铜试剂2mL，混匀后沸水浴中加热10min，立即冷却，再加入2mL砷钼酸试剂，振荡两分钟后稀释到20mL，用分光光度计在620nm波长下比色，测其光密度OD620nm（做一式两份）。以糖浓度微克数为横坐标，光密度OD620nm为纵坐标，绘制标准曲线。
2．植物样品中还原糖的提取：
将样品洗净，吸干其表面水分，切碎混匀，称取1g放入研钵中，加入约0.5g石英砂，磨成匀浆，加水将样品由玻璃漏斗冲入100mL容量瓶中，加水达70～80mL，摇匀后置于80℃恒温水浴上浸提0.5h。
待上述样品冷却后，沉淀蛋白质，加入5％硫酸锌5mL，再慢慢滴入0.3mol/LBa（OH）25mL，以沉淀蛋白质。振荡后静置，至上层出现清液后再加一滴Ba（OH）2，直至无白色沉淀时，向容量瓶加水至刻度。
3．还原糖含量的测定：
过滤上述已定容的样品液，取5mL滤液，再定容到100mL（此步视样品的含糖量而定）。取已稀释的溶液2mL，与标准葡萄糖显色法相同：加铜试剂2mL，煮沸10min，加砷钼酸试剂2mL，振荡2mL，定容到15ml，620nm波长下比色，记下光密度OD620nm（至少重复两次）。
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