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- 【导读】当我们在养细胞的时候,有可能会出现如下的状况:细胞生长缓慢、细胞变形、碎片增加、悬浮细胞容易成团、培养基提前变色、镜下发现有小黑点。本文威正翔禹/缔一生物为您分析1、支原体的分离培...
当我们在养细胞的时候,有可能会出现如下的状况:细胞生长缓慢、细胞变形、碎片增加、悬浮细胞容易成团、培养基提前变色、镜下发现有小黑点。本文威正翔禹/缔一生物为您分析
1、支原体的分离培养
它是支原体污染鉴定的金标准,准确,价格便宜。但支原体在分离培养的过程中,要长出明显克隆至少需要4周时间,所需时间较长。
2、ELISA方法
检测步骤复杂,出现误差的几率较高,对实验者操作技巧有要求。同时试剂盒成本较高,普遍不被选用。
3、DNA荧光染色法
它采用荧光染色剂Hoechst33258和支原体DNA富含A-T的区域结合。价格适中。由于DNA检测需要将可疑样品与指示细胞共同培养,因此一般需要几天后才出结果。有假阳性和假阴性,需要与其他方法结合使用。
4、PCR技术
它根据支原体核糖体16s-23srRNA的特异保守序列设计引物,对待检样本DNA进行扩增,通过对扩增产物的大小分析作出诊断。操作简单、速度快,只需2-3小时即可出结果,通量高,价格适中。但是,不同厂家生产的PCR检测试剂盒由于引物及内在设计的不同,其准确度和敏感度有天壤之别。
目前,被各大实验室及生物药厂普遍选用的是德国MinervaBiolabs公司开发生产的支原体PCR检测试剂盒。试剂盒在267bp的条带,涵盖了欧洲《药典》中Z易感染细胞的26种支原体亚型,保证了其chao强的敏感度;通过内控条带的设计,防止了假阴性的发生。我国农业部在2008年猪蓝耳病疫苗研制的ZD项目中,实验者用此检测法与培养法做了超过100次的平行比对实验,结果全部一致,假阳性率和假阴性率为零。
因此,用PCR方法检测支原体,其准确性与选择的试剂盒的质量有直接相关性。
综上所述,您是不是已经对目前普遍使用的支原体检测方法有几种,有所了解。如果还有其他疑问,请咨询威正翔禹/缔一生物ZS专家。
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- 2005-01-27 09:23:08
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